一种核酸释放剂、核酸释放的方法与流程

1.本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种核酸释放剂、核酸释放的方法。


背景技术：

2.呼吸道感染是人类最常见的一类疾病，是全球范围内引起人群发病和死亡的最主要原因之一。目前已证明，大部分呼吸道疾病是病毒引起。病毒性感染的潜在危害极大，例如新型冠状病毒(sars
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cov
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2)，该病毒是一种先前未在人类中发现的新型冠状病毒，可导致急性感染性肺炎(covid
‑
19)，感染者初始症状多为发热、乏力和干咳。后续逐渐出现呼吸困难，严重者可出现急性呼吸窘迫综合征或脓毒症休克，甚至死亡。病毒性感染的金标准是实时荧光定量pcr，是一种用于指数扩增特定的核酸片段并用荧光信号来判断待检测的靶标是否存在的分子诊断方法，其最大特点，是能将微量的核酸进行大量的富集和增加，从而达到便于检测微量核酸的目的。由于rna的结构为单链结构，不稳定且容易降解，需要较为复杂的方法对待扩增的rna样品进行前处理和核酸提取并纯化，得到纯净的核酸后，方能进行检测得到稳定的结果。
3.目前临床样本检测中，磁珠法提取步骤简单，回收效率高，易于自动化提取，但是样本中核酸的提取和纯化中占有一定的时间，还需要有专门配套的自动化提取设备和相关耗材，当样本量比较大的情况下，严重影响样本检测的速度以及现场应用。同时病原体的样本前处理也是最危险的一个环节，一般情况下，工作人员在样本制备区要严格进行生物安全三级防护装备后，并在生物安全柜中完成核酸提取相关实验，既要防止病毒感染，又要防止样本被污染，造成结果不准确。因此，开发一种能快速释放核酸、不易造成交叉污染并且对后续核酸检测实验无影响的核酸快速释放方法成为目前亟待解决的问题。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种核酸释放剂，所述核酸释放剂由以下成分组成：50～200mm的tris
‑
hcl、80～800mm的乙二胺四乙酸二钠镁盐、质量/体积比为0.02％～2.2％的十二烷基磺酸钠(sds)、质量/体积比为0.06％～3％的二硫苏糖醇(dtt)、质量/体积比为0.02％～3.2％的磷酸脂甜菜碱、质量/体积比为0.08％～1.6％的儿茶酚。
5.进一步地，所述tris
‑
hcl的ph值的范围控制在6.0～9.0。
6.本发明中的核酸释放剂核酸释放的方法按照以下步骤进行：
7.s1：根据需要将释放核酸的样本类型不同，使用去离子水对样本进行漩涡震荡稀释，然后加入本发明中的核酸释放剂。
8.s2：将加入核酸释放剂后涡旋震荡10～30min，然后加热孵育，其中孵育的温度为80～95℃，孵育时间为2～20min，继而核酸得到有效释放。
9.优选的，所述步骤s1中样本和核酸释放剂的体积比为1:20～160。
10.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
11.本发明中，本发明的核酸释放剂强烈的蛋白变性剂，能够快速破解细胞、病毒的等
蛋白结构；能够快速灭活样本中的病毒和其他病原微生物，安全性高；本发明的核酸释放方法，能够快速释放血清、血浆、尿液、唾液、口腔拭子、干血斑斑、法医学样品及环境样品中的核酸，释放的核酸可用于检测、克隆、序列分析、分子杂交等下游实验。
附图说明
12.图1为本发明中核酸释放剂提取口腔拭子样本荧光pcr检测扩增图。
具体实施方式
13.下面对本发明实施例作具体详细的说明，本实施例在本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
14.实施例1
15.一种核酸释放剂、核酸释放的方法，所述核酸释放剂由以下成分组成：50mm的tris
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hcl、80mm的乙二胺四乙酸二钠镁盐、质量/体积比为0.02％的十二烷基磺酸钠(sds)、质量/体积比为0.06％的二硫苏糖醇(dtt)、质量/体积比为0.02％的磷酸脂甜菜碱、质量/体积比为0.08％的儿茶酚。
16.其中，所述tris
‑
hcl的ph值的范围控制在6.0。
17.本发明中的核酸释放剂核酸释放的方法按照以下步骤进行：
18.s1：根据需要将释放核酸的样本类型不同，使用去离子水对样本进行漩涡震荡稀释，然后加入本发明中的核酸释放剂；其中，样本和核酸释放剂的体积比为1:20。
19.s2：将加入核酸释放剂后涡旋震荡10min，然后加热孵育，其中孵育的温度为80℃，孵育时间为2min，继而核酸得到有效释放。
20.本实施例所采用的样本是干血斑。
21.实施例2
22.一种核酸释放剂、核酸释放的方法，所述核酸释放剂由以下成分组成：200mm的tris
‑
hcl、800mm的乙二胺四乙酸二钠镁盐、质量/体积比为2.2％的十二烷基磺酸钠(sds)、质量/体积比为3％的二硫苏糖醇(dtt)、质量/体积比为3.2％的磷酸脂甜菜碱、质量/体积比为1.6％的儿茶酚。
23.其中，所述tris
‑
hcl的ph值的范围控制在9.0。
24.本发明中的核酸释放剂核酸释放的方法按照以下步骤进行：
25.s1：根据需要将释放核酸的样本类型不同，使用去离子水对样本进行漩涡震荡稀释，然后加入本发明中的核酸释放剂；其中，样本和核酸释放剂的体积比为1:160。
26.s2：将加入核酸释放剂后涡旋震荡30min，然后加热孵育，其中孵育的温度为95℃，孵育时间为20min，继而核酸得到有效释放。
27.实施例3
28.一种核酸释放剂、核酸释放的方法，所述核酸释放剂由以下成分组成：100mm的tris
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hcl、200mm的乙二胺四乙酸二钠镁盐、质量/体积比为1.2％的十二烷基磺酸钠(sds)、质量/体积比为0.84％的二硫苏糖醇(dtt)、质量/体积比为1.2％的磷酸脂甜菜碱、质量/体
积比为0.69％的儿茶酚。
29.其中，所述tris
‑
hcl的ph值的范围控制在7.5。
30.本发明中的核酸释放剂核酸释放的方法按照以下步骤进行：
31.s1：根据需要将释放核酸的样本类型不同，使用去离子水对样本进行漩涡震荡稀释，然后加入本发明中的核酸释放剂；其中，样本和核酸释放剂的体积比为1:80。
32.s2：将加入核酸释放剂后涡旋震荡20min，然后加热孵育，其中孵育的温度为85℃，孵育时间为10min，继而核酸得到有效释放。
33.实施例4
34.一种核酸释放剂、核酸释放的方法，所述核酸释放剂由以下成分组成：150mm的tris
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hcl、600mm的乙二胺四乙酸二钠镁盐、质量/体积比为1.8％的十二烷基磺酸钠(sds)、质量/体积比为2.64％的二硫苏糖醇(dtt)、质量/体积比为2.9％的磷酸脂甜菜碱、质量/体积比为1.36％的儿茶酚。
35.其中，所述tris
‑
hcl的ph值的范围控制在8.4。
36.本发明中的核酸释放剂核酸释放的方法按照以下步骤进行：
37.s1：根据需要将释放核酸的样本类型不同，使用去离子水对样本进行漩涡震荡稀释，然后加入本发明中的核酸释放剂；其中，样本和核酸释放剂的体积比为1:120。
38.s2：将加入核酸释放剂后涡旋震荡25min，然后加热孵育，其中孵育的温度为90℃，孵育时间为15min，继而核酸得到有效释放。