唾液乳杆菌tci153、其及/或其破菌液改善肌肤状况的用途
技术领域：
：[0001]本发明关于一种唾液乳杆菌及其用途，特别是关于一种唾液乳杆菌tci153(lactobacillussalivariustci153)，其可用于制备改善肌肤状况的组合物。
背景技术：
：：[0002]益生菌(probiotics)一般认为是指食入后对宿主(或称受体，如动物或人类)有正面效益的食入性微生物。其命名源于希腊语「forlife」(对生命有益)，又称为「原生保健性菌种」；并且，益生菌主要是指乳酸菌和部分酵母菌。[0003]一般而言，「乳酸菌(lacticacidbacteria)」是指能利用碳水化合物进行发酵生产多量乳酸的细菌总称，为一相当庞杂的菌群。在诸多乳酸菌的菌种中，部分乳酸菌菌种的菌株经研究发现其对于受体健康有益，故此些菌株被视为益生菌。换言之，益生菌大部分是乳酸菌，但乳酸菌中只有少数经研究证明对受体健康有益的菌株能被称为益生菌。[0004]举例来说，常见的可作为益生菌的乳酸菌的菌种包括肠球菌属(enterococcus)、乳杆菌属(lactobacillus)、双岐杆菌属(bifidobacterium)、芽孢杆菌属(bacillus)等，而可作为益生菌的酵母菌的菌种包括酵母菌属(saccharomyces)。[0005]乳杆菌属是一群具有发酵能力、兼性厌氧、不会产生孢子的革兰氏阳性杆菌。乳杆菌因能够将碳水化合物发酵成乳酸而得名，可用于制造液态酸奶、固态奶酪、德国酸菜、啤酒、葡萄酒、泡菜、腌渍食品和其他发酵食品。技术实现要素：[0006]在一些实施例中，一种唾液乳杆菌tci153，其中唾液乳杆菌tci153(lactobacillussalivariustci153)寄存于德国微生物保藏中心，且寄存编号dsm33503。[0007]在一些实施例中，一种唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液在制备改善肌肤的组合物的用途，其中唾液乳杆菌tci153(lactobacillussalivariustci153)寄存于德国微生物保藏中心，且寄存编号为dsm33503。[0008]在一些实施例中，唾液乳杆菌tci153具有生成燕窝酸的功能。[0009]在一些实施例中，唾液乳杆菌tci153具有促进受体生成表皮生长因子的功能。[0010]在一些实施例中，唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液具有促进细胞合成弹力蛋白的功能。[0011]在一些实施例中，唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液具有促进细胞重组并聚集胶原蛋白的功能。[0012]在一些实施例中，组合物用以提高受体的肌肤弹性、肌肤紧致度或其组合。[0013]在一些实施例中，组合物用以改善一受体的皱纹、肌肤毛孔、肌肤水分散状况或其组合。[0014]在一些实施例中，组合物用以提高受体的肌肤光泽度、肌肤含水量或其组合。[0015]在一些实施例中，组合物为医药品、食品、保养品或化妆品。[0016]综上所述，任一实施例的唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液，其能生产燕窝酸并改善肌肤。在一些实施例中，唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液可用以制备改善肌肤的组合物。附图说明[0017]图1是唾液乳杆菌tci153于胃肠模拟环境中的存活率实验的结果图；[0018]图2是唾液乳杆菌tci153及其他乳杆菌属菌株的燕窝酸含量实验结果图；[0019]图3是燕窝酸含量实验数据结果图；[0020]图4是弹力蛋白生成量的相对数据结果图；[0021]图5是胶原蛋白膜相对尺寸的数据结果图；[0022]图6是第0周、第4周及第8周量测的血液中燕窝酸含量数据结果图；[0023]图7是第0周、第4周及第8周量测的血液中表皮生长因子含量数据结果图；[0024]图8是第0周、第4周及第8周量测的皱纹数据结果图；[0025]图9是第0周、第4周及第8周量测的毛孔数据结果图；[0026]图10是第0周、第4周及第8周量测的肌肤光泽度数据结果图；[0027]图11是第0周、第4周及第8周量测的肌肤含水量散失百分比数据结果图；以及[0028]图12是第0周、第4周及第8周量测的肌肤含水量数据结果图。[0029]生物材料的保藏[0030]财团法人食品工业发展研究所(中国台湾)；2020年3月27日；寄存编号：bcrc910982。[0031]德国微生物保藏中心(germancollectionofmicroorganismsandcellcultures，dsmz)；且寄存编号dsm33503；寄存日期：2020年4月17日。