一种鸭病毒性肝炎的灭活疫苗及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种鸭病毒性肝炎的灭活疫苗及其 制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 鸭病毒性肝炎简称鸭肝炎，是由鸭病毒性肝炎病毒引起的一种以肝脏呈现出血性 炎症为特征的急性烈性传染病。病鸭和带毒鸭是主要传染源，主要通过消化道和呼吸道感 染。饲养管理不良，缺乏维生素和矿物质，鸭舍潮湿、拥挤，均可促使鸭病毒性肝炎发生。鸭 病毒性肝炎一旦发生，在鸭群中传播很快，发病率可达1〇〇%。鸭病毒性肝炎主要感染20 日龄以内的雏鸭，潜伏期为1-4天，突然发病，病程短促。病初精神萎靡，不食，行动呆滞，缩 颈，翅下垂，眼半闭呈昏迷状态，有的出现腹泻。不久，病鸭出现神经症状，不安，运动失调， 身体倒向一侧，两脚发生痉挛，数小时后死亡。死前头向后弯，呈角弓反张姿势。剖析可见 特征性病变在肝脏。肝肿大，呈黄红色或花斑状，表面有出血点和出血斑，胆囊肿大，充满胆 汁。脾脏有时肿大，外观也类似肝脏的花斑。多数肾脏充血、肿胀。心肌如煮熟状。有些病 例有心包炎、气囊中有微黄色渗出液和纤维素絮片。
[0003] 目前，在我国同时流行由1型鸭肝炎病毒和3型鸭肝炎病毒引起的雏鸭病毒性肝 炎。现有的鸭病毒性肝炎疫苗为1型鸭病毒性肝炎弱毒活疫苗，主要通过如下方法制备：将 鸭肝炎病毒弱毒株接种鸡胚，收集胚液，加入保护剂后冻干。使用时，用生理盐水稀释，采用 肌肉注射成鸭或雏鸭。弱毒活疫苗存在如下问题：（1)保存和运输需-20°C低温条件，不方 便；（2)免疫鸭后，疫苗病毒在体内存活时间长、易排毒，且病毒对环境抵抗力强、易毒力返 强；（3)疫苗的免疫效果不稳定，易受母源抗体干扰，造成免疫失败。
【发明内容】
[0004] 本发明的一个目的是提供一种鸭甲型肝炎病毒1型DHAV-SH株，其保藏编号为 CGMCCNo. 10098。
[0005] 上述的鸭甲型肝炎病毒1型DHAV-SH株在制备鸭病毒性肝炎二价疫苗中的应用也 属于本发明的保护范围。
[0006] 本发明的另一个目的是提供一种鸭肝炎病毒的组合物。
[0007] 本发明提供的鸭肝炎病毒的组合物的活性成分由鸭甲型肝炎病毒1型病毒和鸭 甲型肝炎病毒3型病毒组成。
[0008] 上述组合物中，所述鸭甲型肝炎病毒1型病毒和所述鸭甲型肝炎病毒3型病毒的 病毒量比为1:1。
[0009] 上述组合物中，所述鸭甲型肝炎病毒1型病毒具体为鸭甲型肝炎病毒1型病毒液； 所述鸭甲型肝炎病毒3型病毒具体为鸭甲型肝炎病毒3型病毒液。
[0010] 上述组合物中，所述鸭甲型肝炎病毒1型病毒液的病毒量具体为 106 25ELD5(l/100ml;所述鸭甲型肝炎病毒3型病毒液的病毒量具体为106 25ELD5(l/100ml;所述 鸭甲型肝炎病毒1型病毒液和鸭甲型肝炎病毒3型病毒液的体积比具体为1:1。
[0011] 上述组合物中，所述鸭甲型肝炎病毒1型病毒液进一步具体为灭活的鸭甲型肝炎 病毒1型病毒液；所述鸭甲型肝炎病毒3型病毒液进一步具体为灭活的鸭甲型肝炎病毒3型病毒液。
[0012] 上述组合物中，所述鸭甲型肝炎病毒1型的病毒株进一步具体为鸭甲型肝炎病毒 1型DHAV-SH株CGMCCNo. 10098;所述鸭甲型肝炎病毒3型的病毒株进一步具体为鸭甲型 肝炎病毒 3 型DHAV-FS株CGMCCNo. 4457。
[0013] 上述组合物中，所述灭活的鸭甲型肝炎病毒1型DHAV-SH株病毒液的制备方法如 下：在鸭甲型肝炎病毒1型DHAV-SH株病毒液中加入甲醛溶液，孵育后得到所述灭活的鸭甲 型肝炎病毒1型DHAV-SH株病毒液；
