1.本发明涉及多糖提取技术领域，具体为一种炭角菌胞外多糖及低共熔溶液提取方法。
背景技术：
2.胞外多糖是一些特殊微生物在生长代谢过程中分泌到细胞壁外、易与菌物的生长有体分离、分泌到环境中的水溶性多糖，属于微生物的次级代谢产物，对微生具有重要意义。炭角菌是xylaria属的微生物，其发酵中可以分泌出大量的胞外多糖。
3.现有技术中，在提取炭角菌胞外多糖时，使用的低共熔溶剂的氢键供体，溶解性较差，沉淀蛋白质的速率较慢，并且价格昂贵，其次在提取过程中，操作复杂，对实验设备要求较高，因此需要发明出一种炭角菌胞外多糖及低共熔溶液提取方法来解决上述问题。
技术实现要素：
4.(一)解决的技术问题
5.针对现有技术的不足，本发明提供了一种炭角菌胞外多糖及低共熔溶液提取方法，使用具有更多羟基的尿素制备低共熔溶剂相比与其他低共熔溶剂的氢键供体，尿素对于蛋白质的溶解性更好，沉淀蛋白质的速率更快，价格更为低廉，同时，利用尿素制备的低共熔溶剂提取胞外多糖，操作更为简便，对实验设备要求较低。
6.(二)技术方案
7.为实现上述操作简便、价格低廉的效果，本发明提供如下技术方案：一种炭角菌胞外多糖，以炭角菌发酵液10～15份为原料进行低共熔溶液提取得到。
8.优选的，所述低共熔溶液包括以下原料，尿素7～10份、氯化胆碱5～7份、盐酸溶液5～10份、饱和食盐水10～15份、乙醇溶液20～30份、丙酮溶液20～30 份。
9.优选的，所述乙醇溶液20～30份中乙醇的体积含量要求在90％以上，所述盐酸溶液5～10份的ph值为4.5～5。
10.一种炭角菌胞外多糖低共熔溶液提取方法，包括以下步骤：
11.s1、在漏斗中放入滤纸，将炭角菌发酵液10～15份使用滤纸进行过滤分离出菌体，得到过滤液；
12.s2、称取尿素7～10份与氯化胆碱5～7份放入到蓝口瓶中，加入蒸馏水，进行加热搅拌，制备出低共熔溶剂；
13.s3、将步骤s1中的滤液与步骤s2中的低共熔溶液混合搅拌，静置6h后进行离心，得到上层清液；
14.s4、向步骤s3中的上层清液中加入盐酸溶液将ph值调节为6，再加入饱和食盐水10～15份混合搅拌，将混合液进行再次离心，取上层清液；
15.s5、向步骤s4中的上层清液放入烧杯中，并使用磁力搅拌机进行搅拌，在搅拌过程中加入乙醇溶液20～30份，使用酒精计测量酒精度，直至步骤s4 中的上层清液酒精度在80
以上，将溶液封口静置3h，取下层沉淀使用丙酮溶液20～30份进行漂洗，最后将漂洗的沉淀干燥得到炭角菌胞外多糖。
16.优选的，所述步骤s1中，使用三层滤纸的一侧对炭角菌发酵液10～15份进行过滤，且过滤之前需对炭角菌发酵液10～15份进行静置沉淀。
17.优选的，所述步骤s2中，加热温度为60℃，搅拌转速为1250rpm，且加热搅拌时间为30min。
18.优选的，所述步骤s4中，盐酸溶液5～10份需要少量多次的添加，且在添加过程中，需要不停搅拌。
19.优选的，所述步骤s5中，磁力搅拌机的搅拌速度为600转/min，乙醇溶液20～30份需要少量多次的进行添加，且每次添加完后需要使用酒精计进行测量酒精度。
20.(三)有益效果
21.与现有技术相比，本发明提供了一种炭角菌胞外多糖及低共熔溶液提取方法，具备以下有益效果：
22.1、该炭角菌胞外多糖及低共熔溶液提取方法，使用具有更多羟基的尿素制备低共熔溶剂相比与其他低共熔溶剂的氢键供体，尿素对于蛋白质的溶解性更好，沉淀蛋白质的速率更快，价格更为低廉。
23.2、该炭角菌胞外多糖及低共熔溶液提取方法，利用尿素制备的低共熔溶剂提取胞外多糖，操作更为简便，对实验设备要求较低。
具体实施方式
24.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
25.实施例1：
