技术特征：
1.一株高效产麦角甾醇的酿酒酵母工程菌株，其特征在于：所述酿酒酵母工程菌株是在酿酒酵母宿主中过表达seq id no.1所示的脂质转运蛋白基因sec14基因构建得到的，脂质转运蛋白基因sec14的核苷酸序列为seq id no.1，其所编码的的氨基酸序列为seq id no.2。2.根据权利要求1所述的高效产麦角甾醇的酿酒酵母工程菌株，其特征在于：所述工程菌株在构建时所采用的表达载体为prs426，所采用的宿主菌为酿酒酵母菌株(saccharomyces cerevisiae)by4741。3.根据权利要求2所述的高效产麦角甾醇的酿酒酵母工程菌株，其特征在于：所述工程菌株在构建时构建了包含ha-tag的sec14融合基因。4.如权利要求1至3任一项所述的酿酒酵母工程菌株的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将seq id no.1所示的sec14基因与ha-tag构建融合基因至表达载体prs426中；(2)对构建的表达载体采用醋酸锂转化法转入酿酒酵母by4741进行表达；(3)通过尿嘧啶营养缺陷型固体酵母培养基筛选，能够在尿嘧啶营养缺陷型固体培养基上生长出的单菌落，即得到单克隆重组菌株。5.如权利要求1至3任一项所述的酿酒酵母工程菌株的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将seq id no.1所示的sec14基因与3ha即ha
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3构建融合基因；(2)以质粒pyx212为模板，进行pcr扩增，得到p
tpi1
启动子；(3)将融合基因和p
tpi1
启动子与载体prs426连接，构建含有sec14基因的重组质粒；(4)对构建的重组质粒采用醋酸锂转化法导入酿酒酵母by4741中进行表达；(5)在尿嘧啶营养缺陷型固体培养基上得到高表达sec14的by4741/prs426-p
tpi1-sec14-3ha菌株，即得。6.如权利要求1至3任一项所述的酿酒酵母工程菌株在生产麦角甾醇中的应用。7.利用如权利要求1至3任一项所述的酿酒酵母工程菌株发酵生产麦角甾醇的方法，其特征在于：步骤如下：将酿酒酵母工程菌划线于尿嘧啶营养缺陷型固体培养基平板上，28～30℃培养48-72h，将活化后的菌种，接1-2环于装有3-5ml尿嘧啶营养缺陷型液体培养基的试管中，28～30℃，180-220rpm条件下培养12-16h即为种子培养液，将种子培养液按2-10％接种量接入到尿嘧啶营养缺陷型的发酵培养基中，28～30℃，180-220rpm条件下发酵24-36h，即得。8.根据权利要求7所述的发酵生产麦角甾醇的方法，其特征在于：所述尿嘧啶营养缺陷型固体培养基为：酵母氮源基础6.5-7g/l，灭菌结束后加入尿嘧啶缺陷型氨基酸混合物0.72-0.84g/l和葡萄糖1.7-2.3％，琼脂2-3％，用ddh2o定容至1l；所述尿嘧啶营养缺陷型液体培养基为：酵母氮源基础6.5-7g/l，灭菌结束后加入尿嘧啶缺陷型氨基酸混合物0.72-0.84g/l和葡萄糖1.7-2.3％，用ddh2o定容至1l；所述尿嘧啶营养缺陷型发酵培养基为：酵母氮源基础6.5-7g/l，灭菌结束后加入尿嘧啶缺陷型氨基酸混合物0.72-0.84g/l和葡萄糖1.7-2.3％，用ddh2o定容至1l；其中，上述百分数均为质量浓度百分数。9.一种如权利要求1至3任一项所述的酿酒酵母工程菌株细胞内的麦角甾醇含量测定
的方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)酿酒酵母工程菌株发酵结束后，收集全部菌体；(2)将收集到的菌体进行冷冻干燥；(3)干菌体回流皂化；(4)使用有机溶剂萃取多次，合并溶剂层；(5)蒸干有机溶剂层，复溶已提取物质；(6)使用高效液相色谱法测量283nm处的紫外吸收峰；(7)计算细胞内麦角甾醇含量。10.一种如权利要求1至3任一项所述的酿酒酵母工程菌株的生长曲线的测定方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)将产麦角甾醇的酿酒酵母工程菌株和对照菌株分别接种于尿嘧啶营养缺陷型液体培养基的试管中，28～30℃、180-220r/min的条件下培养12-16h；(2)分别取20μl、30μl、40μl菌液依次加入含有1ml尿嘧啶营养缺陷型液体培养基的ep管中，混匀，取300μl加入100孔板中，同时取300μl尿嘧啶营养缺陷型液体培养基做空白对照；将100孔板放置于全自动生长曲线测定仪中，28～30℃培养，每隔1h测定波长600nm处的吸光度值；(3)以培养时间x为横坐标，od
600
值y为纵坐标，绘制生长曲线。
技术总结
本发明公开一株高效产麦角甾醇的酿酒酵母工程菌株，所述酿酒酵母工程菌株是在酿酒酵母宿主中过表达SEQ ID NO.1所示的脂质转运蛋白基因SEC14基因构建得到的，脂质转运蛋白基因SEC14的核苷酸序列为SEQ ID NO.1，其所编码的的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。本发明所构建的酿酒酵母工程菌株所含麦角甾醇为酵母菌干重的0.95％-1.20％，比野生型酵母菌株提高了26％-31％。本发明提供的工程菌不但具有产量高的优点，并且可以通过相对简单的方法条件进行发酵，在工业上易于实现并控制，投资成本低，具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。
技术研发人员：王敏 屠琳娜 王雪薇 孔繁萌 杜娟 申雁冰 郑宇 宋佳 夏梦雷
受保护的技术使用者：天津科技大学
技术研发日：2022.04.19
技术公布日：2022/7/8