一种β冠状病毒抗原、其制备方法和应用与流程

文档序号:22037778发布日期:2020-08-28 17:42阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种β冠状病毒抗原,其特征在于:其氨基酸序列包括:按照(a-b)-(a-b)样式排列的氨基酸序列或(a-b)-c-(a-b)样式排列的氨基酸序列或(a-b)-(a-b’)样式排列的氨基酸序列或(a-b)-c-(a-b’)样式排列的氨基酸序列,其中:a-b表示β冠状病毒的表面刺突蛋白的受体结合区的部分氨基酸序列或全部氨基酸序列,c表示连接氨基酸序列,a-b’表示a-b中的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列,a-b’编码的蛋白质具有与a-b所编码的蛋白质相同或基本相同的免疫原性,所述β冠状病毒抗原为单链二聚体结构。

2.根据权利要求1所述的β冠状病毒抗原,其特征在于:所述β冠状病毒包括:严重呼吸综合征冠状病毒、中东呼吸综合征冠状病毒和2019新型冠状病毒。

3.根据权利要求1所述的β冠状病毒抗原,其特征在于:所述连接氨基酸序列包括:(ggs)n连接序列,其中n表示ggs的个数,n为≥1的整数;可选地,n为选自1-10的整数;进一步可选地,n为选自1-5的整数。

4.根据权利要求1所述的β冠状病毒抗原,其特征在于:β冠状病毒的表面刺突蛋白的受体结合区的部分氨基酸序列为β冠状病毒的表面刺突蛋白的受体结合区的全部氨基酸序列的至少50%、60%、70%、80%、90%、99%。

5.根据权利要求1所述的β冠状病毒抗原,其特征在于:

当β冠状病毒为中东呼吸综合征冠状病毒时,其表面刺突蛋白的受体结合区的部分氨基酸序列或全部氨基酸序列选自包括以下氨基酸序列的任意一种:

(1)seqidno:1,seqidno:2,或seqidno:3;

(2)在(1)中的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列,该氨基酸序列编码的蛋白质具有与(1)所编码的蛋白质相同或基本相同的免疫原性;

可选地,其表面刺突蛋白的受体结合区的部分氨基酸序列包括seqidno:2;

当β冠状病毒为2019新型冠状病毒时,其表面刺突蛋白的受体结合区的部分氨基酸序列或全部氨基酸序列选自包括以下氨基酸序列的任意一种:

(3)seqidno:5,seqidno:6,或seqidno:7;

(4)在(3)中的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列,该氨基酸序列编码的蛋白质具有与(3)所编码的蛋白质相同或基本相同的免疫原性;

可选地,其表面刺突蛋白的受体结合区的部分氨基酸序列包括seqidno:6;

当β冠状病毒为严重呼吸综合征冠状病毒时,其表面刺突蛋白的受体结合区的部分氨基酸序列或全部氨基酸序列选自包括以下氨基酸序列的任意一种:

(5)seqidno:8;

(6)在(5)中的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列,该氨基酸序列编码的蛋白质具有与(5)所编码的蛋白质相同或基本相同的免疫原性。

6.根据权利要求5所述的β冠状病毒抗原,其特征在于:

当β冠状病毒为中东呼吸综合征冠状病毒时,β冠状病毒抗原的氨基酸序列包括选自以下氨基酸序列的任意一种:

(1)通过ggsggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:1氨基酸序列;

(2)通过ggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:1氨基酸序列;

(3)直接串联的2个重复seqidno:1氨基酸序列;

(4)通过ggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:2氨基酸序列;

(5)直接串联的2个重复seqidno:2氨基酸序列;

(6)通过ggsggsggsggsggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:3氨基酸序列;

(7)通过ggsggsggsggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:3氨基酸序列;

(8)通过ggsggsggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:3氨基酸序列;

(9)通过ggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:3氨基酸序列;

(10)直接串联的2个重复seqidno:3氨基酸序列;

可选地,β冠状病毒抗原的氨基酸序列包括直接串联的2个重复seqidno:2氨基酸序列;

当β冠状病毒为2019新型冠状病毒时,β冠状病毒抗原的氨基酸序列包括选自以下氨基酸序列的任意一种:

(1)直接串联的2个重复seqidno:5氨基酸序列;

(2)直接串联的2个重复seqidno:6氨基酸序列;

