技术特征:
1.突变的马达蛋白,其特征在于:来自sf1家族,分为1a、1b、2a、2b四个结构域;采用以下方式中的至少一种突变方式获得:(1)通过1b和/或2b结构域的碱基突变使得马达蛋白提高对dna双链的亲和力;(2)通过1a和/或2a结构域的碱基突变使得马达蛋白降低对dna的解链速度。2.根据权利要求1所述的突变的马达蛋白,其特征在于:野生型马达蛋白包括解旋酶tte uvrd、tth uvrd、pcra、rep中的至少一种,tte uvrd的氨基酸序列如seq id no.2所示。3.根据权利要求1所述的突变的马达蛋白,其特征在于:1a和/或2a突变包括:r71s突变、r597k突变、t34i突变、y613i突变中的至少一种。4.根据权利要求1所述的突变的马达蛋白,其特征在于:1b和/或2b突变包括:i418g突变、p414k突变、r415i突变、i418l突变、a421k突变中的至少一种。5.根据权利要求1所述的突变的马达蛋白,其特征在于:包括1a和/或2a突变、1b和/或2b突变中的至少两种的任意组合;1a和/或2a突变包括:r71s突变、r597k突变、t34i突变、y613i突变;1b和/或2b突变包括:i418g突变、p414k突变、r415i突变、i418l突变、a421k突变。6.根据权利要求1所述的突变的马达蛋白,其特征在于:还包括相似度不低于95%,能够达到相似功能的氨基酸序列;所述的相似功能包括:提高对dna双链的亲和力和/或降低对dna的解链速度。7.表达权利要求1
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6任一项所述的突变的马达蛋白的核酸序列。8.权利要求1
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6任一项所述的突变的马达蛋白的应用,其特征在于,用于dna扩增体系。9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,用于依赖解旋酶的dna等温扩增体系。10.一种依赖解旋酶的dna等温扩增试剂盒,其特征在于,包含权利要求1
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6任一项所述的突变的马达蛋白。
技术总结
本发明公开了一种突变的马达蛋白及其应用、试剂盒。通过特定的突变降低马达蛋白的量,增加了马达蛋白对DNA模板底物的亲和力,减慢了马达蛋白的解链速度,从而能够精确调控该马达蛋白与DNA聚合酶之间的功能协作,进而使其在核酸扩增中的应用,如基于突变马达蛋白的体外模拟等温扩增技术,尤其是低拷贝DNA模板时达到检测灵敏度更高的效果。达到检测灵敏度更高的效果。
技术研发人员:王永利 曹曼曼 秦闯华 鞠巍 徐根明
受保护的技术使用者:湖南大地同年生物科技有限公司
技术研发日:2021.08.31
技术公布日:2021/11/23