本文描述了用于有效生产抗体或其抗原结合片段的组合物和方法。抗体可能能够特异性地结合多于一个的靶分子或单个靶分子上的不同表位。组合物和方法改善了抗体组装和生产，与传统方法相比导致了更高的效率和产量。
背景技术：
1、igg类型的单克隆抗体含有两个相同的抗原结合臂和一个恒定结构域(fc)。在它们的结合臂中具有不同特异性的抗体通常不会在自然界中出现，因此必须借助化学工程(例如化学交联等)、重组dna和/或细胞融合技术来制作。
2、双特异性抗体可以同时结合两种不同的抗原。这一特性使得开发传统单克隆抗体无法实现的治疗策略成为可能。另一类多特异性分子是重组融合蛋白。由免疫调节蛋白的胞外结构域和免疫球蛋白(ig)的恒定区(fc)结构域组成的重组融合蛋白代表了一类日益增长的人治疗剂。
3、对于抗体，尤其是多特异性抗体来说，临床级材料的制造仍然具有挑战性。有很多种途径可以生产具有混合结合臂(即结合臂彼此不相同)的分子。但是这些方法的每一种都有明显的缺点。
4、化学交联是劳动密集型的，因为相关物质可能仍需要从同二聚体和其他不需要的副产物中纯化，从而需要另外的步骤来将不良产物与所需产物分离。此外，化学修饰步骤可改变蛋白质的完整性，从而导致稳定性差。因此，这种方法通常效率低下并可导致抗体活性丧失。
5、细胞融合技术(例如杂交瘤)表达两条重链和两条轻链，当两个各自表达单独抗体的细胞融合时，该两条重链和两条轻链随机组装，从而产生10种抗体组合。所需异多聚体抗体仅占由此产生的抗体的一小部分。所需异多聚体蛋白质的纯化显著降低生产产量并增加制造成本。
6、重组dna技术已被用于生成各种异多聚体形式，例如不包含fc结构域的单链fv、双抗体等。该类抗体分子的主要缺点是缺乏fc结构域，因此缺乏抗体触发效应功能和延长血清半衰期(例如补体活化、fc受体结合等)的能力。因此，需要包含功能性fc结构域的双特异性抗体。
7、重组dna技术也已用于生成“旋钮入孔”双特异性抗体。该策略的一个限制是两个亲本抗体的轻链必须相同，以防止在同一细胞中表达时发生错误配对和形成不需要的和/或无活性的分子。
8、此外，退火和纯化过程中的限制事件之一是氧化还原效率。如氧化后完整质量物质的bioanalyzer和ms-tof分析表明，还原后在此步骤后氧化的异二聚体通常仅占蛋白质的70-80％。剩余20-30％的抗体是二聚体的，并且缺乏共价键(sec-mals)。这可以被去除但会严重影响总产量。
9、因此，仍然需要提高抗体生产的总产量，尤其是异二聚体抗体，诸如双特异性抗体。本文描述了可以提高双特异性抗体、异二聚体等的总产量的方法。根据本文提供的本发明的描述，本发明的这些和其他方面和优点将显而易见。
技术实现思路
1、本公开提供了包含以下结构的抗体：a.第一重链多肽(h1)，其包含可变区(vh1)和恒定区(ch1)，所述恒定区(ch1)具有恒定区1结构域(ch1h1)、铰链区(h1h)、恒定区2结构域(ch1h2)和恒定区3结构域(ch1h3)；以及第一轻链多肽(l1)，其包含可变区(vl1)和恒定区(cl1)，b.第二重链多肽(h2)，其包含可变区(vh2)和恒定区(ch2)，所述恒定区(ch2)具有恒定区1结构域(ch2h1)、铰链区(h2h)、恒定区2结构域(ch2h2)和恒定区3结构域(ch2h3)；以及第二轻链多肽(l2)，其包含可变区(vl2)和恒定区(cl2)，其中i.所述vh1和vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸是带电荷的或极性的氨基酸残基，并且所述vl1和vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸与所述vh1和vh2的第39位氨基酸相比是带相反电荷的或极性的氨基酸残基；或者所述vh1和vh2的第100位(kabat编号)的氨基酸是带电荷的或极性的氨基酸残基，并且所述vl1和vl2的第44位(kabat编号)的氨基酸与所述vh1和vh2的第100位氨基酸相比是带相反电荷的或极性的氨基酸残基；ii.ch1h1和ch1h2的第147位(eu编号)的氨基酸是带电荷的或极性的氨基酸残基，并且cl1或cl2的第131、179或180位(eu编号)的氨基酸之一与ch1h1和ch1h2的第147位(eu编号)的氨基酸相比是带相反电荷的或极性的氨基酸残基；iii.ch1h1和ch1h2的第185位(eu编号)的氨基酸是带电荷的或极性的氨基酸残基，并且cl1和cl2的第137位(eu编号)的氨基酸与ch1h1和ch1h2的第185位(eu编号)的氨基酸相比是带相反电荷的或极性的氨基酸残基；或者ch1h1和ch1h2的第187位(eu编号)的氨基酸是带电荷的或极性的氨基酸残基，并且cl1和cl2的第137或138位(eu编号)的氨基酸之一与ch1h1和ch1h2的第187位(eu编号)的氨基酸相比是带相反电荷的或极性的氨基酸残基；并且iv.ch1h1和ch1h2的第145位(eu编号)的氨基酸是带电荷的或极性的氨基酸残基，并且cl1和cl2的第131位(eu编号)的氨基酸与ch1h1和ch1h2的第145位(eu编号)的氨基酸相比是带相反电荷的或极性的氨基酸残基。
2、在一些实施方案中，带电荷的氨基酸残基是天然存在的氨基酸或非天然存在的氨基酸。在一些实施方案中，天然存在的带电荷的氨基酸残基是精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸或天冬氨酸。
3、在一些实施方案中，第39、100、147、185、187或145位的h1氨基酸带正电荷，而第38、44、131、179、180、137或138位的l1氨基酸带负电荷；并且第39、100、147、185、187或145位的h2氨基酸带负电荷，而第38、44、131、179、180、137或138位的l2氨基酸带正电荷。在一些实施方案中，第39、100、147、185、187和145位的h1氨基酸带负电荷，而第38、44、131、179、180、137或138位的l1氨基酸带正电荷；并且第39、100、147、185、187或145位的h2氨基酸带正电荷，而第38、44、131、179、180、137或138位的l2氨基酸带负电荷。
4、在一些实施方案中，l1和l2是λ或κ轻链。在一些实施方案中，l1是λ轻链并且l2是κ轻链。在一些实施方案中，l1是κ轻链并且l2是λ轻链。
5、在一些实施方案中，抗体为igg1、igg2,或igg4同种型。在一些实施方案中，抗体可以为嵌合抗体、人抗体或人源化抗体。在一些实施方案中，抗体是双特异性抗体。
6、在一些实施方案中，双特异性抗体包含：i)与细胞表面抗原结合的第一抗原结合结构域，其中细胞表面抗原在t细胞、nk细胞、中性粒细胞、b细胞或树突细胞接合体上表达；以及ii)与疾病相关抗原(daa)结合的第二抗原结合结构域。在一些实施方案中，细胞表面抗原在t细胞上表达。
7、在一些实施方案中，在t细胞上表达的细胞表面抗原是cd3。在一些实施方案中，在t细胞上表达的细胞表面抗原是cd3ε。
8、在一些实施方案中，daa是ul16结合蛋白2(ulbp2)。在一些实施方案中，daa是ul16结合蛋白5(ulbp5)。在一些实施方案中，daa是ul16结合蛋白6(ulbp6)。
