一种用硫酸铈铵提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药技术领域，尤其是涉及一种用硫酸铈铵提高三角褐指藻岩藻 黄素含量的方法。
【背景技术】
[0002] 岩藻黄素（Fucoxanthin)是一类橘黄色的类胡萝卜素，其主要存在于可食用的褐 藻中。它的化学结构为特殊的多烯链（共轭双键，环氧基团和具有抗氧化性的共轭羰基）。 正是由于其具有这种结构，因此岩藻黄素也被认为是一类叶黄素。岩藻黄素在人类疾病的 治疗中具有极其重要的作用，在抗肥胖，抗癌症等疾病中，对其作用机理的研宄也有了一定 基础。
[0003] 三角褐指藻（phaeodactylumtricornutum)由于其能够合成较高含量的油脂，所 以一直受到关注和研宄。研宄发现，三角褐指藻中存在岩藻黄素。SangMinKimetal等 人通过质谱和核磁共振的方法证明了在三角褐指藻中的确存在岩藻黄素并通过反式高效 液相将其定量。诱导子能够对目的次生代谢产物的调控和生物合成有重要的作用，在一定 程度上能够有效提高培养物的代谢产物含量。硫酸铈铵就属于诱导子的范畴。目前，利用 各种诱导子来提高岩藻黄素含量的相关文献还未报道。本文通过利用不同浓度的硫酸铈铵 处理三角褐指藻，来研宄三角褐指藻的生长状况，分离和提取三角褐指藻中的岩藻黄素并 且利用HPLC对不同浓度的硫酸铈铵处理三角褐指藻后岩藻黄素含量的测定。进而得出最 适硫酸铈铵的浓度。为提高岩藻黄素含量提供有力的实验依据和手段。
【发明内容】
[0004] 本发明目的在于提供一种三角褐指藻岩藻黄素的提取方法，该方法对提高三角褐 指藻中的岩藻黄素含量效果显著，操作简单方便，费用低，生产周期短，适于批量处理和工 厂化生产。
[0005] 本发明具体通过以下技术方案实现：
[0006] -种用硫酸铈铵提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法，具体包括以下步骤：
[0007] 1)取灭菌海水与MAD母液混合获得营养液；
[0008] 2)在营养液中加入三角褐指藻母液培养；
[0009] 3)培养2天后，加入硫酸铈铵；
[0010] 4)继续培养6天后手机藻液，离心分离，弃上清，收集藻体；
[0011] 5)将藻体冷冻干燥处理2天，研磨备用。
[0012] 本发明所述的所述的MAD母液的配方每100ml为：KN03:10g，KH2P0 4:lg， FeS04 ? 7H20 :0? 25g，MnS04:0 . 0 2 5g，EDTANa2:lg，VB1:0. 0006g，去离子水：100ml。
[0013] 本发明所述的培养条件为：5000千勒克斯，25 °C。
[0014] 所述的灭菌海水与MAD母液的体积比为1 : 1000。
[0015] 所述的营养液与三角褐指藻母液的体积比为1 : 10。
[0016] 步骤（3)中培养液加入硫酸铈铵后硫酸铈铵的浓度为Omg/L?0. 2mg/L。
[0017] 步骤（5)所述的干燥处理条件为：温度_70°C，压强999Pa。
[0018] 本发明的优点在于：发明首次公开了从三角褐指藻中提取岩藻黄素，为提高岩藻 黄素含量还利用不同浓度的硫酸铈铵处理三角褐指藻，寻找最适合的硫酸铈铵处理浓度， 通过该浓度对三角褐指藻的诱导处理，其岩藻黄素的含量增加显著。该发明操作简单方便， 费用低，生产周期短，适于批量处理和工厂化生产。由于岩藻黄素对抗癌，高血糖，心血管疾 病，糖尿病都有显著地功效，提高岩藻黄素的含量将满足人们治病的需要，并且能够提高经 济效益。
【附图说明】
[0019] 图1是本发明实施例不同浓度硫酸铈铵处理三角褐指藻后生长曲线；
[0020] 图2是本发明实施例三角褐指藻生长曲线；
[0021] 图3是本发明实施例不同浓度硫酸铈铵处理三角褐指藻后岩藻黄素含量变化。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施 例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示 的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明 的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
[0023] 一、实验方法
[0024] 1、三角褐指藻的培养
[0025] 三角褐指藻原液由宁波大学海洋学院生物工程重点实验室谢致浩老师提供。取过 滤且高温灭菌的海水，加入1 : 1000的灭菌MAD母液。MAD母液的配方每100ml为：KN03: 10g，KH2P04:lg，FeS04 ? 7H20 :0? 25g，MnS04:0 . 0 2 5g，EDTANa2:lg，VB1:0. 0006g，去离子水： 100ml。以1 : 10的比例接入藻液，放置于5000Klx，温度为25°C，12h/12h黑暗/光照的培 养箱中。每天分三个时间段（8:00,12:00, 20:00)均匀摇藻体。
[0026]2、三角褐指藻生长曲线的测定
[0027] 分别取300ml的灭菌MAD培养液3组。向每组平行中倒入30ml的藻液，放入光照 培养箱中进行培养。每天摇藻三次进行培养，并且利用分光光度机测定藻体的0D值（每次 测藻体0D值前应该将藻液摇匀）。
[0028] 通过等体积稀释的方法和血球计数法对藻体个数与0D680进行测定。取1ml的藻 液，分别进行稀释，一直稀释到10000倍，并对每一组稀释液测定0D680的值。
[0029] 3、利用硫酸铈铵处理三角褐指藻
[0030] 向灭菌海水中加入MAD营养液，以1:10的比例加入三角褐指藻原液，将三角藻 液放于光照培养箱中培养（培养条件与上文相同）2天，让三角褐指藻适应新的营养环境。 往每组实验组中加入不同浓度的硫酸铈铵。从三角褐指藻接入培养基的那天开始，每天需 要利用分光光度机来测定每组藻液的0D值，再连续测定6天。
[0031] 本实验所用的岩藻黄素标准品取自宁波大学海洋学院生物工程重点实验室张金 荣老师（该标准品为自己制备，纯度为80% )。
[0032] 标准品的标准曲线的测定：称取0.lmg的岩藻黄素标准品于400y1的无水乙醇 中，利用移液枪上下重悬溶液，使得岩藻黄素充分溶解于色谱甲醇中