(3)直接串联的2个重复seqidno:7氨基酸序列;

可选地,β冠状病毒抗原的氨基酸序列包括直接串联的2个重复seqidno:6氨基酸序列;

当β冠状病毒为严重呼吸综合征冠状病毒时,β冠状病毒抗原的氨基酸序列包括:直接串联的2个重复seqidno:8氨基酸序列。

7.根据权利要求6所述的β冠状病毒抗原,其特征在于:

编码通过ggsggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:1氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:9所示;

编码通过ggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:1氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:10所示;

编码直接串联的2个重复seqidno:1氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:11所示;

编码通过ggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:2氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:12所示;

编码直接串联的2个重复seqidno:2氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:13所示;

编码通过ggsggsggsggsggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:3氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:14所示;

编码通过ggsggsggsggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:3氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:15所示;

编码通过ggsggsggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:3氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:16所示;

编码通过ggs连接序列串联起来的2个重复seqidno:3氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:17所示;

编码直接串联的2个重复seqidno:3氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:18所示;

编码直接串联的2个重复seqidno:5氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:19所示;

编码直接串联的2个重复seqidno:6氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:20所示;

编码直接串联的2个重复seqidno:7氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:21所示;

编码直接串联的2个重复seqidno:8氨基酸序列的核苷酸序列如seqidno:23所示。

8.一种制备权利要求1-7之一所述的β冠状病毒抗原的方法,其特征在于:包括以下步骤:在编码权利要求1-7之一所述的β冠状病毒抗原的核苷酸序列的5’端加入编码信号肽的序列,3’端加上终止密码子,进行克隆表达,筛选正确的重组子,然后转染表达系统的细胞进行表达,表达后收集细胞上清,纯化得到β冠状病毒抗原。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于:所述表达系统的细胞包括为哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞或细菌细胞,可选地;所述哺乳动物细胞包括293t细胞或cho细胞,所述细菌细胞包括大肠杆菌细胞。

10.一种编码权利要求1-7之一所述的β冠状病毒抗原的核苷酸序列。

11.一种包括权利要求10所述的核苷酸序列的重组载体。

12.一种包括权利要求11所述的重组载体的表达系统细胞。

13.一种权利要求1-7之一所述的β冠状病毒抗原、权利要求10所述的核苷酸序列、权利要求11所述的重组载体、权利要求12所述的表达系统细胞在制备β冠状病毒疫苗中的应用。

14.一种β冠状病毒疫苗,其特征在于:包括权利要求1-7之一所述的β冠状病毒抗原和佐剂。

15.根据权利要求14所述的β冠状病毒疫苗,其特征在于:所述佐剂选自铝佐剂、mf59佐剂或类mf59佐剂。

16.一种β冠状病毒dna疫苗,其特征在于包括有:包含编码权利要求1-7之一所述的β冠状病毒抗原的dna序列的重组载体。

17.一种β冠状病毒mrna疫苗,其特征在于包括有:包含编码权利要求1-7之一所述的β冠状病毒抗原的mrna序列的重组载体。

18.一种β冠状病毒病毒载体疫苗,其特征在于包括有:包含编码权利要求1-7之一所述的β冠状病毒抗原的核苷酸序列的重组病毒载体;可选地,病毒载体选自以下的一种或几种:腺病毒载体、痘病毒载体、流感病毒载体、腺相关病毒载体。


技术总结
本发明实施例涉及一种β冠状病毒抗原、其制备方法和应用。β冠状病毒抗原的氨基酸序列包括:按照(A‑B)‑(A‑B)样式排列的氨基酸序列或(A‑B)‑C‑(A‑B)样式排列的氨基酸序列或(A‑B)‑(A‑B’)样式排列的氨基酸序列或(A‑B)‑C‑(A‑B’)样式排列的氨基酸序列,所述β冠状病毒抗原为单链二聚体结构。本发明实施例所表达的单链二聚体含量稳定,作为β冠状病毒抗原具有好的免疫原性,该单链二聚体作为β冠状病毒抗原制备成的疫苗能够激发小鼠产生很高滴度的中和抗体。

技术研发人员:戴连攀;严景华;高福;李燕;郑天依;徐坤;刘梅;安亚玲;施一
受保护的技术使用者:中国科学院微生物研究所
技术研发日:2020.06.23
技术公布日:2020.08.28
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