具体实施方式[0032]唾液乳杆菌tci153(lactobacillussalivariustci153)是分离自人类母乳的乳杆菌属的菌株。唾液乳杆菌tci153以寄存编号dsm33503寄存于德国微生物保藏中心(germancollectionofmicroorganismsandcellcultures，dsmz)。唾液乳杆菌tci153以寄存编号bcrc910982寄存于财团法人食品工业发展研究所。[0033]唾液乳杆菌tci153为格兰氏阳性菌，可于厌氧环境下生长，为厌氧细菌。唾液乳杆菌tci153生长的温度为35℃至37℃，且可于酸碱值(ph值)为3至7的环境下生存。[0034]在一些实施例中，唾液乳杆菌tci153具有耐胃酸胆盐的功能。举例来说，唾液乳杆菌tci153于胃模拟环境(ph值3-4)的存活率为83％，且于肠道模拟环境(ph值7)的存活率为93％。因此，唾液乳杆菌tci153可在人体肠胃道环境定殖，进而在人体中产生可供人体吸收的活性成分，如，燕窝酸。[0035]在一些实施例中，此唾液乳杆菌tci153具有生成燕窝酸的功能，进而提高受体体内的燕窝酸含量。换言之，当受体服用唾液乳杆菌tci153后，唾液乳杆菌tci153能提升受体血液中的燕窝酸含量。在一些实施例中，受体可为人。[0036]在一些实施例中，此唾液乳杆菌tci153具有改善受体的肌肤状况的功能。换言之，当受体服用唾液乳杆菌tci153后，唾液乳杆菌tci153能改善受体的肌肤状况。在一些实施例中，改善肌肤状况包括下列至少一种情形：提高受体的肌肤弹性、提高受体的肌肤紧致度、改善受体的皱纹、减少受体的肌肤毛孔、提高受体的肌肤光泽度、减少受体的肌肤水分散失、及提高受体的肌肤含水量。[0037]在一些实施例中，此唾液乳杆菌tci153的破菌液具有改善受体的肌肤状况的功能。换言之，当受体服用唾液乳杆菌tci153的破菌液或此破菌液所制成的组合物后，唾液乳杆菌tci153的破菌液能改善受体的肌肤状况。在一些实施例中，改善肌肤状况包括下列至少一种情形：提高受体的肌肤弹性、提高受体的肌肤紧致度、改善受体的皱纹、减少受体的肌肤毛孔、提高受体的肌肤光泽度、减少受体的肌肤水分散失、及提高受体的肌肤含水量。[0038]在一些实施例中，用语「破菌液」代表含有乳杆菌破菌后的菌体碎片(细胞膜等)及乳杆菌胞内蛋白质的溶液。举例来说，唾液乳杆菌tci153的破菌液包括唾液乳杆菌tci153的菌体碎片、唾液乳杆菌tci153的胞内蛋白质及用以回溶唾液乳杆菌tci153的裂解缓冲液。[0039]在一些实施例中，唾液乳杆菌tci153的破菌液能透过将唾液乳杆菌tci153培养后收集唾液乳杆菌tci153菌体而制备。在一些示范例中，将唾液乳杆菌tci153以液态乳杆菌mrs培养基(bddifcotmlactobacillimrsbroth)，于37℃厌氧环境(即培养环境中氧气浓度为1体积％)下培养16小时后，以转速5,000xg离心20分钟以收集离心后的唾液乳杆菌tci153菌体。接着，将离心后的唾液乳杆菌tci153菌体进行破菌以收集破菌液。在一实施态样中，离心后的唾液乳杆菌tci153菌体是以裂解缓冲液(lysisbuffer)回溶，并以dnase反应进行反应以将唾液乳杆菌tci153的dna分解。接着，透过高压破菌机进行三次破菌以形成唾液乳杆菌tci153破菌液。[0040]在一些实施例中，唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液具有促进细胞合成弹力蛋白的功能。换言之，当受体服用唾液乳杆菌tci153活菌或服用唾液乳杆菌tci153的破菌液时，可使受体的肌肤弹力增加。[0041]在一些实施例中，唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液具有重组聚集胶原蛋白的功能。换言之，当受体服用唾液乳杆菌tci153或服用唾液乳杆菌tci153的破菌液时，可使受体的肌肤紧致度提升。[0042]在一些实施例中，唾液乳杆菌tci153具有促进受体生成表皮生长因子(epidermalgrowthfactor，egf)的功能。换言之，当受体服用唾液乳杆菌tci153时，可提升受体血液中的egf含量，进而提高受体肌肤细胞代谢力、提高受体肌肤抗老化能力、提高受体肌肤抗皱能力或其组合。[0043]基此，在一些实施例中，唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液可用于制备改善肌肤状况的组合物。其中，改善肌肤状况包括下列至少一种情形：提高受体的肌肤弹性、提高受体的肌肤紧致度、改善受体的皱纹、减少受体的肌肤毛孔、提高受体的肌肤光泽度、减少受体的肌肤水分散失、及提高受体的肌肤含水量。