技术特征：
1.ssr引物组，包括引物对1、引物对2、引物对3、引物对4、引物对5、引物对6、引物对7、引物对8、引物对9、引物对10、引物对11、引物对12、引物对13、引物对14、引物对15、引物对16、引物对17、引物对18、引物对19、引物对20、引物对21、引物对22、引物对23、引物对24、引物对25、引物对26、引物对27、引物对28和引物对29；所述引物对1由引物1-f和引物1-r组成；所述引物对2由引物2-f和引物2-r组成；所述引物对3由引物3-f和引物3-r组成；所述引物对4由引物4-f和引物4-r组成；所述引物对5由引物5-f和引物5-r组成；所述引物对6由引物6-f和引物6-r组成；所述引物对7由引物7-f和引物7-r组成；所述引物对8由引物8-f和引物8-r组成；所述引物对9由引物9-f和引物9-r组成；所述引物对10由引物10-f和引物10-r组成；所述引物对11由引物11-f和引物11-r组成；所述引物对12由引物12-f和引物12-r组成；所述引物对13由引物13-f和引物13-r组成；所述引物对14由引物14-f和引物14-r组成；所述引物对15由引物15-f和引物15-r组成；所述引物对16由引物16-f和引物16-r组成；所述引物对17由引物17-f和引物17-r组成；所述引物对18由引物18-f和引物18-r组成；所述引物对19由引物19-f和引物19-r组成；所述引物对20由引物20-f和引物20-r组成；所述引物对21由引物21-f和引物21-r组成；所述引物对22由引物22-f和引物22-r组成；所述引物对23由引物23-f和引物23-r组成；所述引物对24由引物24-f和引物24-r组成；所述引物对25由引物25-f和引物25-r组成；所述引物对26由引物26-f和引物26-r组成；所述引物对27由引物27-f和引物27-r组成；所述引物对28由引物28-f和引物28-r组成；所述引物对29由引物29-f和引物29-r组成；所述引物1-f为序列表的序列1所示的单链dna分子；所述引物1-r为序列表的序列2所示的单链dna分子；所述引物2-f为序列表的序列3所示的单链dna分子；所述引物2-r为序列表的序列4所示的单链dna分子；所述引物3-f为序列表的序列5所示的单链dna分子；所述引物3-r为序列表的序列6所示的单链dna分子；所述引物4-f为序列表的序列7所示的单链dna分子；所述引物4-r为序列表的序列8所示的单链dna分子；所述引物5-f为序列表的序列9所示的单链dna分子；所述引物5-r为序列表的序列10所示的单链dna分子；所述引物6-f为序列表的序列11所示的单链dna分子；所述引物6-r为序列表的序列12所示的单链dna分子；所述引物7-f为序列表的序列13所示的单链dna分子；所述引物7-r为序列表的序列14所示的单链dna分子；所述引物8-f为序列表的序列15所示的单链dna分子；所述引物8-r为序列表的序列16所示的单链dna分子；所述引物9-f为序列表的序列17所示的单链dna分子；所述引物9-r为序列表的序列18所示的单链dna分子；所述引物10-f为序列表的序列19所示的单链dna分子；所述引物10-r为序列表的序列20所示的单链dna分子；所述引物11-f为序列表的序列21所示的单链dna分子；
所述引物11-r为序列表的序列22所示的单链dna分子；所述引物12-f为序列表的序列23所示的单链dna分子；所述引物12-r为序列表的序列24所示的单链dna分子；所述引物13-f为序列表的序列25所示的单链dna分子；所述引物13-r为序列表的序列26所示的单链dna分子；所述引物14-f为序列表的序列27所示的单链dna分子；所述引物14-r为序列表的序列28所示的单链dna分子；所述引物15-f为序列表的序列29所示的单链dna分子；所述引物15-r为序列表的序列30所示的单链dna分子；所述引物16-f为序列表的序列31所示的单链dna分子；所述引物16-r为序列表的序列32所示的单链dna分子；所述引物17-f为序列表的序列33所示的单链dna分子；所述引物17-r为序列表的序列34所示的单链dna分子；所述引物18-f为序列表的序列35所示的单链dna分子；所述引物18-r为序列表的序列36所示的单链dna分子；所述引物19-f为序列表的序列37所示的单链dna分子；所述引物19-r为序列表的序列38所示的单链dna分子；所述引物20-f为序列表的序列39所示的单链dna分子；所述引物20-r为序列表的序列40所示的单链dna分子；所述引物21-f为序列表的序列41所示的单链dna分子；所述引物21-r为序列表的序列42所示的单链dna分子；所述引物22-f为