一种治疗白内障的化合物及其组合物、制备方法和医药用途与流程

1.本发明具体涉及公开了一系列黄芩苷衍生物及其制备方法、用途和质量控制方法。


背景技术：

2.黄芩苷是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物,常温下为淡黄色粉末，味苦。难溶于甲醇、乙醇、丙酮、微溶于氯仿和硝基苯、几乎不溶于水，可溶于热乙酸。遇三氯化铁显绿色，遇乙酸铅生成橙色的沉淀。溶于碱及氨水初显黄色，不久则变为黑棕色。具有显著的生物活性，具有抑菌、利尿、抗炎、降胆固醇、抗血栓形成、缓解哮喘、泻火解毒、止血、安胎、抗变态反应及解痉作用，也为哺乳动物肝脏涎酶的特异性抑制剂，具有调节某些疾病的作用，也具有较强的抗癌反应生理效能。主要用于治疗湿温，暑温胸闷呕吐，湿热痞满、泻痢黄疸、肺热咳嗽、高热烦渴、血热吐、痈肿疮毒,胎动不安症。另外黄芩苷还能吸收紫外线，清除氧自由基和抑制黑色素的生成，是一种很好的功能性美容化妆品原料。
3.黄芩苷的化学结构如下：
[0004][0005]
本发明人在对其结构改造过程中，通过对不同活性的筛选，意外发现，黄芩苷聚乙二醇酯类化合物具有显著的治疗白内障的作用，进一步通过合成工艺研究、组合物和活性评价研究，建立了黄芩苷聚乙二醇酯的合成工艺，并对其中的化合物建立了含量测定方法，以提高提取物工艺参数的优化和标定提取物的质量。


技术实现要素：

[0006]
本发明所要解决的技术问题是，发明治疗白内障的有效成分，建立其合成工艺，进而评价其预防和治疗白内障的作用，建立其质量控制方法。
[0007]
我们合成了大量黄芩苷的衍生物，并不同药理活性进行了筛选，意外地发现以d
‑
半乳糖所致大鼠白内障模型，黄芩苷聚乙二醇酯类衍生物可有效预防和治疗白内障。
[0008]
为此，本发明提供一种通式i所示结构的化合物：
[0009][0010]
其中n为1～50。
[0011]
优选的，其中n为1～10。
[0012]
更优选的，其中n为1～5。
[0013]
最优选的，其中n为1～2。
[0014]
最优选的具体化合物为：黄芩苷乙氧乙酯。
[0015]
本发明进一步提供通式i所示化合物在制备治疗白内障的药物中的应用，所述白内障是晶状体混浊性疾病。
[0016]
本发明进一步提供通式i所示化合物的制备方法，所述方法，包括以下步骤：
[0017]
1)黄芩苷钠盐的制备
[0018]
取黄芩苷混悬水中，搅拌形成混悬液，搅拌下各加入碳酸钠等有机钠盐或无机酸钠盐或氢氧化钠反应；反应后，滴加无水乙醇等有机溶剂，沉淀，抽滤，沉淀用结晶溶剂洗涤，继续用有机溶剂重结晶，干燥，得黄芩苷钠盐。
[0019]
其中，2
‑
溴乙基乙醚类化合物，聚合度n＝1
‑
50；有机钠盐包括甲醇钠、乙醇钠、酒石酸钠、邻苯二甲酸钠、枸橼酸钠等，无机酸钠包括碳酸钠、碳酸氢钠、硫酸钠、磷酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠等；反应温度为室温反应或者加热反应，优化温度为室温
‑
80℃，最优条件为室温；反应时间10min
‑
2天，优化为0.1
‑
8小时，最优为0.1
‑
0.7小时；反应沉淀用有机溶剂为无水乙醇、含水乙醇、甲醇、丙醇、丙酮等，优化为无水乙醇、含水乙醇；重结晶用有机溶剂为无水乙醇、含水乙醇、甲醇、丙醇、丙酮及他们的混合溶剂等，优化为无水乙醇、含水乙醇；重结晶温度为0