[0044]在一些实施例中，前述任一组合物可为医药品。换言之，此医药品包含有效含量的唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液。[0045]在一些实施例中，前述医药品可利用本领域技术人员所详知的技术而被制造成适合于经肠道地、非经肠道地(parenterally)、口服的、或局部地(topically)投药剂型。[0046]在一些实施例中，经肠道或口服的投药剂型可为，但不限于，锭剂(tablet)、片剂(troche)、口含锭(lozenge)、丸剂(pill)、胶囊(capsule)、分散性粉末(dispersiblepowder)或细颗粒(granule)、溶液、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、糖浆(syrup)、酏剂(elixir)、浓浆(slurry)或类似之物。举例来说，当组合物的剂型为胶囊状时，组合物的剂量为1×109菌落形成单位/胶囊(cfu/cap)的唾液乳杆菌tci153。[0047]在一些实施例中，非经肠道地或局部地投药剂型可为，但不限于，注射品(injection)、无菌的粉末(sterilepowder)、外部制剂(externalpreparation)或类似之物。在一些实施例中，注射品的投药方式可为皮下注射(subcutaneousinjection)、表皮内注射(intraepidermalinjection)、皮内注射(intradermalinjection)或病灶内注射(intralesionalinjection)。[0048]在一些实施例中，前述医药品可包含被广泛地使用于药物制造技术的医药上可接受的载剂(pharmaceuticallyacceptablecarrier)。在一些实施例中，医药上可接受的载剂可为下列载剂中一种或多种：溶剂(solvent)、缓冲液(buffer)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspendingagent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegratingagent)、分散剂(dispersingagent)、黏结剂(bindingagent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizingagent)、螯合剂(chelatingagent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gellingagent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wettingagent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorptiondelayingagent)、脂质体(liposome)以及类似之物。关于选用载剂的种类与数量是落在本领域技术人员的专业素养与例行技术范畴内。在一些实施例中，作为医药上可接受的载剂的溶剂可为水、生理盐水(normalsaline)、磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline，pbs)、或含有醇的水性溶液(aqueoussolutioncontainingalcohol)。[0049]在一些实施例中，前述任一组合物可为食品。换言之，食品包含特定含量的唾液乳杆菌tci153。在一些实施例中，前述食品可为食用产品或食品添加物(foodadditive)。在一些实施例中，食用产品可为但不限于：饮料(beverages)、乳制品(dairyproducts)、发酵食品(fermentedfoods)、烘培产品(bakeryproducts)、健康食品(healthfoods)以及饮食补充品(dietarysupplements)。[0050]在一些实施例中，前述任一组合物可为保养品或化妆品。换言之，保养品或化妆品包含特定含量的唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液。[0051]在一些实施例中，前述保养品或化妆品可为下列任一种型态：化妆水、凝胶、冻膜、泥膜、乳液、乳霜、唇膏、粉底、粉饼、蜜粉、卸妆油、卸妆乳、洗面奶、沐浴乳、洗发精、护发乳、防晒乳、护手霜、指甲油、香水、精华液及面膜。在一些实施例中，前述化妆品或保养品可视需要更包含外用品可接受成分。在一些实施例中，外用品可接受成分可例如为乳化剂、渗透促进剂、软化剂、溶剂、赋型剂、抗氧化剂、或其组合。