9、在一些实施方案中，多肽与h1和/或h2的n端或c端融合。在一些实施方案中，多肽与h1的n端融合。在一些实施方案中，多肽与h2的n端融合。在一些实施方案中，多肽与h1的c端融合。在一些实施方案中，多肽与h2的c端融合。在一些实施方案中，多肽是cd58、il-7或其片段。在一些实施方案中，多肽是cd58胞外结构域(cd58-ecd)。在一些实施方案中，多肽是cd58可变结构域(cd58v*)。
10、在一些实施方案中，多肽通过接头肽融合。在一些实施方案中，接头肽的长度为至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个氨基酸残基。在一些实施方案中，接头肽包含seq id no:52-54的氨基酸序列。
11、在一些实施方案中，抗体包括：i)vh1和/或vh2的第87位(kabat编号)的氨基酸为g；和ii)vl1和/或vl2的第45位(kabat编号)的氨基酸为w。
12、在一些实施方案中，抗体包括：i)ch1h3在第349位具有c、在第366位具有s、在第368位具有a且在第407位具有v(eu编号)；并且ch2h3在第354位具有c且在第366位具有w(eu编号)；ii)ch2h3在第349位具有c、在第366位具有s、在第368位具有a且在第407位具有v(eu编号)；并且ch1h3在第354位具有c且在第366位具有w(eu编号)；iii)ch1h3在第354位具有c、在第366位具有s、在第368位具有a且在第407位具有v(eu编号)；并且ch2h3在第349位具有c且在第366位具有w(eu编号)；或者iv)ch2h3在第354位具有c、在第366位具有s、在第368位具有a且在第407位具有v(eu编号)；并且ch1h3在第349位具有c且在第366位具有w(eu编号)。
13、在一些实施方案中，ch1h3和/或ch2h3在第447位(eu编号)的氨基酸缺失。
14、在一些实施方案中，i)h1h和/或h2h在第234和235位(eu编号)具有a；ii)h1h和/或h2h在第234、235和237位(eu编号)具有a；或iii)h1h和/或h2h在第234和235位具有a且在第329位(eu编号)具有g。
15、在一些实施方案中，抗体包括：i)ch1h3和/或ch2h3在第297位(eu编号)具有a；ii)ch1h3和/或ch2h3在第297位(eu编号)具有g；或iii)ch1h3和/或ch2h3在第297位(eu编号)具有s。在一些实施方案中，ch1h3和/或ch2h3在第331位(eu编号)具有s。
16、在一些实施方案中，抗体包括：i)ch1h2和/或ch2h2在第370位(kabat编号)具有c；和ii)ch1h2和/或ch2h2在第375位(kabat编号)具有c。
17、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为d；iii.ch1h1的第128位(eu编号)的氨基酸为c，且cl1的第118位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h1h中的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl1的第214位(eu编号)的氨基酸为s；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；并且ii.ch2h1的第147位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第180位(eu编号)的氨基酸为r。
18、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；并且ii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为d；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch2h1的第147位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第180位(eu编号)的氨基酸为r；iii.ch2h1的第134位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第116位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
19、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为d；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch2h1的第147位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第180位(eu编号)的氨基酸为r；iii.ch2h1的136位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第114位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
20、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch1h1的第147位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第131位(eu编号)的氨基酸为d；iii.ch1h1的第173位(eu编号)的氨基酸为c，且cl1的第162位(eu编号)的氨基酸为c；iv.h1h中的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl1的第214位(eu编号)的氨基酸为s；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；并且ii.ch2h1的第147位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第180位(eu编号)的氨基酸为r。
21、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为d；iii.ch1h1的第173位(eu编号)的氨基酸为c，且cl1的第162位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h1h中的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl1的第214位(eu编号)的氨基酸为s；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；并且ii.ch2h1的第147位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第180位(eu编号)的氨基酸为r。
22、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为d；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch2h1的第147位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第180位(eu编号)的氨基酸为r；iii.ch2h1的第131位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第114位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