‑
80℃，优化温度为0℃
‑
室温，最优条件为0℃(冰水浴)。
[0020]
2)黄芩苷衍生物的制备
[0021]
称取黄芩苷钠盐，加入dmf等有机溶剂溶解，加入2
‑
溴乙基乙醚类化合物于反应液中，反应后，在反应液中倒入水，再加入乙酸乙酯等有机溶剂适量，于冰水浴静置9h，4℃静置6h，析出结晶，结晶抽滤，用结晶溶剂洗涤，继续用有机溶剂重结晶，干躁，得黄芩苷衍生物。
[0022]
其中，反应用有机溶剂包括二氯甲烷、氯仿，二甲基甲酰胺(dmf)、二甲基亚砜(dmso)、四氢呋喃(tmf)、乙酸乙酯、丙酮等，优化为二甲基甲酰胺(dmf)、二甲基亚砜(dmso)、四氢呋喃(tmf)；反应温度为室温反应或者加热反应，优化温度为室温
‑
160℃，最优条件为60
‑
120℃；反应时间10min
‑
2天，优化为2
‑
12小时，最优为6
‑
10小时；反应液加水量为反应液的2
‑
50倍，优化为8
‑
20倍，最优为10
‑
15倍；反应液结晶用有机溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、正丁醇等，优化为乙酸乙酯；反应液结晶用有机溶剂加入量为反应液的0.1
‑
20
倍，优化为0.2
‑
5倍，最优为0.5
‑
2倍；重结晶用有机溶剂为无水乙醇、含水乙醇、甲醇、丙醇、丙酮及他们的混合溶剂等，优化为无水乙醇、含水乙醇、乙酸乙酯及他们的混合溶剂；重结晶温度为0
‑
80℃，优化温度为0℃
‑
室温，最优条件为0℃(冰水浴)。
[0023]
本发明进一步提供第二种制备方法，所述方法，包括以下步骤：称取黄芩苷，加入dmf等有机溶剂溶解，加入2
‑
溴乙基乙醚类化合物于反应液中，反应后，在反应液中倒入水，再加入乙酸乙酯等有机溶剂适量，静置，析出结晶，结晶抽滤，用结晶溶剂洗涤，继续用有机溶剂重结晶，干躁，得黄芩苷衍生物。
[0024]
其中，2
‑
溴乙基乙醚类化合物，聚合度n＝1
‑
50；反应用有机溶剂包括二氯甲烷、氯仿，二甲基甲酰胺(dmf)、二甲基亚砜(dmso)、四氢呋喃(tmf)、乙酸乙酯、丙酮等，优化为二甲基甲酰胺(dmf)、二甲基亚砜(dmso)、四氢呋喃(tmf)；反应温度为室温反应或者加热反应，优化温度为室温
‑
160℃，最优条件为60
‑
120℃；反应时间10min
‑
2天，优化为2
‑
12小时，最优为6
‑
10小时；反应液加水量为反应液的2
‑
50倍，优化为8
‑
20倍，最优为10
‑
15倍；反应液结晶用有机溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、正丁醇等，优化为乙酸乙酯；反应液结晶用有机溶剂加入量为反应液的0.1
‑
20倍，优化为0.2
‑
5倍，最优为0.5
‑
2倍；重结晶用有机溶剂为无水乙醇、含水乙醇、甲醇、丙醇、丙酮及他们的混合溶剂等，优化为无水乙醇、含水乙醇、乙酸乙酯及他们的混合溶剂；重结晶温度为0
‑
80℃，优化温度为0℃
‑
室温，最优条件为0℃(冰水浴)。
[0025]
本发明进一步提供一种hplc法测定本发明通式i所示化合物含量的方法，所述方法，步骤如下：
[0026]
1)供试品溶液：精密称取通式i所示化合物5
‑
50mg，甲醇溶解，定容到约100μg/ml，即得.