[0052]例一：菌种鉴定[0053]自人类母乳及泡菜中分别取适量样品于固态乳杆菌mrs培养基(bddifcotmlactobacillimrsbrothwith1.5％agar)上涂盘并于37℃厌氧环境(即培养环境中氧气浓度为1体积％)下培养16小时至单一菌落形成。分别从固态乳杆菌mrs培养基挑取多个单一菌落，并以乳酸菌的16s核醣体基因(16srdna)序列进行菌种鉴定。透过聚合酶连锁反应(pcr)得到此些单一菌落的16srdna序列(即seqidno:1至seqidno:4)。接着，利用美国国家生物技术信息中心(ncbi)网站，将seqidno:1至seqidno:4所示的基因序列分别与其他乳杆菌菌种的16srdna序列进行序列比对后，可知此些单一菌落的16srdna序列与其他乳杆菌菌种的16srdna序列的相似性如表1所示。[0054]表1[0055][0056][0057]其中，将此分离自人类母乳且与其他唾液乳杆菌亚种(表1所示“比对的乳杆菌菌种”)的相似性达98.96％至99.15％的单一菌落，命名为唾液乳杆菌tci153。并且，将此唾液乳杆菌tci153以寄存编号bcrc910982寄存于财团法人食品工业发展研究所，且以寄存编号dsm33503寄存于德国微生物保藏中心(germancollectionofmicroorganismsandcellcultures，dsmz)。[0058]例二：耐胃酸胆盐试验[0059]于此，将例一所得的唾液乳杆菌tci153以缓冲液、人工胃液(ph3)及人工肠液(ph7)进行测试，以确认唾液乳杆菌tci153于生物体肠胃消化道中的酸碱耐受性。其中，缓冲液为0.2摩尔浓度(m)氯化钾(kcl,品牌sigma-aldrich)且ph值为7。人工胃液为0.2m氯化钾且ph值为3。人工肠液为0.2m氯化钾及0.3重量％的牛胆盐(品牌difcotmoxgall)且ph值为7。[0060]以例1所得的唾液乳杆菌tci153作为目标菌株进行下述活化程序。在活化程序中，先取100μl目标菌株的冻菌液至固态乳杆菌mrs培养基(bddifcotmlactobacillimrsbrothwith1.5％agar)上进行涂盘，并于37℃厌氧环境(即培养环境中氧气浓度为1体积％)下培养16小时，以长出目标菌株的单一菌落。接着，挑取目标菌株的单一菌落至15ml液态乳杆菌mrs培养基(bddifcotmlactobacillimrsbroth)中，于37℃厌氧环境下培养16小时，以得到活化完成的目标菌株。[0061]接着，将活化完成的目标菌株取1体积％的浓度接种至20毫升的待测溶液中，然后以转速50rpm于37℃厌氧环境下震荡培养3小时。其中，三个组别的待测溶液分别为人工胃液(实验组)、人工肠液(实验组)及氯化钾缓冲液(控制组)。从培养后的菌液取100微升(μl)的菌液涂盘，并于37℃厌氧环境下静置培养3天，并于3天后以肉眼计数各组别的活菌数(计算固态乳杆菌mrs培养基上的菌落数)。[0062]请参阅图1。图式中唾液乳杆菌tci153的存活率为相对存活率，以百分比(％)表示，并将控制组的存活率视为100％。由图1可知，相较于控制组，人工胃液实验组的存活率为83％，且人工肠液实验组的存活率为93％。基此，唾液乳杆菌tci153具有耐胃酸胆盐的功能，代表唾液乳杆菌tci153可通过宿主肠胃道的酸碱值压力，定殖于宿主肠道中。[0063]例三：唾液乳杆菌菌株的燕窝酸含量检测[0064]于此，在与其他菌株相较之下，评估例一所得的唾液乳杆菌tci153的燕窝酸生成能力。其中，所使用的培养基为乳杆菌mrs培养基(bddifcotmlactobacillimrsbroth)。所使用的裂解缓冲液(lysisbuffer)是以300mm氯化钠(nacl；品牌：sigma)及50mm磷酸一钠(sodiumphosphatemonobasic；品牌：choneye)配制而成。[0065]首先，分别以例一所得的唾液乳杆菌tci153、唾液乳杆菌l208、加氏乳杆菌lh37、加氏乳杆菌lh49做为目标菌株并以例2所述的活化程序分别活化目标菌株，以利进行后续试验。[0066]将上述活化后的目标菌株分别接种至1l液态乳杆菌mrs培养基中，并调整液态乳杆菌mrs培养基中的目标菌株的菌量，以形成其吸光值(od600)为0.1的初始菌液。接着，将初始菌液于37℃厌氧环境(即培养环境中氧气浓度为1体积％)下培养16小时以形成测试菌液。将测试菌液以高速离心机(thermomegafuge16centrifuge)设定转速5,000xg离心20分钟，以去除上清液并收集测试菌液离心后的菌体。接着，将离心后的菌体以50毫升裂解缓冲液回溶后加入dnase(品牌：cyrubioscience)以形成回溶溶液，并于室温下反应10分钟。