23、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为d；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch2h1的第187位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第138位(eu编号)的氨基酸为k；iii.ch2h1的第170位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第162位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
24、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为k，cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为k；并且iii.cl1的第179位(eu编号)的氨基酸为e；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch2h1的第187位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第138位(eu编号)的氨基酸为k；iii.ch2h1的第171位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第162位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
25、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为d；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch2h1的第187位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第138位(eu编号)的氨基酸为k；iii.ch2h1的第171位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第162位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
26、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为e，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为k；并且iii.cl1的第179位(eu编号)的氨基酸为e；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch2h1的第147位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第180位(eu编号)的氨基酸为r；iii.ch2h1的第171位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第162位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
27、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为d；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch2h1的第147位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第180位(eu编号)的氨基酸为r；iii.ch2h1的第171位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第162位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
28、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ch1h1的第147位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第131位(eu编号)的氨基酸为d；且ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为k，cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为k；并且b)h2和l2包括以下：vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ch2h1的第147位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第180位(eu编号)的氨基酸为r；ch2h1的第171位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第162位(eu编号)的氨基酸为c；并且h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
29、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；并且ii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为e，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为k；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch2h1的第187位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第138位(eu编号)的氨基酸为k；iii.ch2h1的第136位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第114位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
30、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；并且ii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为e，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为k；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch2h1的第187位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第138位(eu编号)的氨基酸为k；iii.ch2h1的第171位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第162位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