26.一种炭角菌胞外多糖，包括重量份数配比的原料：实验室制备的炭角菌发酵液10份、尿素7份、氯化胆碱5份、盐酸溶液5份、饱和食盐水10份、乙醇溶液20份、丙酮溶液20份。
27.乙醇溶液20～30份中乙醇的体积含量要求在90％以上，盐酸溶液5～10份的ph值为4.5～5。
28.一种炭角菌胞外多糖低共熔溶液提取方法，包括以下步骤：
29.s1、在漏斗中放入滤纸，使用三层滤纸的一侧对炭角菌发酵液10份进行过滤，分离出菌体，得到过滤液。
30.s2、称取尿素7份与氯化胆碱5份放入到蓝口瓶中，加入蒸馏水，进行加热搅拌，加热温度为60℃，搅拌转速为1250rpm，且加热搅拌时间为30min，制备出低共熔溶剂。
31.s3、将步骤s1中的滤液与步骤s2中的低共熔溶液混合搅拌，静置6h后进行离心，得到上层清液。
32.s4、向步骤s3中的上层清液中少量多次的加入盐酸溶液将ph值调节为6，再加入饱和食盐水10份混合搅拌，将混合液进行再次离心，取上层清液。
33.s5、向步骤s4中的上层清液放入烧杯中，并使用磁力搅拌机以600转/min 的速度
进行搅拌，在搅拌过程中加入乙醇溶液20份，使用酒精计测量酒精度，直至步骤s4中的上层清液酒精度在80以上，将溶液封口静置3h，取下层沉淀使用丙酮溶液20份进行漂洗，最后将漂洗的沉淀干燥得到炭角菌胞外多糖。
34.实施例2：
35.一种炭角菌胞外多糖，包括重量份数配比的原料：实验室制备的炭角菌发酵液11份、尿素7份、氯化胆碱5份、盐酸溶液7份、饱和食盐水11份、乙醇溶液22份、丙酮溶液22份。
36.乙醇溶液22份中乙醇的体积含量要求在90％以上，盐酸溶液7份的ph值为4.5～5。
37.一种炭角菌胞外多糖低共熔溶液提取方法，包括以下步骤：
38.s1、在漏斗中放入滤纸，使用三层滤纸的一侧对炭角菌发酵液11份进行过滤，分离出菌体，得到过滤液。
39.s2、称取尿素7份与氯化胆碱5份放入到蓝口瓶中，加入蒸馏水，进行加热搅拌，加热温度为60℃，搅拌转速为1250rpm，且加热搅拌时间为30min，制备出低共熔溶剂。
40.s3、将步骤s1中的滤液与步骤s2中的低共熔溶液混合搅拌，静置6h后进行离心，得到上层清液。
41.s4、向步骤s3中的上层清液中少量多次的加入盐酸溶液将ph值调节为6，再加入饱和食盐水11份混合搅拌，将混合液进行再次离心，取上层清液。
42.s5、向步骤s4中的上层清液放入烧杯中，并使用磁力搅拌机以600转/min 的速度进行搅拌，在搅拌过程中加入乙醇溶液22份，使用酒精计测量酒精度，直至步骤s4中的上层清液酒精度在80以上，将溶液封口静置3h，取下层沉淀使用丙酮溶液22份进行漂洗，最后将漂洗的沉淀干燥得到炭角菌胞外多糖。
43.实施例3：
44.一种炭角菌胞外多糖，包括重量份数配比的原料：实验室制备的炭角菌发酵液12份、尿素8份、氯化胆碱6份、盐酸溶液7份、饱和食盐水12份、乙醇溶液23份、丙酮溶液23份。
45.乙醇溶液23份中乙醇的体积含量要求在90％以上，盐酸溶液7份的ph值为4.5～5。
46.一种炭角菌胞外多糖低共熔溶液提取方法，包括以下步骤：
47.s1、在漏斗中放入滤纸，使用三层滤纸的一侧对炭角菌发酵液12份进行过滤，分离出菌体，得到过滤液。
48.s2、称取尿素8份与氯化胆碱6份放入到蓝口瓶中，加入蒸馏水，进行加热搅拌，加热温度为60℃，搅拌转速为1250rpm，且加热搅拌时间为30min，制备出低共熔溶剂。
49.s3、将步骤s1中的滤液与步骤s2中的低共熔溶液混合搅拌，静置6h后进行离心，得到上层清液。
50.s4、向步骤s3中的上层清液中少量多次的加入盐酸溶液将ph值调节为6，再加入饱和食盐水12份混合搅拌，将混合液进行再次离心，取上层清液。