其中，回溶溶液中的dnase的浓度为1μg/ml。[0067]将反应后的回溶溶液以高压破菌机(constantsystemtsseries)设定不同压力值进行破菌程序，以形成破菌液。其中，破菌程序中，回溶溶液依序在25千磅力每平方英吋(kpsi)、30kpsi及32kpsi的压力值下进行三次破菌。[0068]将破菌液送外检单位(腾德姆斯技术顾问股份有限公司)进行燕窝酸含量的检测，如图2所示。[0069]请参阅图2，其中各目标菌株的破菌液分别以表1所示的菌株编号标示。由图2可知，唾液乳杆菌tci153的破菌液中含有284.6μg/ml的燕窝酸。唾液乳杆菌l208的破菌液中含有49.69μg/ml的燕窝酸。加氏乳杆菌lh37的破菌液中含有169.18μg/ml的燕窝酸。加氏乳杆菌lh49的破菌液中含有155.74μg/ml的燕窝酸。由此可知，唾液乳杆菌tci153的破菌液中的燕窝酸含量远高于其他唾液乳杆菌菌株。[0070]基此，唾液乳杆菌tci153具有较佳的燕窝酸生成能力。因此，当受体服用唾液乳杆菌tci153后，定殖于受体体内的唾液乳杆菌tci153能于受体体内生成燕窝酸，以利于提高受体血液中的燕窝酸含量。[0071]例四：唾液乳杆菌tci153的燕窝酸含量检测[0072]于此，评估例一所得的唾液乳杆菌tci153的燕窝酸生成能力。其中，所使用的培养基为乳杆菌mrs培养基(bddifcotmlactobacillimrsbroth)。所使用的裂解缓冲液(lysisbuffer)是以300mm氯化钠(nacl；品牌：sigma)及50mm磷酸一钠(sodiumphosphatemonobasic；品牌：choneye)配制而成。[0073]首先，以例一所得的唾液乳杆菌tci153做为目标菌株并以例2所述的活化程序活化目标菌株，以利进行后续试验。[0074]将上述活化后的目标菌株接种至2l液态乳杆菌mrs培养基中，并调整液态乳杆菌mrs培养基中的唾液乳杆菌tci153的菌量，以形成其吸光值(od600)为0.1的初始菌液。[0075]接着，将初始菌液于37℃厌氧环境下进行培养。于培养8小时后取出一部分(约1l)培养后的初始菌液(以下称8小时菌液)，其余培养后的初始菌液(约1l)则继续培养至24小时以形成24小时菌液。[0076]于此，实验组依照菌液的培养时间分成为8小时实验组及24小时实验组。其中，8小时菌液作为8小时实验组的测试样品，而24小时菌液则作为24小时实验组的测试样品。[0077]接着，将各组测试样品以高速离心机(thermomegafuge16centrifuge)设定转速5,000xg离心20分钟，以去除上清液并收集各组离心后的菌体。接着，将离心后的菌体以50毫升裂解缓冲液回溶后加入dnase(品牌：cyrubioscience)以形成各组回溶液，并于室温反应10分钟。其中，回溶液中的dnase的浓度为1μg/ml。[0078]将反应后的回溶液以高压破菌机(constantsystemtsseries)设定不同压力值进行破菌程序，以形成各组破菌液。其中，破菌程序中，回溶液依序在25千磅力每平方英吋(kpsi)、30kpsi及32kpsi的压力值下进行三次破菌。[0079]将二实验组的破菌液送外检单位(腾德姆斯技术顾问股份有限公司)检测其中的燕窝酸含量，如图3所示。[0080]请参阅图3，其中8小时实验组标示为8小时，并且24小时实验组标示为24小时。由图3可知，培养8小时后的唾液乳杆菌tci153的破菌液中含有17.56μg/ml的燕窝酸。培养24小时后的唾液乳杆菌tci153的破菌液中含有1040μg/ml的燕窝酸。[0081]例五：唾液乳杆菌tci153的破菌液制备[0082]于此，所使用的培养基为乳杆菌mrs培养基(bddifcotmlactobacillimrsbroth)。所使用的裂解缓冲液(lysisbuffer)是以300mm氯化钠(nacl；品牌：sigma)及50mm磷酸一钠(sodiumphosphatemonobasic；品牌：choneye)配制而成。[0083]首先，以例一所得的唾液乳杆菌tci153做为目标菌株并以例2所述的活化程序活化目标菌株，以利进行后续试验。[0084]将上述活化后的目标菌株接种至1l液态乳杆菌mrs培养基中，并调整液态乳杆菌mrs培养基中的唾液乳杆菌tci153的菌量，以形成其吸光值(od600)为0.1的初始菌液。[0085]接着，将初始培养液37℃厌氧环境下培养16小时，以形成唾液乳杆菌tci153菌液。将唾液乳杆菌tci153菌液以高速离心机(thermomegafuge16centrifuge)设定转速5,000xg离心20分钟，以去除上清液并收集离心后的唾液乳杆菌tci153菌体。