[0027]
2)色谱条件：ods色谱柱(4.6
×
150mm)，检测波长：278nm；柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量：10μl；以甲醇为流动相a，以0.3％磷酸水为流动相b，按下表1中的规定进行梯度洗脱。
[0028]
表1黄芩苷衍生物含量测定色谱流动项梯度条件
[0029][0030]
其中，通式i所示化合物，其中n为1～50。
[0031]
优选的，其中n为1～10。
[0032]
更优选的，其中n为1～5。
[0033]
最优选的，其中n为1～2。
[0034]
最优选的具体化合物为：黄芩苷乙氧乙酯。
[0035]
本发明进一步包括，含有本发明通式i所示化合物的药物组合物，包括任何一种可供服用的药物制剂形式，如口服药物，非口服药物等，具体如片剂、胶囊剂和颗粒剂，注射剂，丸剂，贴剂等。
[0036]
本发明进一步发现了vc和偏弱酸性条件可以保护制剂中本发明通式i所示化合物的稳定性。
[0037]
本发明对本发明通式i所示化合物进行了药效试验，发现其具有预防和治疗白内障的功效。
[0038]
为此，本发明提供本发明通式i所示化合物在制备预防和治疗各种原因引起的白内障的药物中的应用，如：半乳糖血症引起的白内障、老年性白内障、外伤所致白内障和糖尿病并发性白内障、甲状腺功能减退引起的白内障、重金属中毒或其他原因引起的晶状体混浊。
[0039]
本发明公开的具有预防和治疗白内障作用的本发明通式i所示化合物，对于目前缺少医药治疗的广大白内障患者提供了希望，具有深远社会意义和应用价值。
附图说明
[0040]
图1、黄芩苷衍生物化学结构式
[0041]
图2、黄芩苷乙氧乙酯(实施例1所得化合物，化学通式中n＝1)的hplc色谱图
[0042]
图3、黄芩苷乙氧乙酯治疗前中后期的大鼠白内障裂隙灯观察的眼球照片
[0043]
图4、黄芩苷乙氧乙酯(实施例1所得化合物，化学通式中n＝1)的1hnmr核磁图谱
[0044]
图5、黄芩苷乙氧乙酯(实施例1所得化合物，化学通式中n＝1)的
13
cnmr核磁图谱
[0045]
图6、黄芩苷乙氧乙酯(实施例1所得化合物，化学通式中n＝1)的dept核磁图谱
[0046]
图7、黄芩苷乙氧乙酯(实施例1所得化合物，化学通式中n＝1)的1h
‑1h cosy核磁图谱
[0047]
图8、黄芩苷乙氧乙酯(实施例1所得化合物，化学通式中n＝1)的noesy核磁图谱
[0048]
图9、黄芩苷乙氧乙酯(实施例1所得化合物，化学通式中n＝1)的hmqc核磁图谱
[0049]
图10、黄芩苷乙氧乙酯(实施例1所得化合物，化学通式中n＝1)的hmbc核磁图谱
具体实施方式
[0050]
以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
[0051]
实施例1：黄芩苷乙氧乙酯的制备
[0052]
1)黄芩苷钠盐的制备
[0053]
称取黄芩苷500mg于试管中。加入3.88ml的水搅拌形成混悬液，搅拌下各加入碳酸钠1.12ml 0.5mol/l(和黄芩苷摩尔比0.5/1)，室温反应30min。然后分别滴加20ml无水乙醇，于冰水浴条件下结晶6h。然后抽滤，洗涤，沉淀用无水乙醇重结晶，干燥得黄芩苷钠盐，收率：90.62％。
[0054]
2)黄芩苷乙氧乙酯的制备
[0055]
称取2
‑
溴乙基乙醚8.17g(5倍)，加到300ml dmf中，搅拌下缓慢分批加入黄芩苷钠盐5.00g和适量碘化钠催化剂继续搅拌，90℃反应12h，反应完成后,取反应液中加水1500ml(5倍)，再加300ml乙酸乙酯剧烈摇晃，冰水浴静置过夜，次日抽滤，结晶用无水乙醇重结晶，干燥得产物3.59g，收率81.2％。
[0056]
核磁光谱鉴定：1h
‑
nmr(400mhz,cdcl3),δ(ppm):12.60(1h,s,5
‑
oh),8.71(1h,br.s,6
‑
oh),8.07
‑
8.09(2h,m，单取代苯环),7.58
‑
7.60(3h,m，单取代苯环),7.07(1h,s,h
‑
8),7.02(1h,s,h
‑
3),5.55
‑
