技术特征：
1.一种如式i所示的共羧化酶的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：将含如式i所示的共羧化酶的混合物使用弱碱性阴离子交换树脂依次经水和ph＝10-12弱碱性水溶液作为洗脱液洗脱，收集洗出液，得到含如式i所示的共羧化酶的水溶液即可；所述的含共羧化酶的混合物中包括硫胺素一磷酸酯和所述的如式i所示的共羧化酶；2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的弱碱性阴离子交换树脂为大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂；和/或，所述的水为纯水；和/或，所述的ph＝10-12弱碱性水溶液为使用氨水调节得到；和/或，所述的含如式i所示的共羧化酶的混合物中还含有硫胺素、硫胺素三磷酸酯和高级磷酸酯中的一种或多种；和/或，所述的经水洗脱为洗脱至洗出液中硫胺素一磷酸酯含量低于百分之一即可。3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述的弱碱性阴离子交换树脂为下列型号之一：d315、d301、d335或d345；和/或，所述的收集洗出液为收集如式i所示的共羧化酶纯度大于95％洗出液。4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的含如式i所示的共羧化酶的混合物采用如下步骤制备得到：步骤(1)，将水和醇类溶剂依次加入到维生素b1与磷酸化剂进行磷酸化反应后的反应液中进行混合、静置后的上清液除去，得到所述的含如式i所示的共羧化酶的混合物的粗品；步骤(2)，将上述的粗品和水形成的溶液，使用水不溶性叔胺、或水不溶性叔胺与有机溶剂的混合溶剂进行洗涤，得到所述的含如式i所示的共羧化酶的混合物即可。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的磷酸化剂为焦磷酸，焦磷酸与五氧化二磷或三氯氧磷的混合物，磷酸与五氧化二磷进行反应制备得到的含焦磷酸的混合物，和高浓度磷酸中的一种或多种；和/或，步骤(1)中，所述的醇类溶剂为异丙醇和/或乙醇；和/或，步骤(1)中，所述的醇类溶剂与所述的维生素b1的体积质量比为2:1-5:1；和/或，步骤(1)中，所述的水与所述的维生素b1的体积质量比为2:1-5:1；和/或，所述的磷酸化反应的温度为100℃-170℃；和/或，步骤(2)中，所述的水与所述的维生素b1的体积质量比为1:1-3:1；和/或，步骤(2)中，所述的水不溶性叔胺为12至36个碳原子的：脂族叔胺、脂族-环脂族叔胺和脂族-芳脂族叔胺中的一种或多种；步骤(2)中，所述的有机溶剂为具有4至8个碳原子的醇类溶剂、具有4至8个碳原子的醚类溶剂、具有5至8个碳原子的酮类溶剂和芳烃类溶剂中的一种或多种；步骤(2)中，基于所述的混合溶剂的所述的水不溶性叔胺质量百分比含量为10％至80％。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，当所述的磷酸化剂为磷酸与五氧化二磷制备得到的含焦磷酸的混合物时，磷酸与五氧化二磷的摩尔比为2:1-1:1；例如1.2:1-1.3:1；和/或，步骤(1)中，当所述的磷酸化剂为磷酸与五氧化二磷制备得到的含焦磷酸的混合物时，五氧化二磷与所述的维生素b1的摩尔比为4:1-2:1；例如3:1-3.5:1；和/或，当所述的磷酸化剂为磷酸与五氧化二磷制备得到的含焦磷酸的混合物时，所述的混合物为磷酸与五氧化二磷在100℃-180℃进行反应制备得到；较佳地为150℃-160℃；和/或，步骤(1)中，所述的醇类溶剂与所述的维生素b1的体积质量比为3:1-4:1；和/或，步骤(1)中，所述的水与所述的维生素b1的体积质量比为3:1-4:1；和/或，步骤(1)中，所述的磷酸化反应的温度为130℃-140℃；和/或，步骤(2)中，所述的水与所述的维生素b1的体积质量比为1.5:1-2:1；和/或，步骤