接着，将离心后的唾液乳杆菌tci153菌体以50毫升裂解缓冲液回溶后加入dnase(品牌：cyrubioscience)以形成回溶液，并于室温反应10分钟。其中，回溶液中的dnase的浓度为1μg/ml。将反应后的回溶液以高压破菌机(constantsystemtsseries)设定不同压力值进行破菌程序，以形成唾液乳杆菌tci153破菌液。其中，破菌程序中，回溶液依序在25千磅力每平方英吋(kpsi)、30kpsi及32kpsi的压力值下进行三次破菌。[0086]于此，可得到包含唾液乳杆菌tci153菌体碎片、唾液乳杆菌tci153的胞内蛋白质及裂解缓冲液的唾液乳杆菌tci153的破菌液。[0087]例六：弹力蛋白含量检测[0088]于此，所使用的培养基为含有90体积％最低限度基本培养基(minimumessentialmedium；品牌gibco)、10体积％胎牛血清蛋白(fetalbovineserum，fbs；品牌：gibco)及1mm丙酮酸钠(sodiumpyruvate，品牌：gibco)的细胞培养基(以下称mem培养基)。所使用的细胞株为人类肌肤成纤维细胞(ccd-966skcell，品牌：crl-1881)，以下称ccd-966sk细胞。[0089]将ccd-966sk细胞以每孔1×105个的数量接种于每孔含2毫升mem培养基的6孔培养盘中，并于37℃下培养24小时，并分为实验组、对照组及控制组。接着，更换mem培养基为实验培养基，并将实验组及对照组于37℃下培养24小时。其中，实验组的实验培养基为含有0.25体积％例五所制备的唾液乳杆菌tci153破菌液的mem培养基。对照组的实验培养基为含有0.25体积％无菌液态乳杆菌mrs培养基的mem培养基(即不含唾液乳杆菌tci153破菌液，仅添加无菌液态乳杆菌mrs培养基)。控制组的实验培养基为单纯mem培养基(即，不含唾液乳杆菌tci153破菌液及无菌液态乳杆菌mrs培养基的mem培养基)。[0090]接着，以弹性蛋白检测套组(fastintmelastinassaykit，品牌：biocolor)处理各组ccd-966sk细胞后，以全光谱光学分析仪(品牌：biotek，epoch)检测三组ccd-966sk细胞的弹力蛋白生成量，如图4所示。其中，将未以实验培养基培养24小时的控制组量测到的弹力蛋白含量视为1(即弹力蛋白生成量为100％)。需要特别说明的是，各组之间的统计学显著差异是藉由学生t-试验(studentt-test)来统计分析，如图4所示。在图4中，「**」代表在与控制组比较下其p值小于0.01、「▲」代表在与对照组比较下其p值小于0.05。[0091]请参阅图4，相较于控制组，实验组的弹力蛋白生成量为116.1％，而对照组的弹力蛋白生成量为103.3％。换言之，对照组与控制组的弹力蛋白生成量无明显差异，且相较于对照组，实验组的弹力蛋白生成量明显提高，代表以唾液乳杆菌tci153破菌液处理24小时后的ccd-966sk细胞可生成更多的弹力蛋白。由此可知，唾液乳杆菌tci153破菌液具有促进细胞合成弹力蛋白的功能。[0092]基此，唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液具有促进细胞合成弹力蛋白的功能。当受体服用唾液乳杆菌tci153后，定殖于受体体内的唾液乳杆菌tci153能促进受体的肌肤细胞生成弹力蛋白，进而提高受体肌肤弹性。[0093]例七：胶原蛋白膜收缩检测(皮肤紧致试验)[0094]于此，所使用的培养基为含有90体积％添加有0.1mm非必需氨基酸(non-essentialaminoacids；品牌：gibco)、1.5g/l碳酸氢钠(sodiumbicarbonate；品牌：gibco)及1mm丙酮酸钠(sodiumpyruvate，品牌：gibco)的含厄尔平衡盐的伊格尔最低限度基本培养基(minimumessentialmedium(eagle)inearle'sbss；品牌gibco)，以及10体积％胎牛血清蛋白(fetalbovineserum，fbs；品牌：gibco)的eagle-mem培养基。所使用的细胞株为人类肌肤成纤维细胞(ccd-966skcell，品牌：crl-1881)，以下称ccd-966sk细胞。[0095]将ccd-966sk细胞以每孔2×105个的数量接种于每孔含有0.5毫升细胞培养基的24孔培养盘中，并于37℃下培养1小时。其中，上述细胞培养基为添加有1毫克/毫升第一型胶原蛋白(collageni；品牌：gibco)并以氢氧化钠(naoh；品牌：macron，型号7708-10)调节至中性(ph7.0)的eagle-mem培养基。于1小时培养期间，ccd-966sk细胞会重组第一型胶原蛋白并形成胶原蛋白膜。[0096]将培养后并形成胶原蛋白膜的ccd-966sk细胞分为实验组、对照组及控制组。