序列表的序列43所示的单链dna分子；所述引物22-r为序列表的序列44所示的单链dna分子；所述引物23-f为序列表的序列45所示的单链dna分子；所述引物23-r为序列表的序列46所示的单链dna分子；所述引物24-f为序列表的序列47所示的单链dna分子；所述引物24-r为序列表的序列48所示的单链dna分子；所述引物25-f为序列表的序列49所示的单链dna分子；所述引物25-r为序列表的序列50所示的单链dna分子；所述引物26-f为序列表的序列51所示的单链dna分子；所述引物26-r为序列表的序列52所示的单链dna分子；所述引物27-f为序列表的序列53所示的单链dna分子；所述引物27-r为序列表的序列54所示的单链dna分子；所述引物28-f为序列表的序列55所示的单链dna分子；所述引物28-r为序列表的序列56所示的单链dna分子；所述引物29-f为序列表的序列57所示的单链dna分子；所述引物29-r为序列表的序列58所示的单链dna分子。2.如权利要求1所述ssr引物组，其特征在于：所述ssr引物组由所述引物对1、所述引物对2、所述引物对3、所述引物对4、所述引物对5、所述引物对6、所述引物对7、所述引物对8、
所述引物对9、所述引物对10、所述引物对11、所述引物对12、所述引物对13、所述引物对14、所述引物对15、所述引物对16、所述引物对17、所述引物对18、所述引物对19、所述引物对20、所述引物对21、所述引物对22、所述引物对23、所述引物对24、所述引物对25、所述引物对26、所述引物对27、所述引物对28和所述引物对29组成。3.权利要求1或2所述ssr引物组在如下m1)-m10)中任一种中的应用：m1)制备分析或评价槭叶铁线莲遗传多样性的产品；m2)制备分析或评价槭叶铁线莲遗传分化程度的产品；m3)制备分析或评价槭叶铁线莲遗传亲缘关系的产品；m4)制备构建或制备槭叶铁线莲遗传图谱或指纹图谱的产品；m5)制备鉴定不同地理种群槭叶铁线莲的产品；m6)分析或评价槭叶铁线莲遗传多样性；m7)分析或评价槭叶铁线莲遗传分化程度；m8)分析或评价槭叶铁线莲遗传亲缘关系；m9)构建或制备槭叶铁线莲遗传图谱或指纹图谱；m10)鉴定或区分不同地理种群槭叶铁线莲。4.含有权利要求1或2所述ssr引物组的试剂盒；所述试剂盒具有如下n1)-n5)任一种功能：n1)分析或评价槭叶铁线莲遗传多样性；n2)分析或评价槭叶铁线莲遗传分化程度；n3)分析或评价槭叶铁线莲遗传亲缘关系；n4)构建或制备槭叶铁线莲遗传图谱或指纹图谱；n5)鉴定或区分不同地理种群槭叶铁线莲。5.权利要求4所述试剂盒的制备方法，包括将权利要求1或2所述ssr引物组中的各条引物分别单独包装的步骤。6.权利要求4所述试剂盒在如下m1)-m10)中任一种中的应用：m1)制备分析或评价槭叶铁线莲遗传多样性的产品；m2)制备分析或评价槭叶铁线莲遗传分化程度的产品；m3)制备分析或评价槭叶铁线莲遗传亲缘关系的产品；m4)制备构建或制备槭叶铁线莲遗传图谱或指纹图谱的产品；m5)制备鉴定不同地理种群槭叶铁线莲的产品；m6)分析或评价槭叶铁线莲遗传多样性；m7)分析或评价槭叶铁线莲遗传分化程度；m8)分析或评价槭叶铁线莲遗传亲缘关系；m9)构建或制备槭叶铁线莲遗传图谱或指纹图谱；m10)鉴定或区分不同地理种群槭叶铁线莲。7.一种分析或评价槭叶铁线莲遗传多样性的方法或一种分析或评价槭叶铁线莲遗传分化程度的方法或一种分析或评价槭叶铁线莲遗传亲缘关系的方法或一种构建或制备槭叶铁线莲遗传图谱或指纹图谱的方法或一种鉴定或区分不同地理种群槭叶铁线莲的方法，包括采用权利要求1或2所述ssr引物组对槭叶铁线莲叶片基因组dna进行pcr扩增的步骤。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：采用引物对1进行pcr扩增时的引物退火温度为62℃，循环数为30；采用引物对2进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对3进行pcr扩增时的引物退火温度为60℃，循环数为30；采用引物对4进行pcr扩增时的引物退火温度为60℃，循环数为30；采用引物对5进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对6进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对7进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对8进行pcr扩增时的引物退火温度为60℃，循环数为30；采用引物对9进