5.56(2h,br.d),5.32
‑
5.35(2h,br.d),4.24(1h,d,glc
‑
1'),4.16
‑
4.25(2h,m),3.38
‑
3.57(6h,m,含3个oh),1.00(3h,t,ch3)；
13
c
‑
nmr(100mhz,cdcl3),δ(ppm):182.99，169.18，163.98，151.67，149.63，147.24，132.52，131.30，131.06，129.59(2个c)，126.82(2个c)，106.59，105.24，100.34，94.21，75.65，75.50，73.23，71.77，67.89，66.02，64.68，15.39。并通过dept、1h
‑1h cosy、noesy、hmqc、hmbc确证了其化学结构(见附图)。
[0057]
实施例2：黄芩苷乙氧乙酯的制备
[0058]
称取2
‑
溴乙基乙醚9.6g(6倍)，加到300ml dmf中，搅拌下缓慢分批加入黄芩苷5.00g和适量碘化钠催化剂继续搅拌，80℃反应8h，反应完成后,取反应液中加水2100ml(7倍)，再加450ml乙酸乙酯(1.5倍)剧烈摇晃，冰水浴静置过夜，次日抽滤，结晶用无水乙醇重结晶，干燥得产物2.63g，收率59.4％。
[0059]
实施例3：黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)的制备
[0060]
称取2
‑
溴乙氧乙基乙醚8.3g(4倍)，加到300ml dmf中，搅拌下缓慢分批加入黄芩苷5.00g和适量碘化钠催化剂继续搅拌，80℃反应8h，反应完成后,取反应液中加水2100ml(7倍)，再加450ml乙酸乙酯(1.5倍)剧烈摇晃，冰水浴静置过夜，次日抽滤，结晶用无水乙醇重结晶，干燥得产物2.99g，收率62.3％。
[0061]
实施例4：黄芩苷聚乙二醇酯
‑
5(通式n＝5)的制备
[0062]
称取2
‑
溴聚乙氧基乙基乙醚(n＝5)19.6g(5倍)，加到500ml dmf中，搅拌下缓慢分批加入黄芩苷5.00g和适量碘化钠催化剂继续搅拌，80℃反应8h，反应完成后,取反应液中加水2000ml(4倍)，再加500ml乙酸乙酯(1倍)剧烈摇晃，冰水浴静置过夜，次日抽滤，结晶用无水乙醇重结晶，干燥得产物3.07g，收率51.9％。
[0063]
实施例5：黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)的制备
[0064]
称取2
‑
溴聚聚乙氧乙基乙醚(n＝50)36.3g(5倍)，加到800ml dmf中，搅拌下缓慢分批加入黄芩苷5.00g和适量碘化钠催化剂继续搅拌，80℃反应8h，反应完成后,取反应液中加水4000ml(5倍)，再加400ml乙酸乙酯(0.5倍)剧烈摇晃，冰水浴静置过夜，次日抽滤，结晶用无水乙醇重结晶，干燥得产物9.52g，收率41.7％。
[0065]
实施例6：组合物
‑
黄芩苷乙氧乙酯片的制备
[0066]
取实施例1得到的黄芩苷乙氧乙酯粉末与淀粉、微晶纤维素等辅料分别过100目筛后，按各处方比例称取混匀，加入适量80％乙醇制软材，16目筛制粒，50℃热风干燥90min。14目筛整粒后，加入适量滑石粉和硬脂酸镁，打片，即得。
[0067]
处方组成：每片500mg，含黄芩苷乙氧乙酯100mg。
[0068]
处方如下：
[0069]
[0070][0071]
实施例7：组合物
‑
黄芩苷聚乙二醇酯
‑
5胶囊的制备
[0072]
取实施例4得到的黄芩苷聚乙二醇酯
‑
5粉末与淀粉、微晶纤维素等辅料分别过100目筛后，按各处方比例称取混匀，加入适量80％乙醇制软材，16目筛制粒，50℃热风干燥90min。14目筛整粒后，加入适量滑石粉和硬脂酸镁，填充胶囊，即得。
[0073]
处方组成：每粒250mg，黄芩苷聚乙二醇酯
‑
5含量150mg。
[0074]
处方如下：
[0075][0076]
实施例8：组合物
‑
黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)颗粒剂的制备
[0077]