接着，于各孔中再加入0.5毫升实验培养基，并将实验组及对照组于37℃下再培养8小时(控制组并未培养8小时)。其中，实验组的实验培养基为含有0.25体积％例五所制备的唾液乳杆菌tci153破菌液的eagle-ꢀmem培养基。对照组的实验培养基为含有0.25体积％无菌液态乳杆菌mrs培养基。控制组的实验培养基为单纯eagle-mem培养基(即不含唾液乳杆菌tci153破菌液、无菌液态乳杆菌mrs培养基)。[0097]以影像软件(imagej)分析各组胶原蛋白膜的尺寸，并比较各组胶原蛋白膜的尺寸差异。需要特别说明的是，各组之间的统计学显著差异是藉由学生t-试验(studentt-test)来统计分析，如图5所示。在图5中，「*」代表在与控制组比较下其p值小于0.05、「▲」代表在与对照组比较下其p值小于0.05。[0098]于此，将控制组的胶原蛋白膜的尺寸视为100％，并比较其与实验组及对照组的胶原蛋白膜的尺寸，以分析实验组及对照组的胶原蛋白膜的收缩情形。请参阅图5，相较于控制组，实验组的胶原蛋白膜的尺寸为95.71％，而对照组的胶原蛋白膜的尺寸为99.27％。换言之，对照组与控制组的胶原蛋白膜的尺寸差异不大，而实验组的胶原蛋白膜的尺寸相较于对照组较小，代表唾液乳杆菌tci153破菌液能促进ccd-966sk细胞重组并聚集第一型胶原蛋白，使第一型胶原蛋白膜的收缩情形较为显著。由此可知，唾液乳杆菌tci153破菌液具有重组聚集胶原蛋白的功能。[0099]基此，唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液具有重组聚集胶原蛋白的功能。当受体服用唾液乳杆菌tci153后，定殖于受体体内的唾液乳杆菌tci153能促进受体的肌肤细胞的胶原蛋白重组并聚集，进而提高受体肌肤紧致度。[0100]例八：人体血液试验[0101]为进一步确认唾液乳杆菌tci153对于人体的影响。以每颗胶囊含有1ꢀ×109cfu(即1×109cfu/cap)的唾液乳杆菌tci153的活菌胶囊提供给8位受试者，每人每日服用一颗，并服用8周。并于服用唾液乳杆菌tci153胶囊前(视为第0周)、服用唾液乳杆菌tci153胶囊4周后(视为第4周)及服用唾液乳杆菌tci153胶囊8周后(视为第8周)进行受试者血液检测，检测项目包括受试者血液中的燕窝酸含量，及受试者血液中的表皮生长因子含量。其中，受试者血液中的燕窝酸含量是将受试者血液以燕窝酸检测套组(品牌：cloud-clonecorp，型号：ces099ge)进行燕窝酸含量的检测，而受试者血液中的表皮生长因子含量是将受试者血液以表皮生长因子检测套组(品牌：biogems，型号：bgk01133)进行表皮生长因子含量的检测。[0102]需要特别说明的是，第0周、第4周与第8周的量测结果之间的统计学显著差异是藉由学生t-试验来统计分析。[0103]请参阅图6，于服用唾液乳杆菌tci153胶囊前，8位受试者的平均血液中燕窝酸含量为1.47皮克/毫升(图6标示第0周)，并于服用4周后，8位受试者的平均血液中燕窝酸含量上升至3.19皮克/毫升(图6标示第4周)，接着于服用8周后，8位受试者的平均血液中燕窝酸含量上升至4.64皮克/毫升(图6标示第8周)。换言之，相较于第0周，于服用唾液乳杆菌tci153胶囊8周后，8位受试者的平均血液中燕窝酸含量增加了3.17皮克/毫升。由此可知，受试者服用唾液乳杆菌tci153后，可提高血液中的燕窝酸含量。[0104]请参阅图7，于服用唾液乳杆菌tci153胶囊前，8位受试者的平均血液中表皮生长因子含量为96.85皮克/毫升(图7标示第0周)，并于服用4周后，8位受试者的平均血液中表皮生长因子含量上升至130.40皮克/毫升(图7标示第4周)，接着于服用8周后，8位受试者的平均血液中表皮生长因子含量上升至123.94皮克/毫升(图7标示第8周)。换言之，相较于第0周，于服用唾液乳杆菌tci153胶囊8周后，8位受试者的平均血液中燕窝酸含量增加了27.09皮克/毫升。由此可知，受试者服用唾液乳杆菌tci153后，可提高血液中的燕窝酸含量及/或表皮生长因子含量，故提高受试者抗老化的能力。[0105]例九：人体肌肤试验[0106]为进一步确认唾液乳杆菌tci153对于人体的影响。以每颗胶囊含有1ꢀ×109cfu(即1×109cfu/cap)的唾液乳杆菌tci153的活菌胶囊提供给受试者每日服用一颗，并服用8周。并于服用唾液乳杆菌tci153胶囊前(视为第0周)、服用唾液乳杆菌tci153胶囊4周后(视为第4周)及服用唾液乳杆菌tci153胶囊8周后(视为第8周)以全脸仪(visiacomplexionanalysissystem(canfieldscientific,usa))进行分析。其中分析项目包括皱纹、肌肤毛孔、肌肤光泽度、肌肤含水量散失百分比及肌肤含水量。