一种低成本提取干燥植物叶片DNA的方法与应用与流程

文档序号:21198366发布日期:2020-06-23 19:01阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种低成本提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)取植物叶片放入装有钢珠的离心管中,干燥后通过研磨仪研磨成粉;

(2)向步骤(1)中的离心管内加入裂解缓冲液和rnasea,混匀,50~60℃水浴15~20min;

(3)向步骤(2)中的离心管内加入醋酸钠溶液,混匀,冰浴4~6min,室温下离心,取上清液;

(4)将步骤(3)取得的上清液加入装有硅粉-dna吸附液的离心管中,混匀,室温放置15~20min后离心,弃上清液;

(5)加入洗脱液,混匀,室温下离心,弃上清液;

(6)重复步骤(5)1~2次;

(7)室温下离心,晾干30~40min;

(8)加入tebuffer溶解dna,混匀,室温放置5~8min后离心,取上清液,即为提取的植物dna,-20°c下保存备用。

2.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,所述步骤(2)中裂解缓冲液的制备方法为:将sds溶于10*te缓冲液得到裂解缓冲液,所述sds质量与所述10*te缓冲液体积比为5g:1l。

3.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,所述步骤(4)中硅粉-dna吸附液制备方法为:

s1.将硅粉加入离心管中;

s2.向步骤s1中离心管加入dh2o,涡旋混匀15~20min,弃去液体,所述dh2o体积与步骤s1中硅粉的质量比为30ml:800mg;

s3.重复步骤s2两次;

s4.加入dh2o,充分混匀得到硅粉悬浮液,所述硅粉悬浮液中硅粉与dh2o体积比为1:1;

s5.取步骤s4得到的硅粉悬浮液于离心管,加dh2o涡旋混匀,11000~13000rpm离心10~20sec,弃上清液,所述硅粉悬浮液与dh2o的体积比为0.05:1;

s6.加入ki溶液,充分混匀得到硅粉-dna吸附液,所述ki溶液溶度为6mol/l,所述ki溶液与步骤s5中硅粉悬浮液的体积比为700:50。

4.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,所述步骤(5)中洗脱液由以下方法制备:采用95%乙醇将nacl溶液稀释100倍得到洗脱液,所述nacl溶液浓度为5mol/l,所述洗脱液现配现用。

5.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,所述醋酸钠溶液浓度为2~3mol/l,ph为5.2;所述rnasea浓度为10mg/ml。

6.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,每100mg所述植物叶片,所需的所述裂解缓冲液体积为800μl,所需的所述rnasea体积为15μl,所需的所述醋酸钠溶液体积为200μl,所需的所述硅粉-dna吸附液体积为700µl,所需的所述洗脱液体积为500μl,所需的所述te缓冲液体积为150µl。

7.根据权利要求1所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,所述混匀为漩涡混匀;所述步骤(1)研磨转速为1500r/min,研磨时间2min;所述步骤(3)、(4)或(8)中离心条件为:11000~13000rpm,5~8min;所述步骤(5)离心条件为:11000~13000rpm,3~5min;所述步骤(7)离心条件为:11000~13000rpm,0.5~1min。

8.根据权利要求7所述的提取干燥植物叶片dna的方法,其特征在于,所述离心管包括管体和管盖,所述管体上端开口,上部为圆柱体部、下部为圆锥体部,所述上部和下部连接并呈一体结构;在所述管体上部内壁设置凸起的竖直条状结构,所述竖直条状结构与所述管体衔接处为圆角过渡;所述管盖匹配盖于所述管体顶端,所述管盖上开设有用于注入溶液的加液孔和用于抽取溶液的吸液孔,所述加液孔和吸液孔上配有弹性橡胶盖。

9.如权利要求1~8任一项所述的方法在百香果、甘蔗、红薯、木薯或荸荠植物总dna提取的应用。

10.如权利要求9所述的应用,其特征在于,所述百香果或荸荠植物总dna用于遗传多样性scot分子标记。


技术总结
本发明涉及分子生物学技术领域,具体公开了一种低成本提取干燥植物叶片DNA的方法,先对叶片进行干燥、研磨成粉;然后加入裂解缓冲液和RNase A混匀后水浴提取,加入醋酸钠溶液混匀,离心取上清液;在上清液中加入硅粉‑DNA吸附液沉淀DNA,离心,弃去上清液;加入洗脱液洗沉淀DNA,重复1~2次;最后加入TE buffer溶解DNA,混匀,室温放置后离心,取上清液,即为提取的植物DNA。本发明的提取方法可用于百香果、甘蔗、红薯、木薯、荸荠等植物叶片总DNA提取,可从植物的幼叶、中等成熟叶片以及成熟叶片中提取,取样不受时间限制,提取的植物DNA纯度高,完整性好。提取方法避免采用氯仿、苯酚等有毒有机物,且提取工艺简单。

技术研发人员:黄诚梅;罗海斌;曹辉庆;吴凯朝;魏源文;邓智年;江文;蒋胜理;徐林;叶丽萍
受保护的技术使用者:广西壮族自治区农业科学院
技术研发日:2020.03.09
技术公布日:2020.06.23
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1