51.s5、向步骤s4中的上层清液放入烧杯中，并使用磁力搅拌机以600转/min 的速度进行搅拌，在搅拌过程中加入乙醇溶液23份，使用酒精计测量酒精度，直至步骤s4中的上层清液酒精度在80以上，将溶液封口静置3h，取下层沉淀使用丙酮溶液23份进行漂洗，最后将漂洗的沉淀干燥得到炭角菌胞外多糖。
52.实施例4：
53.一种炭角菌胞外多糖，包括重量份数配比的原料：实验室制备的炭角菌发酵液13
份、尿素9份、氯化胆碱7份、盐酸溶液8份、饱和食盐水13份、乙醇溶液24份、丙酮溶液24份。
54.乙醇溶液24份中乙醇的体积含量要求在90％以上，盐酸溶液8份的ph值为4.5～5。
55.一种炭角菌胞外多糖低共熔溶液提取方法，包括以下步骤：
56.s1、在漏斗中放入滤纸，使用三层滤纸的一侧对炭角菌发酵液13份进行过滤，分离出菌体，得到过滤液。
57.s2、称取尿素9份与氯化胆碱7份放入到蓝口瓶中，加入蒸馏水，进行加热搅拌，加热温度为60℃，搅拌转速为1250rpm，且加热搅拌时间为30min，制备出低共熔溶剂。
58.s3、将步骤s1中的滤液与步骤s2中的低共熔溶液混合搅拌，静置6h后进行离心，得到上层清液。
59.s4、向步骤s3中的上层清液中少量多次的加入盐酸溶液将ph值调节为6，再加入饱和食盐水13份混合搅拌，将混合液进行再次离心，取上层清液。
60.s5、向步骤s4中的上层清液放入烧杯中，并使用磁力搅拌机以600转/min 的速度进行搅拌，在搅拌过程中加入乙醇溶液24份，使用酒精计测量酒精度，直至步骤s4中的上层清液酒精度在80以上，将溶液封口静置3h，取下层沉淀使用丙酮溶液24份进行漂洗，最后将漂洗的沉淀干燥得到炭角菌胞外多糖。
61.实施例5：
62.一种炭角菌胞外多糖，包括重量份数配比的原料：实验室制备的炭角菌发酵液15份、尿素10份、氯化胆碱7份、盐酸溶液10份、饱和食盐水15 份、乙醇溶液30份、丙酮溶液30份。
63.乙醇溶液30份中乙醇的体积含量要求在90％以上，盐酸溶液10份的ph 值为4.5～5。
64.一种炭角菌胞外多糖低共熔溶液提取方法，包括以下步骤：
65.s1、在漏斗中放入滤纸，使用三层滤纸的一侧对炭角菌发酵液15份进行过滤，分离出菌体，得到过滤液。
66.s2、称取尿素10份与氯化胆碱7份放入到蓝口瓶中，加入蒸馏水，进行加热搅拌，加热温度为60℃，搅拌转速为1250rpm，且加热搅拌时间为30min，制备出低共熔溶剂。
67.s3、将步骤s1中的滤液与步骤s2中的低共熔溶液混合搅拌，静置6h后进行离心，得到上层清液。
68.s4、向步骤s3中的上层清液中少量多次的加入盐酸溶液将ph值调节为6，再加入饱和食盐水15份混合搅拌，将混合液进行再次离心，取上层清液。
69.s5、向步骤s4中的上层清液放入烧杯中，并使用磁力搅拌机以600转/min 的速度进行搅拌，在搅拌过程中加入乙醇溶液30份，使用酒精计测量酒精度，直至步骤s4中的上层清液酒精度在80以上，将溶液封口静置3h，取下层沉淀使用丙酮溶液30份进行漂洗，最后将漂洗的沉淀干燥得到炭角菌胞外多糖。
70.通过对实施例1-5中所得到炭角菌胞外多糖的提取率进行检测，并根据公式：提取率＝(炭角菌胞外多糖重量/炭角菌发酵液中多糖含量)*100％，计算出提取率，其计算结果见下表：
71.实施例炭角菌胞外多糖的提取率实施例195.0％
实施例295.5％实施例396.0％实施例495.2％实施例594.0％
72.该炭角菌胞外多糖及低共熔溶液提取方法，使用具有更多羟基的尿素制备低共熔溶剂相比与其他低共熔溶剂的氢键供体，尿素对于蛋白质的溶解性更好，沉淀蛋白质的速率更快，价格更为低廉，同时，利用尿素制备的低共熔溶剂提取胞外多糖，操作更为简便，对实验设备要求较低。
73.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。