(2)中，当所述的水不溶性叔胺为12至36个碳原子的脂族叔胺时，所述的12至36个碳原子的脂族叔胺为三辛胺，三己胺和十三烷基胺中的一种或多种；和/或，步骤(2)中，当所述的水不溶性叔胺为12至36个碳原子的脂族-环脂族叔胺时，所述的12至36个碳原子的脂族-环脂族叔胺为n，n-二甲基环己胺；和/或，步骤(2)中，当所述的水不溶性叔胺为12至36个碳原子的脂族-芳脂族叔胺时，所述的12至36个碳原子的脂族-芳脂族叔胺为n，n-二甲基苄胺；和/或，步骤(2)中，当所述的有机溶剂为具有4至8个碳原子的醇类溶剂时，所述的具有4至8个碳原子的醇类溶剂为甲基异丁基甲醇、3-乙基戊醇、1-己醇和甲基环己醇中的一种或多种；和/或，步骤(2)中，当所述的有机溶剂为具有4至8个碳原子的醚类溶剂时，所述的具有4至8个碳原子的醚类溶剂为二乙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚和二正丁基醚中的一种或多种；和/或，步骤(2)中，当所述的有机溶剂为具有5至8个碳原子的酮类溶剂时，所述的具有5至8个碳原子的酮类溶剂为二乙基酮、甲基异丁基酮、苯乙酮和环己酮中的一种或多种；和/或，当所述的有机溶剂为芳烃类溶剂时，所述的芳烃类溶剂为甲苯；和/或，步骤(2)中，基于所述的混合溶剂的所述的水不溶性叔胺质量百分比含量为40％至70％。7.一种共羧化酶四水合物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：将含如式i所示的共羧化酶的水溶液进行浓缩，过滤析出的固体，即得共羧化酶四水合物；所述的含如式i所示的共羧化酶的水溶液采用如权利要求1-6中任一项所述的含如式i所示的共羧化酶的制备方法制备得到。8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的浓缩的温度为35℃以下，较佳地为30℃-35℃；和/或，当所述的含如式i所示的共羧化酶的水溶液含过量的碱离子时，使用酸中和过量的碱离子后结晶，再过滤析出的固体，即得共羧化酶四水合物；所述的酸可为盐酸；所述的结晶可包括如下步骤：将醇类溶剂加入到所述的含如式i所示的共羧化酶的水溶液中，过滤析出的固体，得到所述的共羧化酶的盐酸盐即可；其中，所述的醇类溶剂可为异丙醇和/或乙醇；所述的醇类溶剂与所述的含如式i所示的共羧化酶的盐酸盐的溶液的体积比可为2:1-3:1。
9.一种共羧化酶盐酸盐的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：将含如式i所示的共羧化酶的水溶液进行浓缩，加入浓盐酸调节ph＝2-3，得到含如式i所示的共羧化酶的盐酸盐的溶液即可；所述的含如式i所示的共羧化酶的水溶液采用如权利要求1-6中任一项所述的含如式i所示的共羧化酶的制备方法制备得到。10.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的浓缩的温度为35℃以下，较佳地为30℃-35℃；和/或，所述的共羧化酶盐酸盐的制备方法还包括如下结晶步骤：将醇类溶剂加入到所述的含如式i所示的共羧化酶的盐酸盐的溶液中，过滤析出的固体，得到所述的共羧化酶的盐酸盐即可；所述的醇类溶剂可为异丙醇和/或乙醇；所述的醇类溶剂与所述的含如式i所示的共羧化酶的盐酸盐的溶液的体积比可为2:1-3:1。
技术总结
本发明公开了一种共羧化酶及其四水合物或盐的制备方法。本发明提供了一种如式I所示的共羧化酶的制备方法，其包括如下步骤：将含如式I所示的共羧化酶的混合物使用弱碱性阴离子交换树脂依次经水和pH＝10-12弱碱性水溶液作为洗脱液洗脱，收集洗出液，得到含如式I所示的共羧化酶的水溶液即可；所述的含如式I所示的共羧化酶的混合物中包括硫胺素一磷酸酯和所述的如式I所示的共羧化酶。所述的如式I所示的共羧化酶。所述的如式I所示的共羧化酶。
技术研发人员：陈梦婷 田文军 郭晔堃
受保护的技术使用者：中国医药工业研究总院
技术研发日：2020.03.17
技术公布日：2021/9/16