与CH4和CεmX结构域之间的连接处结合的抗mIgE抗体的制作方法
【专利说明】与CH4和CemX结构域之间的连接处结合的抗mlgE抗体
[0001] 相关申请
[0002] 本PCT申请要求在2012年4月20日申请的美国临时申请号61/636,618的优先 权，其全部内容通过引用纳入本文。
[0003] 本发明的【背景技术】
[0004] 免疫球蛋白E(IgE)在介导造成过敏性疾病的I型超敏反应中起着主导作用，而 过敏性疾病包括过敏性哮喘，过敏性鼻炎，特应性皮炎，花生过敏，乳胶过敏及其他过敏性 疾病。过敏性反应是免疫系统对无害的环境物质例如灰尘，螨虫，树和草花粉，某些食物和 药物，和蜜蜂和火蚁叮咬的反应。在这样的反应中，过敏原与嗜碱性粒细胞和肥大细胞表面 的IgE结合引起IgE的交联和IgE. Fc的潜在受体，I型IgE. Fc受体或Fc e RI的聚集。该 受体聚集随后激活信号传导途径，导致颗粒的胞吐作用和药理介质如组胺，白三烯，胰蛋白 酶，细胞因子和趋化因子的释放。肥大细胞和嗜碱性粒细胞的介质的释放引起过敏的各种 病理学表现。
[0005] 抗IgE抗体，例如，奥马佐单抗和TNX-901结合血液和间质液中游离的IgE和B细 胞上的mlgE但不结合与嗜碱性粒细胞和肥大细胞上Fc e RI结合的IgE，这类抗IgE抗体 已被开发用于治疗IgE介导的过敏性疾病。这些抗体在Fc的CH3结构域内的位点与IgE 以高亲和性结合，该位点与Fc e RI的结合位点重叠。因此，这些抗体的预期疗效是基于抗 体与游离的IgE和B淋巴母细胞和记忆B细胞上的mlgE结合，这导致血液和间质液中游离 IgE的总水平降低。
[0006] 奥马佐单抗（商品名Xolair)的临床开发已显示了在各种过敏适应症中减轻I型 超敏反应的附加多种药理作用。抗IgE与游离IgE的结合进一步阻止了 IgE与嗜碱性粒 细胞和肥大细胞表面上Fc e RI的结合。由于没有被IgE结合的Fc e RI是不稳定而接着 被内在化和降解，用抗IgE结合来消耗游离IgE还逐渐下调嗜碱性粒细胞和肥大细胞上的 Fc e RI。已发现抗体治疗的其它效果的证据，包括细胞因子活性的中和，总体炎症反应的减 轻和通过IgE-抗IgE免疫复合物的聚积可能清除过敏原。
[0007] C e mX是位于人膜结合e链（m e )的CH4结构域和C末端膜锚定区段之间的52 个氨基酸区段。在大多数研究的人类对象中，无(^!1^的111 ￡ (me S)已经显示占极小的比 重，而有C e mX的m e链（m e L)显著表达。游离的、分泌的IgE的e链和mlgE的m e S和 m e L的mRNA都来自于e RNA转录产物的选择性剪切。C e mX的氨基酸和核苷酸序列在整 个蛋白质和DNA数据库中是独特的。因此，C e mX为靶向mlgE和表达mlgE的B细胞提供 了一个独特的抗原位点。为靶向表达mlgE的B淋巴细胞，与存在于人mlgE上的C e mX (也 被称作Ml'区）结合的抗IgE抗体也已得到开发，例如，a20. Chen等人，J. Immunol. 2010 ; 184 ;1748-1756,美国专利号 8, 071，097 和国际公布号 W02010/097012。
[0008] 鉴定涉及C e mX结构域的新抗原表位和开发与这样的抗原表位结合的新治疗抗 体是具有极大兴趣的。
[0009] 发明概述
[0010] 本发明涉及抗体的开发和鉴定，该抗体对人B淋巴细胞上的人mlgE的长同种型 CH4结构域和CemX结构域之间的连接区（junction region)具有特异性。me链的长同 种型在CH4结构域和膜锚定区段之间包含一 52个氨基酸的C e mX结构域，该长同种型在表 达mlgE的人B淋巴细胞上比不含CemX结构域的短或常规me链同种型更为丰富。本发 明还涉及这类抗体在治疗IgE介导的过敏性疾病和其它疾病中的应用。
[0011] 因此，本发明的一方面描述了与膜结合的IgE(mlgE)的表位结合的分离的 抗IgE抗体。该表位由第一部分和第二部分组成，第一部分位于mlgE的CH4结构域， 例如，TVQRAVSVNP (SEQ ID N0:12)或其片段，第二部分位于mlgE的C e mX结构域，例 如，GLAGGSAQSQ(SEQ ID N0:13)或其片段。在某些实施例中，本文所述的抗IgE抗体与 SVNPGLAGGSAQS(序列表：第 11)结合。
