1.一种低成本提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)取植物叶片放入装有钢珠的离心管中,干燥后通过研磨仪研磨成粉;
(2)向步骤(1)中的离心管内加入裂解缓冲液和rnasea,混匀,50~60℃水浴15~20min;
(3)向步骤(2)中的离心管内加入醋酸钠溶液,混匀,冰浴4~6min,室温下离心,取上清液;
(4)将步骤(3)取得的上清液加入装有硅粉-dna吸附液的离心管中,混匀,室温放置15~20min后离心,弃上清液;
(5)加入洗脱液,混匀,室温下离心,弃上清液;
(6)重复步骤(5)1~2次;
(7)室温下离心,晾干30~40min;
(8)加入tebuffer溶解dna,混匀,室温放置5~8min后离心,取上清液,即为提取的植物dna,-20°c下保存备用。
2.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,所述步骤(2)中裂解缓冲液的制备方法为:将sds溶于10*te缓冲液得到裂解缓冲液,所述sds质量与所述10*te缓冲液体积比为5g:1l。
3.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,所述步骤(4)中硅粉-dna吸附液制备方法为:
s1.将硅粉加入离心管中;
s2.向步骤s1中离心管加入dh2o,涡旋混匀15~20min,弃去液体,所述dh2o体积与步骤s1中硅粉的质量比为30ml:800mg;
s3.重复步骤s2两次;
s4.加入dh2o,充分混匀得到硅粉悬浮液,所述硅粉悬浮液中硅粉与dh2o体积比为1:1;
s5.取步骤s4得到的硅粉悬浮液于离心管,加dh2o涡旋混匀,11000~13000rpm离心10~20sec,弃上清液,所述硅粉悬浮液与dh2o的体积比为0.05:1;
s6.加入ki溶液,充分混匀得到硅粉-dna吸附液,所述ki溶液溶度为6mol/l,所述ki溶液与步骤s5中硅粉悬浮液的体积比为700:50。
4.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,所述步骤(5)中洗脱液由以下方法制备:采用95%乙醇将nacl溶液稀释100倍得到洗脱液,所述nacl溶液浓度为5mol/l,所述洗脱液现配现用。
5.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,所述醋酸钠溶液浓度为2~3mol/l,ph为5.2;所述rnasea浓度为10mg/ml。
6.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,每100mg所述植物叶片,所需的所述裂解缓冲液体积为800μl,所需的所述rnasea体积为15μl,所需的所述醋酸钠溶液体积为200μl,所需的所述硅粉-dna吸附液体积为700µl,所需的所述洗脱液体积为500μl,所需的所述te缓冲液体积为150µl。
7.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,所述混匀为漩涡混匀;所述步骤(1)研磨转速为1500r/min,研磨时间2min;所述步骤(3)、(4)或(8)中离心条件为:11000~13000rpm,5~8min;所述步骤(5)离心条件为:11000~13000rpm,3~5min;所述步骤(7)离心条件为:11000~13000rpm,0.5~1min。
8.根据权利要求7所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,所述离心管包括管体和管盖,所述管体上端开口,上部为圆柱体部、下部为圆锥体部,所述上部和下部连接并呈一体结构;在所述管体上部内壁设置凸起的竖直条状结构,所述竖直条状结构与所述管体衔接处为圆角过渡;所述管盖匹配盖于所述管体顶端,所述管盖上开设有用于注入溶液的加液孔和用于抽取溶液的吸液孔,所述加液孔和吸液孔上配有弹性橡胶盖。
9.如权利要求1~8任一项所述的方法在百香果、甘蔗、红薯、木薯或荸荠植物总dna提取的应用。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于,所述百香果或荸荠植物总dna用于遗传多样性scot分子标记。