取实施例3得到的黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)粉末与淀粉、微晶纤维素等辅料分别过100目筛后，按各处方比例称取混匀，加入适量80％乙醇制软材，16目筛制粒，50℃热风干燥90min。14目筛整粒后，加入适量滑石粉和硬脂酸镁，装袋，即得。
[0078]
处方组成：每袋1g，含黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)150mg。
[0079]
处方如下：
[0080][0081]
[0082]
实施例9：组合物
‑
黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)颗粒剂的制备
[0083]
取实施例5得到的黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)粉末与淀粉、微晶纤维素等辅料分别过100目筛后，按各处方比例称取混匀，加入适量80％乙醇制软材，16目筛制粒，50℃热风干燥90min。14目筛整粒后，加入适量滑石粉和硬脂酸镁，装袋，即得。
[0084]
处方组成：每袋2g，含黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)500mg。
[0085]
处方如下：
[0086][0087]
实施例10：黄芩苷聚乙二醇酯治疗半乳糖血症引起的白内障
[0088]
选取健康大鼠180只，雌雄兼用，体重180－220g。从中取出20只作为空白对照组，其余动物按10g/kg剂量腹腔注射50％的d
‑
半乳糖水溶液，每天一次，连续15天，同时供给5％d
‑
半乳糖溶液自由饮用12天，空白对照组动物腹腔注射等容量0.9％氯化钠注射液，供给自来水饮用。注射d
‑
半乳糖结束时，在裂隙灯显微镜下检查晶体浑浊程度，剔除晶体全部混浊及没有明显变化的大鼠，选用浑浊程度相近的大鼠100只，按性别和晶体浑浊程度随机分为5组，每组20只。雌雄兼用。5组分别为模型组、阳性药对照组(障眼明片组)、给药组：黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷聚乙二醇酯(通式n＝5)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯(通式n＝50)400mg/kg剂量组。
[0089]
给药：正常对照组和模型组给予蒸馏水，阳性药对照组造模后给予障眼明片2片/kg剂量，药物组造模后给予黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷聚乙二醇酯(通式n＝5)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯(通式n＝50)400mg/kg剂量组。给药途径为经灌胃给药。给药容量均为10ml/kg体重。每天9－11时给药一次，连续30天。分别于给药5天、10天、15天、20天、30天检查晶体浑浊度，并按晶体浑浊度评分标准，打出分值。大鼠晶体浑浊度评分标准，见表2。
[0090]
表2大鼠晶体浑浊度评分标准
[0091]
阶段晶体浑浊度分值1晶体澄清02晶体周边出现细小空泡0.1 空泡占晶体前皮质面积的1/30.7 空泡占晶体前皮质面积的2/31.03空泡液化或出现乳光或出现点状、条状白色浑浊2.0
4晶体散在片状白色沉淀3.05晶体核开始浑浊4.06晶体全部混浊5.0
[0092]
结果表明(见表3)：正常对照组动物晶体澄清，无任何病变发生。模型组停止注射d
‑
半乳糖后，晶体浑浊度仍能缓慢上升，使晶体浑浊度维持在较高水平。造模后，黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷聚乙二醇酯
‑
5(通式n＝5)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组均有显著治疗效果；综合分析认为黄芩苷衍生物对大鼠d
‑
半乳糖性白内障有明显的治疗作用，作用强度强于等效量的障眼明片。
