一种包含植酸酶突变体的重组载体或重组菌株的应用的制作方法

文档序号:22039507发布日期:2020-08-28 17:55阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种重组载体或重组菌株的应用,其特征在于,所述重组载体或重组菌株包含序列表seqidno.3所示植酸酶突变体编码基因。

2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述重组载体是在表达载体为ppic9中插入seqidno.3所示的基因所得。

3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述重组菌株是在宿主细胞毕赤酵母gs115中表达seqidno.3所示的基因所得。

4.如权利要求1所述的应用,其特征在于,用于生产植酸酶。

5.权利要求4所述的应用,其特征在于,植酸酶的生产方法,具体如下:

以以ppic9为表达载体,以毕赤酵母gs115为宿主细胞,表达seqidno.3所示植酸酶突变体编码基因的菌株为生产菌株;

将菌株接种于bmgy培养基中,30℃,220r/min培养至od600为10,离心收集菌体,用bmmy培养基重悬菌体,并在30℃,220r/min条件下继续培养48h即得植酸酶;

所述bmgy培养基组成为:1%酵母浸出物,2%蛋白胨,0.1mol/lph6.0磷酸盐缓冲液,1.34%ynb,4×10-5%生物素,1%甘油;

所述bmmy培养基组成为:1%酵母浸出物,2%蛋白胨,0.1mol/lph6.0磷酸盐缓冲液,1.34%ynb,4×10-5%生物素,0.5%甲醇。


技术总结
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种包含植酸酶突变体的重组载体或重组菌株。本发明通过PCR获得来自枯草芽孢杆菌突变菌的耐热植酸酶突变基因A‑2,并将A‑2构建到pPIC9质粒上,得到重组质粒pPIC9‑A‑2,并转化到毕赤酵母GS115,筛选得到高表达耐热植酸酶的重组菌,所表达的耐热植酸酶在80℃保温处理30min,相对活性仍剩余75%左右,90℃处理30min,酶活仍存留25%以上,耐热性良好,可以广泛用于食品、饲料等行业。

技术研发人员:王兴吉;郭庆文;张杰;盛花开;刘文龙
受保护的技术使用者:山东隆科特酶制剂有限公司
技术研发日:2017.09.30
技术公布日:2020.08.28
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