一种提取棉花黄萎病致病菌孢内毒素的方法及其应用

技术特征：
1.一种提取棉花黄萎病致病菌孢内毒素的方法，其特征在于，采用如下步骤提取获得：(1)将直径为0.5cm的棉花黄萎病菌饼接种到经120℃灭菌15min的czapek’s培养液中，在25℃转速为130rpm/min的摇床中振荡培养3
‑
6天，至分生孢子在三角瓶壁上有成团结构出现为止；(2)将步骤(1)中培养获得的液体经140目和400目钢筛双层过滤后即可获得孢子悬浮液；(3)将步骤(2)中制备获得的孢子悬浮液在常温条件下，14000rpm/min离心10min，收集沉淀；(4)将步骤(3)中收集获得的沉淀采用灭菌水洗涤沉淀，重复14000rpm/min离心10min离心步骤，收集沉淀；(5)在步骤(4)中收集获得的沉淀中加入ph值为6.5
‑
8.5的0.05m磷酸缓冲液中悬浮沉淀；(6)采用灭菌水将步骤(5)中制备获得的悬浮液孢子浓度调节至107个/ml；(7)将步骤(6)中制备获得的孢子悬浮液经120mpa，温度10
‑
100℃，高压均浆机反复研磨3
‑
4次；(8)将步骤(7)中制备获得的均质液体于4℃，18000rpm/min离心25min，弃上清，用0.45μm的微孔滤膜过滤除杂菌，最终得到滤液为孢内毒素。2.如权利要求1所述的提取棉花黄萎病致病菌孢内毒素的方法，其特征在于，所述的0.05m磷酸缓冲液的ph值为6.5。3.如权利要求1所述的提取棉花黄萎病致病菌孢内毒素的方法，其特征在于，所述的高压均浆机研磨时温度为10℃。4.如权利要求1所述的提取棉花黄萎病致病菌孢内毒素的方法，其特征在于，所述的棉花黄萎病菌饼的振荡培养时间为5天。5.如权利要求1
‑
4任意一项所述的提取棉花黄萎病致病菌孢内毒素的方法提取获得的棉花黄萎病致病菌孢内毒素在构建棉花黄萎病侵染模型中的应用。6.如权利要求1
‑
4任意一项所述的提取棉花黄萎病致病菌孢内毒素的方法在构建棉花黄萎病侵染模型中的应用。7.如权利要求1
‑
4任意一项所述的提取棉花黄萎病致病菌孢内毒素的方法在培育棉花黄萎病抗性品种中的应用。8.如权利要求1
‑
4任意一项所述的提取棉花黄萎病致病菌孢内毒素的方法获得的棉花黄萎病致病菌孢内毒素在培育棉花黄萎病抗性品种中的应用。

技术总结
本发明提供的一种提取棉花黄萎病致病菌孢内毒素的方法及其应用，通过采用特定工艺参数及提取方法，能够有效的提取棉花黄萎病致病菌孢内毒素，克服了现有技术中所披露的提取胞外毒素作为侵染源却未见植株发病的技术缺陷。通过本发明提供的提取方法提取获得的棉花黄萎病致病菌孢内毒素，采用叶圆盘法，验证对棉花的致病性，叶圆盘不仅有黄化而且枯斑显著加重现象，表通过本发明提供的提取方法获得的胞内毒素具有较高的侵染力，对于棉花抗病育种技术领域具有广泛的实用性与巨大的潜在开发价值。值。值。


技术研发人员：赖成霞 玛依拉
受保护的技术使用者：新疆农业科学院经济作物研究所
技术研发日：2021.08.11
技术公布日：2021/12/2