[0093]
表3对晶体浑浊度的影响
[0094][0095][0096]
注：*与模型组比较，p<0.05；**与模型组比较，p<0.01
[0097]
实施例11：治疗糖尿病并发性白内障活性测试
[0098]
选取自发性糖尿病大鼠180只，雌雄兼用，体重180－200g。从中取出20只作为空白对照组，其余动物按8g/kg剂量腹腔注射50％d
‑
半乳糖，每天一次，连续15天，同时供给5％d
‑
半乳糖溶液自由饮用12天，空白对照组动物腹腔注射等容量0.9％氯化钠注射液，供给自来水饮用。注射d
‑
半乳糖结束时，在裂隙灯显微镜下检查晶体浑浊程度，剔除晶体全部混浊及没有明显变化的大鼠，选用浑浊程度相近的大鼠100只，按性别和晶体浑浊程度随机分为5组，每组20只。雌雄兼用。5组分别为模型组、阳性药对照组(障眼明片组)、给药组：黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷聚乙二醇酯
‑
5(通式n＝5)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组。
[0099]
给药：正常对照组和模型组给予蒸馏水，阳性药对照组给予障眼明片2片/kg剂量，黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷聚乙二醇酯
‑
5(通式n＝5)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组。给药途径为经灌胃给药。给药容量均为10ml/kg体重。每天9－11时给药一次，连续30天。分别于给药5天、10天、15天、20
天、30天检查晶体浑浊度，并按晶体浑浊度评分标准，打出分值。大鼠晶体浑浊度评分标准，见表2。
[0100]
结果表明(见表4)，正常对照组动物晶体澄清，无任何病变发生。模型组停止注射d
‑
半乳糖后，晶体浑浊度仍能缓慢上升，使晶体浑浊度维持在较高水平。黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷聚乙二醇酯
‑
5(通式n＝5)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组对糖尿病大鼠d
‑
半乳糖性白内障有显著的治疗作用，作用强度强于等效量的障眼明片。
[0101]
表4对晶体浑浊度的影响
[0102][0103]
注：*与模型组比较，p<0.05；**与模型组比较，p<0.01
[0104]
实施例12：治疗老年性白内障活性测试
[0105]
选取1岁龄大鼠180只，雌雄兼用，体重450－550g。从中取出20只作为空白对照组，其余动物按10g/kg剂量腹腔注射50％d
‑
半乳糖，每天一次，连续15天，同时供给5％d
‑
半乳糖溶液自由饮用12天，空白对照组动物腹腔注射等容量0.9％氯化钠注射液，供给自来水饮用。注射d
‑
半乳糖结束时，在裂隙灯显微镜下检查晶体浑浊程度，剔除晶体全部混浊及没有明显变化的大鼠，选用浑浊程度相近的大鼠100只，按性别和晶体浑浊程度随机分为5组，每组20只。雌雄兼用。5组分别为模型组、阳性药对照组(障眼明片组)、给药组：黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组。
[0106]
给药：正常对照组和模型组给予蒸馏水，阳性药对照组给予障眼明片2片/kg剂量，黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组。给药途径为经灌胃给药。给药容量均为10ml/kg体重。每天9－11时给药一次，连续30天。分别于给药5天、10天、15天、20天、30天检查晶体浑浊度，并按晶体浑浊度评分标准，打出分值。大鼠晶体浑浊度评分标准，
见表2。
[0107]
结果表明，正常对照组动物晶体澄清，无任何病变发生。模型组停止注射d
‑
半乳糖后，晶体浑浊度仍能缓慢上升，使晶体浑浊度维持在较高水平。黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组对老年性白内障有显著的治疗作用，作用强度强于等效量的障眼明片。见表5。
