技术特征：
1.一种检测辣椒轻斑驳病毒（pmmov）和炭疽菌的rt-raa检测引物组，其特征在于，所述引物组包括辣椒轻斑驳病毒检测引物、炭疽菌检测引物、辣椒轻斑驳病毒检测探针pm-p3和炭疽菌检测探针ct-p1；其中，所述辣椒轻斑驳病毒检测引物包括正向引物pm-f2和反向引物pm-r2，正向引物pm-f2的序列为5
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ctgtgtacttcggcgttaggcaatcag-3
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，反向引物pm-r2的序列为5
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cattcatgaggttacttatactggccc
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；所述炭疽菌检测引物包括正向引物ct-f1和反向引物ct-r1，正向引物ct-f1的序列为: 5
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，反向引物ct-r1的序列为:5
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。2.如权利要求1所述的引物组，其特在于，所述辣椒轻斑驳病毒检测探针pm-p3，其序列为5
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gcacttctcggagcctttgatactagghacaggataatagaagtt-3
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；所述炭疽菌检测检测探针ct-p1，其序列为5
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cttcaagtccgatctccgcttccagtchtccgccatcggtgcccttc-3
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；所述pmmov的反向引物pm-r2的5
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端修饰有fitc，所述检测探针pm-p3的5
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端修饰有生物素，pm-p3的3
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端磷酸化修饰，h为四氢呋喃；所述炭疽菌反向引物ct-r1的5
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端修饰有地高辛，所述探针引物ct-p1的5
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端修饰有罗丹明，ct-p1的3
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端有磷酸化修饰，h为四氢呋喃。3.一种检测辣椒轻斑驳病毒（pmmov）和炭疽菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物组。4.如权利要求1或2所述的引物组在用于检测待测生物样本中pmmov和/或炭疽菌，或用于制备检测待测生物样本中是否含有pmmov和/或炭疽菌的试剂盒中的应用。5.如权利要求3所述的试剂盒在用于检测待测生物样本中是否含有pmmov和/或炭疽菌中的应用。6.一种利用试剂盒检测pmmov和/或炭疽菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）提取待测生物样本的总rna，或对植物样本进行裂解处理；2）以步骤1）提取的总rna或植物裂解液为模板，采用权利要求1或2所述的引物组中的正向引物和反向引物进行rt-raa扩增，获得扩增产物；3）检测扩增产物，基于扩增产物的检测结果判断是否含有pmmov和/或炭疽菌。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，若扩增产物中含有316bp的dna片段，则待测生物样本中含有pmmov，若扩增产物中不含有316bp的dna片段，则待测生物样本中不含有pmmov；若扩增产物中含有243bp的dna片段，则待测生物样本中含有炭疽菌，若扩增产物中不含有243bp的dna片段，则待测生物样本中不含有炭疽菌。8.一种检测待测生物样本中是否含有pmmov和/或炭疽菌的方法，其特征在于，包括：检测待测生物样本的裂解液或总rna扩增产物中是否含有特异dna片段，若含有特异dna片段，则待测生物样本含有pmmov和/或炭疽菌，若不含有特异dna片段，则待测生物样本不含有pmmov和/或炭疽菌；其中，所述特异dna片段为权利要求1或2所述的正向引物和反向引物的靶序列。9.一种基于rt-raa-侧流层析技术检测pmmov和/或炭疽菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）对样本进行裂解处理，或提取待测生物样本的总rna；
2）以步骤1）获得的样本裂解液或提取的总rna为模板，采用权利要求1或2所述的引物组进行rt-raa扩增；3）应用侧流层析试纸条进行扩增产物的检测，若试纸条只在质控区出现一条条带，检测区没有条带，则结果为阴性，表明样本中不含有pmmov和炭疽菌；若试纸条出现两条条带，一条位于质控区，一条位于检测线t1或检测线t2，则结果为阳性，表示样本中含有炭疽菌或pmmov；若试纸条出现三条条带，一条位于质控区，一条位于检测区t1，一条位于检测区t2，则结果为阳性，表明样本中含有pmmov和炭疽菌；若试纸条质控线不显色，则检测无效，需要更换试纸条重新检测。10.一种检测辣椒轻斑驳病毒（pmmov）和炭疽菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括包括权利要求1或2所述的引物组，侧流层析试纸条，所述侧流层析试纸条上检测线t1和检测线t2、质控区，所述侧流层析试纸条能够对引物组的扩增产物进行检测。
技术总结
本发明涉及植物病毒、病菌生物检测技术领域，具体涉及一种基于重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA)检测辣椒轻斑驳病毒和炭疽菌的引物组、试剂盒及方法。本发明中所设计的检测PMMoV的正向引物PM-F2的序列如SEQ ID No.1所示，反向引物PM-R2的序列如SEQ ID No.2所示，探针引物PM-P3的序列如SEQ ID No.3所示，所设计的检测炭疽菌的正向引物CT-F1的序列如SEQ ID No.4所示，反向引物CT-R1的序列如SEQ ID No.5所示，探针引物CT-P1的序列如SEQ ID No.6所示，本发明引物组可以有效扩增PMMoV的CP基因、炭疽菌组蛋白的H3基因，引物组具有较高的特异性和灵敏性，与其他病毒或细菌无交叉反应，可与侧向流免疫层析联合使用用于植物PMMoV和炭疽菌的现场快速检测，对于PMMoV和炭疽菌有效防治具有重要意义。疽菌有效防治具有重要意义。疽菌有效防治具有重要意义。
技术研发人员：宋雪梅 燕飞 曹宇浩 严丹侃 韩科雷
受保护的技术使用者：宁波大学
技术研发日：2022.05.30
技术公布日：2022/8/30