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对10进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对11进行pcr扩增时的引物退火温度为62℃，循环数为30；采用引物对12进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对13进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对14进行pcr扩增时的引物退火温度为60℃，循环数为30；采用引物对15进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32。采用引物对16进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对17进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对18进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对19进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对20进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对21进行pcr扩增时的引物退火温度为60℃，循环数为30；采用引物对22进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对23进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对24进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对25进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对26进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对27进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对28进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32；采用引物对29进行pcr扩增时的引物退火温度为58℃，循环数为32。9.权利要求1或2所述ssr引物组的开发方法，包括如下步骤：1)对不同地理种群槭叶铁线莲样品进行简化基因组测序，所有样品测序结果在一起拼接，运行拼接程序，把拼接最长的20％的序列保存为fasta文本格式，每一个fasta文件包含一个完整的拼接序列；2)使用ssrhunter1.3软件对每一条拼接序列进行检验，检验条件如下：构成重复元件的核苷酸数最多为6、重复次数最少为4，得到候选ssr分子标记；3)使用primer3对所述候选ssr分子标记进行引物设计，引物设计条件如下：扩增产物总长度≤200bp、前序列引物起始位置≤125bp、后序列引物起始位置≥175bp，得到候选ssr引物；
4)分别在不同地理种群槭叶铁线莲样品中选择代表样品对所述候选ssr引物进行筛选，筛选标准如下：所选ssr引物在每个代表样品中均能扩增出清晰稳定的条带且该ssr引物在不同代表样品中扩增出的条带至少有1处存在差异，最终得到权利要求1或2所述ssr引物组。10.如权利要求3所述的应用或权利要求4所述的试剂盒或权利要求6所述的应用或权利要求7-9任一所述的方法，其特征在于：所述槭叶铁线莲为来源于北京的槭叶铁线莲、来源于河北的槭叶铁线莲和来源于河南的槭叶铁线莲。
技术总结
本发明公开了一种用于槭叶铁线莲遗传多样性分析的SSR分子标记及其应用。本发明还公开了用于槭叶铁线莲遗传多样性分析的SSR引物组，其由引物对1-引物对29组成。所述SSR引物组具有如下n1)-n5)任一种功能：n1)分析或评价槭叶铁线莲遗传多样性；n2)分析或评价槭叶铁线莲遗传分化程度；n3)分析或评价槭叶铁线莲遗传亲缘关系；n4)构建或制备槭叶铁线莲遗传图谱或指纹图谱；n5)鉴定或区分不同地理种群槭叶铁线莲。本发明利用简化基因组的测序结果进行拼接，筛选出适宜槭叶铁线莲遗传多样性研究的SSR分子标记，对开展槭叶铁线莲遗传多样性研究和保育工作具有重要意义。研究和保育工作具有重要意义。
技术研发人员：赵正楠 赵世伟 张红伟 杨媛 李进宇 陈晓 吉乃喆 冯慧
受保护的技术使用者：北京市园林绿化科学研究院
技术研发日：2022.03.04
技术公布日：2022/5/6