[0107]需要特别说明的是，第0周、第4周与第8周的量测结果之间的统计学显著差异是藉由学生t-试验来统计分析。在图12中，「**」代表在与控制组比较下其p值小于0.01。[0108]请参阅图8，将8位受试者于第0周量测到的皱纹的平均数值视为100％。相较于第0周，第4周量测到的皱纹的平均数值为99.7％，且第8周量测到的皱纹的平均数值为86.9％。换言之，在连续服用8周的唾液乳杆菌tci153胶囊后，8位受试者的皱纹平均下降13.1％。由此可知，唾液乳杆菌tci153具有改善受试者皱纹的能力。[0109]请参阅图9，将8位受试者于第0周量测到的毛孔的平均数值视为100％。相较于第0周，第4周量测到的毛孔的平均数值为100.2％，且第8周量测到的毛孔的平均数值为93.2％。换言之，在连续服用8周的唾液乳杆菌tci153胶囊后，8位受试者的毛孔平均下降6.8％。由此可知，唾液乳杆菌tci153具有改善受试者肌肤毛孔的能力。[0110]请参阅图10，将8位受试者于第0周量测到的肌肤光泽度的平均数值视为100％。相较于第0周，第4周量测到的肌肤光泽度的平均数值为105.1％，且第8周量测到的肌肤光泽度的平均数值为110.1％。换言之，在连续服用8周的唾液乳杆菌tci153胶囊后，8位受试者的肌肤光泽度平均上升10.1％。由此可知，唾液乳杆菌tci153具有改善受试者肌肤光泽度的能力。[0111]请参阅图11，将8位受试者于第0周量测到的肌肤含水量散失百分比的平均数值视为100％。相较于第0周，第4周量测到的肌肤含水量散失百分比的平均数值为93.9％，且第8周量测到的肌肤含水量散失百分比的平均数值为85.8％。换言之，在连续服用8周的唾液乳杆菌tci153胶囊后，8位受试者的肌肤含水量散失百分比平均下降14.2％，代表受试者的肌肤含水量散失的程度减少。由此可知，受试者服用唾液乳杆菌tci153后，可减缓肌肤散失水分的情形，进而提高受试者肌肤保湿力。[0112]请参阅图12，将8位受试者于第0周量测到的肌肤含水量的平均数值视为100％。相较于第0周，第4周量测到的肌肤含水量的平均数值为103.6％，且第8周量测到的肌肤含水量的平均数值为109.5％。换言之，在连续服用8周的唾液乳杆菌tci153胶囊后，8位受试者的肌肤含水量平均上升9.5％，代表受试者的肌肤含水量提高。由此可知，受试者服用唾液乳杆菌tci153后，可提高受试者肌肤含水量，进而提高受试者肌肤保湿力。[0113]于此，透过例二可知，唾液乳杆菌tci153可适应于人体肠胃环境。透过例三及例四可知，唾液乳杆菌tci153具有生成燕窝酸的能力，且唾液乳杆菌tci153较其他唾液乳杆菌菌株具有较佳的成燕窝酸的能力。透过例六可知，唾液乳杆菌tci153的破菌液具有可促进细胞生成弹力蛋白的作用。透过例七可知，唾液乳杆菌tci153的破菌液具有可促进细胞重组聚集胶原蛋白的作用。透过例八可知，唾液乳杆菌tci153具有提高受体血液中燕窝酸含量及表皮生长因子含量的作用。透过例九可知，唾液乳杆菌tci153具有改善肌肤状况的作用，其中改善肌肤状态包括改善皱纹、减少肌肤毛孔、提高肌肤光泽度、减少肌肤含水量散失百分比、提高肌肤含水量或其组合。[0114]综上所述，根据本发明任一实施例的唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液，其可制备改善肌肤状况的组合物。其中，唾液乳杆菌tci153可生成燕窝酸。并且，唾液乳杆菌tci153具有耐胃酸胆盐的功能，可生存于肠胃道环境。在一些实施例中，由于唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液可用以促进细胞生成弹力蛋白，唾液乳杆菌tci153具有提高受体肌肤弹性的能力。在一些实施例中，由于唾液乳杆菌tci153及/或其破菌液可用以促进细胞重组并聚集胶原蛋白，唾液乳杆菌tci153具有提高受体肌肤紧致度的能力。在一些实施例中，唾液乳杆菌tci153可用以提高受体肌肤光泽度、提高受体肌肤含水量、减少受体肌肤毛孔、减缓受体肌肤水分散失、减少皱纹或其组合，进而改善受体肌肤状态。在一些实施例中，唾液乳杆菌tci153可用以提高受体血液中燕窝酸含量及表皮生长因子含量，进而提高受体抗老化的能力。并且，所制备的组合物可为医药品、食品、保养品或化妆品。[0115]当然，本发明还可有其它多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明权利要求的保护范围。[0116][0117][0118][0119][0120][0121][0122]当前第1页1 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