31、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；并且ii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为d；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch2h1的第187位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第138位(eu编号)的氨基酸为k；iii.ch2h1的第171位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第162位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
32、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch1h1的第147位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第131位(eu编号)的氨基酸为d；iii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为e，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为k；并且iv.ch1h1的第145位(eu编号)的氨基酸为s，且cl1的第180位(eu编号)的氨基酸为e；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch2h1的第187位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第138位(eu编号)的氨基酸为k；iii.vh2的第170位(eu编号)的氨基酸为c，且vl2的第162位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
33、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch1h1的第147位(eu编号)的氨基酸为d，且cl1的第131位(eu编号)的氨基酸为k；并且iii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为e，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为d；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch2h1的第187位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第137位(eu编号)的氨基酸为k；iii.cl2的第138位(eu编号)的氨基酸为r；iv.ch2h1的第170位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第162位(eu编号)的氨基酸为c；并且v.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
34、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch1h1的第147位(eu编号)的氨基酸为d，且cl1的第131位(eu编号)的氨基酸为k；并且iii.ch1h1的第145位(eu编号)的氨基酸为s；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch2h1的第187位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第138位(eu编号)的氨基酸为k；iii.ch2h1的第170位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第162位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
35、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch1h1的第147位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第131位(eu编号)的氨基酸为d；并且iii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为e，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为k；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为d，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch2h1的第147位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第180位(eu编号)的氨基酸为r；iii.ch2h1的第136位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第114位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
36、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为e；ii.ch1h1的第147位(eu编号)的氨基酸为k，且cl1的第131位(eu编号)的氨基酸为d；并且iii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为e，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为k；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch2h1的第187位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第138位(eu编号)的氨基酸为k；iii.ch2h1的第136位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第114位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