[0012] 在某些实施例中，抗IgE抗体包含含有GYTFTNYNVH(SEQ ID N0:8)所示VH互补 性决定区（CDR)1，GMYPGNDDILYNQNFKD(SEQ ID NO:9)所示 VH CDR2 和 SGLQGPWFDY(SEQ ID N0:10)所示VH OTR3的重链可变区（VH)。备选地或另外地，抗IgE抗体包含含 有 RASDHINNWLA(SEQ ID N0:5)所示 VL CDR1，SATSLET(SEQ ID N0:6)所示 VL CDR2 和 QQCWITPFT(SEQ ID N0:7)所示 ' CDR3 的轻链可变区（V)。
[0013] 备选地或另外地，抗IgE抗体包含与SEQ ID NO:3至少85 %相同（例 如?，90% ,95% ,97% ,98%，或99% )的重链可变区，和/或与SEQ ID N0:4至少85%相 同（例如?，90%，95%，97%，98%，或99% )的轻链可变区。抗IgE抗体可包含如SEQ ID N0:3所述的重链可变区和如SEQ ID N0:4所述的轻链可变区。或者，抗体结合与包含如 SEQ ID N0:3所述的重链可变区和如SEQ ID N0:4所述的轻链可变区的抗体相同的表位，例 如，单克隆抗体2H9。
[0014] 在有些实施例中，抗IgE抗体包含含有GFSLIDYGVN(SEQ ID N0:19)所示VhCDR1， MIWGDGSTDYNSTL(SEQ ID N0:20)所示 VH CDR2 和 NWFAY(SEQ ID N0:21)所示 VH CDR3 的重 链可变区。备选地或另外地，这样的抗IgE抗体包含含有SSSVNYMH(SEQ ID NO: 22)所示' CDR1，DTSKLAS(SEQ ID N0:23)所示 ' CDR2 和 QQWSSNPW(SEQ ID N0:24)所示 ' CDR3 的 轻链可变区。
[0015] 备选地或另外地，抗IgE抗体包含与SEQ ID NO: 17至少85 %相同（例 如.，90% ,95% ,97% ,98%，或99% )的重链可变区，和/或与SEQ ID N0:18至少85% 相同（例如?，90%，95%，97%，98%，或99% )相同的轻链可变区。抗IgE抗体可包含 如SEQ ID N0:17所述的重链可变区和如SEQ ID N0:18所述的轻链可变区。或者，抗体结 合与包含如SEQ ID N0:17所述的重链可变区和如SEQ ID N0:18所述的轻链可变区的抗体 相同的表位，例如，单克隆抗体5A8。
[0016] 在此所述的任一抗IgE抗体可以是一种全长抗体或其抗原结合片段。在有些实施 例中，抗体是人抗体或人源化抗体。
[0017] 本发明的另一方面描述了用于治疗IgE-相关疾病的方法，该方法包括给与有此 需要的对象任一如上所述的抗IgE抗体，例如，与SVNPGLAGGSAQS (SEQ ID N0:11)结合或与 如mAb 2H9那样或mAb 2H9那样结合相同表位的抗IgE抗体，mAb 2H9包含如SEQ ID N0:3 所述的重链可变区和如SEQ ID N0:4所述的轻链可变区，mAb2H9包含如SEQ ID NO: 17所 述的重链可变区和如SEQ ID NO: 18所述的轻链可变区。
[0018] 在有些实施例中，需要治疗的对象（例如人患者）被诊断为，怀疑有IgE介导的疾 病，或处于IgE介导的疾病风险中。IgE介导的疾病可以是过敏性疾病。例子包括但不限 于，过敏反应，过敏性哮喘，过敏性鼻炎，特应性皮炎（湿疹），灰尘过敏，昆虫或爬虫毒液过 敏，食物过敏，花粉过敏和乳胶过敏。
[0019] 在还有另一方面，本发明描述了编码本文所述的重链和/或轻链的分离的核 酸。在一实施例中，分离的核酸包含编码含有GYTFTNYNVH(SEQ ID N0:8)所示VH OTR1， GMYPGNDDILYNQNFKD(SEQ ID N0:9)所示 VH CDR2 和 SGLQGPWFDY(SEQ ID N0:10)所示 VH CDR3的抗体重链可变区的核苷酸序列。这样的核苷酸序列（例如SEQ ID NO: 1)可以编码 SEQ ID NO:3的抗体重链可变区。
[0020] 在另一实施例中，分离的核酸包含编码含有GFSLTDYGVN(SEQ ID N0:19)所示VH CDR 1，MIWGDGSTDYNSTL(SEQ ID N0:20)所示VH CDR2和NWFAY(SEQ ID N0:21)所示VH CDR3 的抗体重链可变区的核苷酸序列。这样的核苷酸序列可以编码SEQ ID NO: 17的抗体重链 可变区。
[0021] 备选地或另外地，分离的核酸包含编码含有RASDHINNWLA(SEQ ID N0:5)所示' CDR1，SATSLET(SEQ ID N0:6)所示 ' CDR2 和 QQCWITPFT(SEQ