[0108]
表5对晶体浑浊度的影响
[0109][0110]
注：*与模型组比较，p<0.05；**与模型组比较，p<0.01
[0111]
实施例13：治疗外伤所致白内障
[0112]
选取大鼠180只，雌雄兼用，体重180－220g。从中取出20只作为空白对照组，其余动物，使用20g铁球20cm高度拍打眼球100次，每周一次。第一次拍打后，在裂隙灯显微镜下检查晶体浑浊程度，剔除晶体全部混浊及没有明显变化的大鼠，选用浑浊程度相近的大鼠100只，按性别和晶体浑浊程度随机分为5组，每组20只。雌雄兼用。5组分别为模型组、阳性药对照组(障眼明片组)、给药组：黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组。
[0113]
给药：第一次拍打后第二天给药。正常对照组和模型组给予蒸馏水，阳性药对照组给予障眼明片2片/kg剂量，黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组。给药途径为经灌胃给药。给药容量均为10ml/kg体重。每天9－11时给药一次，连续30天。分别于给药5天、10天、15天、20天、30天检查晶体浑浊度，并按晶体浑浊度评分标准，打出分值。大鼠晶体浑浊度评分标准，见表2。
[0114]
结果表明(见表6)，正常对照组动物晶体澄清，无任何病变发生。模型组晶体浑浊
度仍能晶体浑浊度维持在较高水平。黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组对外伤所致白内障有显著的治疗作用，作用强度强于等效量的障眼明片。。
[0115]
表6对晶体浑浊度的影响
[0116][0117]
注：*与模型组比较，p<0.05；**与模型组比较，p<0.01
[0118]
实施例14：治疗甲状腺功能减退并发白内障活性测试
[0119]
选取自发性甲状腺功能减退大鼠180只，雌雄兼用，体重180－200g。从中取出20只作为空白对照组，其余动物按10g/kg剂量腹腔注射50％d
‑
半乳糖，每天一次，连续15天，同时供给5％d
‑
半乳糖溶液自由饮用12天，空白对照组动物腹腔注射等容量0.9％氯化钠注射液，供给自来水饮用。注射d
‑
半乳糖结束时，在裂隙灯显微镜下检查晶体浑浊程度，剔除晶体全部混浊及没有明显变化的大鼠，选用浑浊程度相近的大鼠100只，按性别和晶体浑浊程度随机分为5组，每组20只。雌雄兼用。5组分别为模型组、阳性药对照组(障眼明片组)、给药组：黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组。
[0120]
给药：正常对照组和模型组给予蒸馏水，阳性药对照组给予障眼明片2片/kg剂量，黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组。给药途径为经灌胃给药。给药容量均为10ml/kg体重。每天9－11时给药一次，连续30天。分别于给药5天、10天、15天、20天、30天检查晶体浑浊度，并按晶体浑浊度评分标准，打出分值。大鼠晶体浑浊度评分标准，见表2。
[0121]
结果表明(见表7)：正常对照组动物晶体澄清，无任何病变发生。模型组停止注射d
‑
半乳糖后，晶体浑浊度仍能缓慢上升，使晶体浑浊度维持在较高水平。黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚
乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组对甲状腺功能减退并发白内障有显著的治疗作用，作用强度强于等效量的障眼明片。
[0122]
表7对晶体浑浊度的影响
[0123][0124]
注：*与模型组比较，p<0.05；**与模型组比较，p<0.01
[0125]
实施例15：治疗重金属中毒诱发的白内障活性测试
[0126]
选取25窝大鼠，仔鼠体重20
–
30g，每窝选留6
–