[0014] 所述灭活的鸭甲型肝炎病毒3型DHAV-FS株病毒液的制备方法如下：在鸭甲型肝 炎病毒3型DHAV-FS株病毒液中加入甲醛溶液，孵育后得到所述灭活的鸭甲型肝炎病毒3 型DHAV-FS株。
[0015] 上述组合物中，所述灭活的鸭甲型肝炎病毒1型DHAV-SH株病毒液的制备方法中， 所述孵育温度为37°C ;所述孵育时间为24小时；
[0016] 所述灭活的鸭甲型肝炎病毒3型DHAV-FS株病毒液的制备方法中，所述孵育温度 为37°C ;所述孵育时间为24小时。
[0017] 上述的组合物在制备鸭病毒性肝炎二价疫苗中的应用也属于本发明的保护范围。
[0018] 本发明还有一个目的是提供一种鸭病毒性肝炎二价疫苗。
[0019] 本发明提供的鸭病毒性肝炎二价疫苗其活性成分为上述的组合物。
[0020] 上述疫苗中，包括抗原和油佐剂；
[0021] 上述疫苗中，所述抗原为将上述的组合物与吐温-80混合得到的混合物。
[0022] 上述疫苗中，所述组合物中的所述鸭甲型肝炎病毒1型病毒、所述组合物中的所 述鸭甲型肝炎病毒3型病毒和所述油佐剂的配比为9. 6X105_25ELD5Q: 9. 6X105_ 25ELD5Q: 4ml。
[0023] 上述疫苗中，所述油佐剂为将MontanideISA206、硬脂酸铝和司本-80混合得 到。
[0024] 上述疫苗中，所述MontanideISA206、硬脂酸错和司本-80的配比具体为 94ml:2g:6ml〇
[0025] 上述疫苗中，所述抗原与所述油佐剂的体积比具体为1:1. 5。
[0026] 本发明还有一个目的是提供一种制备鸭病毒性肝炎二价疫苗的方法。
[0027] 本发明提供的制备鸭病毒性肝炎二价疫苗的方法包括如下步骤：
[0028]1)分别制备抗原和油佐剂；
[0029] 所述抗原的制备方法包括如下步骤：将上述的组合物和吐温-80混合，得到所述 抗原；
[0030] 所述组合物中的所述鸭甲型肝炎病毒1型病毒、所述组合物中的所述鸭甲型肝炎 病毒3型病毒和所述吐温-80的配比具体为9. 6X105_ 25ELD5Q: 9. 6X105_25ELD5Q: 4ml;
[0031] 所述油佐剂的制备方法包括如下步骤：将MontanideISA206、硬脂酸铝和司 本-80混合，得到所述油佐剂；
[0032] 所述MontanideISA206、硬脂酸错和司本-80的配比具体为94ml: 2g:6ml;
[0033] 2)将所述抗原和所述油佐剂混勾，乳化，得到所述鸭病毒性肝炎二价疫苗；
[0034] 所述抗原和所述油佐剂体积比具体为1:1. 5。
[0035] 本发明的最后一个目的是提供一种油佐剂。
[0036] 本发明提供的油佐剂是由MontanideISA206、硬脂酸铝和司本-80组成。
[0037] 上述油佐剂，所述MontanideISA206、硬脂酸错和司本-80的配比具体为 94ml:2g:6ml〇
[0038] 上述的油佐剂在制备鸭病毒性肝炎疫苗中的应用也属于本发明的保护范围。
[0039]上述的DHAV-SH株CGMCCNo.10988和 / 或DHAV-FS株CGMCCNo.4457在制备鸭 病毒性肝炎疫苗中的应用也属于本发明的保护范围。
[0040] 上述的DHAV-SH株的分类命名为鸭甲型肝炎病毒1型，该菌株已于2014年12 月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京 市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研宄所，邮编10010