37、在一些实施方案中，a)h1和l1包括以下：i.vh1的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl1的第38位(kabat编号)的氨基酸为d；ii.ch1h1的第147位(eu编号)的氨基酸为d，且cl1的第131位(eu编号)的氨基酸为k；并且iii.ch1h1的第185位(eu编号)的氨基酸为d，且cl1的第137位(eu编号)的氨基酸为k；并且b)h2和l2包括以下：i.vh2的第39位(kabat编号)的氨基酸为k，且vl2的第38位(kabat编号)的氨基酸为k；ii.ch2h1的第187位(eu编号)的氨基酸为d，且cl2的第138位(eu编号)的氨基酸为k；iii.ch2h1的第171位(eu编号)的氨基酸为c，且cl2的第162位(eu编号)的氨基酸为c；并且iv.h2h的第220位(eu编号)的氨基酸为s，且cl2的第214位(eu编号)的氨基酸为s。
38、在一些实施方案中，i)vh1和/或vh2的第87位(kabat编号)的氨基酸为g；和ii)vl1和/或vl2的第45位(kabat编号)的氨基酸为w。
39、在一些实施方案中，i)ch1h3在第349位具有c、在第366位具有s、在第368位具有a且在第407位具有v(eu编号)；并且ch2h3在第354位具有c且在第366位具有w(eu编号)；ii)ch2h3在第349位具有c、在第366位具有s、在第368位具有a且在第407位具有v(eu编号)；并且ch1h3在第354位具有c且在第366位具有w(eu编号)；iii)ch1h3在第354位具有c、在第366位具有s、在第368位具有a且在第407位具有v(eu编号)；并且ch2h3在第349位具有c且在第366位具有w(eu编号)；或者iv)ch2h3在第354位具有c、在第366位具有s、在第368位具有a且在第407位具有v(eu编号)；并且ch1h3在第349位具有c且在第366位具有w(eu编号)。在一些实施方案中，ch1h3和/或ch2h3在第447位(eu编号)的氨基酸缺失。
40、在一些实施方案中，i)h1h和/或h2h在第234和235位(eu编号)具有a；ii)h1h和/或h2h在第234、235和237位(eu编号)具有a；或iii)h1h和/或h2h在第234和235位具有a且在第329位(eu编号)具有g。
41、在一些实施方案中，i)ch1h3和/或ch2h3在第297位(eu编号)具有a；ii)ch1h3和/或ch2h3在第297位(eu编号)具有g；或iii)ch1h3和/或ch2h3在第297位(eu编号)具有s。在一些实施方案中，ch1h3和/或ch2h3在第331位(eu编号)具有s。
42、在一些实施方案中，抗体包括：i)ch1h2和/或ch2h2在第370位(kabat编号)具有c；和ii)ch1h2和/或ch2h2在第375位(kabat编号)具有c。
43、在一些实施方案中，a)vh1包含seq id no:13的氨基酸序列；并且b)vl1包含seqid no:22的氨基酸序列。
44、在一些实施方案中，a)vh1包含evqllesggglvqpggs lklscaasgftfnx1yamx2wvrx3apgkglewvax4irskynnyat yyadsvkdrftisrddskntaylqmnnlktedtavyycvrhgx5fgnx6x7yvswfaywgqgtlvtvss(seq id no:440)的氨基酸序列，其中seq id no:440的x1为d或t，其中seq id no:440的x2为d或n，其中seq id no:440的x3为d或k，其中seq id no:440的x4为k或r，其中seq id no:440的x5为n或t，其中seq id no:440的x6为d或n，并且其中seqid no:440的x7为d或s；并且b)vl1包含elvvtqepsltvspggtvtltcrsstgavttsnyanwvqx1kpgqap rgligx2tnkrapgtparfsgsllggkaaltlsgvqpedeaeyycal wx3sx4lwvfgggtkltvl(seqid no:441)的氨基酸序列，其中seq id no:441的x1为e或d的氨基酸序列，其中seq id no:441的x2为d或g，其中seq id no:441的x3为d或y，并且其中seq id no:441的x4为d、n或q。
45、在一些实施方案中，a)vh2包括：包含氨基酸序列seq id no:428的互补决定区1(vh2cdr1)；包含氨基酸序列seq id no:430的互补决定区2(vh2cdr2)；及包含氨基酸序列seqid no:432的互补决定区3(vh2cdr3)；以及b)vl2包含：包含氨基酸序列seq id no:433的互补决定区1(vl2cdr1)；包含氨基酸序列seq id no:434的互补决定区2(vl2cdr2)；及包含氨基酸序列seq id no:435的互补决定区3(vl2cdr3)。
46、在一些实施方案中，a)vh2包括：包含氨基酸序列seq id no:5的互补决定区1(vh2cdr1)；包含氨基酸序列seq id no:7的互补决定区2(vh2cdr2)；及包含氨基酸序列seq idno:9的互补决定区3(vh2cdr3)；以及b)vl2包含：包含氨基酸序列seq id no:10的互补决定区1(vl2cdr1)；包含氨基酸序列seq id no:11的互补决定区2(vl2cdr2)；及包含氨基酸序列seq id no:12的互补决定区3(vl2cdr3)。
47、在一些实施方案中，cd58包含seq id no:49-50的氨基酸序列。在一些实施方案中，il-7包含seq id no:51的氨基酸序列。
48、本公开提供了包含编码本文公开的任一种抗体的核酸序列的多核苷酸。本公开还提供了包含本公开的多核苷酸的载体。
49、本公开还提供了一种药物组合物，其包含本发明的任何一种抗体、多核苷酸或载体以及药学上可接受的载剂。在一些实施方案中，药物组合物被包装在脂质体或脂质纳米颗粒中。
50、本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括施用治疗有效量的本公开的任何一种药物组合物。本公开还提供了有需要的受试者的t细胞重新靶向的方法，其包括施用治疗有效量的本公开的任何一种药物组合物。本公开还提供了有需要的受试者的活化t细胞的方法，其包括施用治疗有效量的本公开的任何一种药物组合物。
51、在一些实施方案中，受试者具有癌症。在一些实施方案中，癌症是ulbp2阳性癌症。在一些实施方案中，癌症是原发性肿瘤、转移性癌症、多重耐药性癌症、进行性肿瘤或复发性癌症。在一些实施方案中，癌症为实体瘤。在一些实施方案中，癌症是尿路上皮癌、肺癌、脑癌、头颈癌、乳腺癌、皮肤癌、黑素瘤、肝癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、子宫癌、宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、皮肤癌或食道癌。
52、在一些实施方案中，方法还包括施用治疗有效量的配体或细胞因子或与所述配体和细胞因子的受体结合的不可知抗体。在一些实施方案中，配体是cd48、cd58、cd86、tnfsf9、ox40l、4-1bbl、gitl、cd70、cd80、mr1、tnfsf4、icosl、icoslg、mica、micb、ulbp1、ulbp2、ulbp3、raet1g和raet1l。在一些实施方案中，细胞因子是il-2、il-7、il-10、il-12、il-15、il-18或il-21。