8只幼鼠，尽量雌雄各半。从中取出3窝幼鼠，雌雄兼用，作为空白对照组，其余幼鼠颈脊部皮下注射0.0173％亚硒酸钠，剂量为3.46mg/kg，容量为2ml/100g，于第1、3、5天注射亚硒酸钠，第7天在裂隙灯显微镜下检查晶体，剔除晶体全部混浊及没有明显变化的幼鼠，选用的幼鼠按性别和晶体浑浊程度随机分为5组，每组20只，雌雄兼用。5组分别为模型组、阳性药组(障眼明片)，给药组：黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组。
[0127]
给药：正常对照组灌胃给予蒸馏水；阳性药组灌胃给予障眼明片2片/kg；黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组；模型组灌胃给予蒸馏水。灌胃溶量均为1ml/100g体重，每天8
–
11时给药一次，连续给药60天。分别于给药5天、10天、20天、30天、40天、50天和60天检查晶体浑浊度，并按表2大鼠晶体浑浊度评分标准打出分值。
[0128]
结果表明(见表8)：正常对照组大鼠晶体澄明，无任何病变发生。模型组停止注射亚硒酸钠后，晶体浑浊度仍能缓慢上升，晶体浑浊度仍能维持在较高水平。黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组对大鼠硒性白内障有显著的治疗作用。治疗作用强度与障眼明片强。
[0129]
表8对硒性白内障大鼠晶体浑浊度的影响
[0130][0131][0132]
注：*与模型组比较，p<0.05；**与模型组比较，p<0.01。
[0133]
实施例16：预防半乳糖血症引起的白内障作用测试
[0134]
选取wistar大鼠120只，体重100－120g。按体重随机分成6组，每组20只，雌雄各半。六组分别为空白对照组、模型组、阳性药组、黄芩苷乙氧乙酯组、黄芩苷二聚乙二醇酯组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50组。
[0135]
给药：空白对照组，灌胃给予蒸馏水；模型组灌胃给予蒸馏水；阳性药组给予障眼明片(2片/kg)；给药组：黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组。灌胃容量均为1ml/100g体重，每天9－11时给药一次，连续18天。
[0136]
白内障造模：于给药第四天，开始造模，除空白对照组外，其余五组动物均腹腔注射50％d
‑
半乳糖(用注射水配制)，剂量为10g/kg，每天一次，连续15天，同时给予5％d
‑
半乳糖溶液(用自来配制)，自由饮用12天。
[0137]
分别于给药13天(造模10天)、给药15天(造模12天)和给药18天(造模15天)，用裂隙灯显微镜检查大鼠晶体浑浊度，并依照表2晶体浑浊度评分标准得出分值。
[0138]
结果表明(见表9)：正常对照组大鼠晶体澄明，无任何病变发生。模型组大鼠在造模期间，晶体浑浊度明显上升。黄芩苷乙氧乙酯(通式n＝1)80mg/kg剂量组、黄芩苷二聚乙二醇酯(通式n＝2)100mg/kg剂量组和黄芩苷聚乙二醇酯
‑
50(通式n＝50)400mg/kg剂量组对大鼠d
‑
半乳糖所致的白内障有一定的预防作用，作用强度强于等效量的障眼明片。
[0139]
表9对d
‑
半乳糖性白内障大鼠晶体浑浊度的影响
[0140][0141][0142]
注：*与模型组比较，p<0.05；**与模型组比较，p<0.01。
[0143]
实施例17：含量测定
[0144]
1)供试品溶液：精密称取权利要求1所述黄芩苷乙氧乙酯50mg，甲醇溶解，定容到约100μg/ml，即得.
[0145]
2)色谱条件：ods色谱柱(4.6
×
150mm)，检测波长：278nm；柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量：10μl；以甲醇为流动相a，以0.3％磷酸水为流动相b，按下表中的规定进行梯度洗脱。
[0146]
梯度洗脱条件：
[0147]
流速ml/min时间min甲醇0.3％磷酸水1010901156040130982140982