刺孢小克银汉霉FAR3及其发酵制备γ-亚麻酸油脂的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及能够合成Y-亚麻酸油脂的新菌株一刺孢小克银汉霉
[Cunninghamella echinulata (Thaxter) thaxter FAR3]，及其在微生物合成 亚麻酸油 脂中的应用。
【背景技术】
[0002] Y -亚麻酸化学名为：全顺式-6,9,12-十八碳三烯酸，英文名为： Gamma-Iinolenic acid, Y-亚麻酸为无色或淡黄色液体脂肪酸，不溶于水而易溶于乙醚、 石油醚等有机溶剂。Y -亚麻酸又被称为维生素F，属于人体必需脂肪酸，人体自身不能合 成，必须从食物中摄取。Y-亚麻酸参与人体新陈代谢，并合成机体所需的活性成分。Y-亚 麻酸的主要作用包括：降血脂；抗血栓性心脑血管病；预防和治疗高血压；抗动脉粥样硬 化；抗肿瘤；抗菌；抗HIV感染；抗炎；抗糖尿病作用；减肥作用；治疗溃疡；美容养颜等等。 因此，Y-亚麻酸被认为是具有特殊医疗保健作用的营养素，已为世界上许多国家用于药 品、保健食品和商级化妆品的生广。
[0003] 目前国内主要是从月见草等富含Y-亚麻酸的植物中提取Y-亚麻酸油脂，由于 月见草为一年生植物产量少且需要大面积的耕地，并受地域、气候等因素影响大，因此从月 见草等天然植物中提取的Y-亚麻酸价格昂贵；在我国微生物发酵法合成Y-亚麻酸油脂 技术仅限于实验室研究阶段，该技术并没有实际应用于工业化放大生产，只出现在一些相 关的专利文献报道中，例如南京工业大学的黄和在《一种富含Y-亚麻酸的微生物油脂的 制备方法》（发明专利申请号 ：201010505418.X)中提到利用深黄被孢霉发酵生产Y-亚 麻酸；王景恒、葛英华在《富含有机硒的Y-亚麻酸干菌粉及其生产工艺》（发明专利申请 号：200610065889. 7)中提到以蔗糖、糖蜜、淀粉中任意一种或几种为碳源，以花生饼粉和/ 或蛋白胨为氮源发酵刺孢小克银汉霉CGMCC NO. 1652生产Y-亚麻酸。在国外，日本出光 石油化学公司利用被孢霉发酵以及英国的一家公司利用毛霉发酵相继成功商业化生产出 Y-亚麻酸。
[0004] 目前，微生物发酵生产Y-亚麻酸已成为国际趋势，微生物发酵法与传统的从月 见草籽油中提取Y -亚麻酸相比具有生产周期短、Y -亚麻酸营养丰富、不受环境和季节的 限制、可以人为提高发酵产量等优点。本发明利用廉价的马铃薯打浆液为发酵培养基原料， 极大地降低了生产成本，且利用丁烷亚临界萃取设备提取菌丝体中的Y-亚麻酸油脂，可 以避免Y-亚麻酸在高温条件下被氧化。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于，为避免现有技术的不足，提供一种刺孢小克银汉霉 FAR3。筛选到的能够合成Y -亚麻酸的新菌株-刺孢小克银汉霉[Cunninghamella echinulata (Thaxter)thaxter FAR3]〇
[0006] 本发明的又一目的在于提供一种刺孢小克银汉霉FAR3的制备方法。
[0007] 本发明的还一目的在于提供一种刺孢小克银汉霉[Cunninghamella echinulata(Thaxter)thaxter FAR3]发酵制备Y-亚麻酸的方法，可以获得高产、用 途广泛的Y-亚麻酸油脂。本发明以马铃薯打浆液为主要的发酵培养基原料，并在发 酵培养基中添加少量的葡萄糖、大豆蛋白粉以及无机盐，然后将上述刺孢小克银汉霉 [Cunninghamella echinulata (Thaxter) thaxter FAR3]接入发酵培养基中进行有氧发酵 获得菌丝体，最后利用丁烷亚临界萃取设备提取菌丝体中的Y-亚麻酸油脂。
[0008] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种刺孢小克银汉霉FAR3,其主要 特点在于：所述刺抱小克银汉霉[Cunninghamella echinulata (Thaxter) thaxter FAR3]属 于毛霉目，小克银汉霉科，小克银汉霉属的菌种，该菌种在中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心保藏，保藏时间为2014年08月07日，保藏编号为CGMCC NO. 9504,保藏地 址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
[0009] 所述刺孢小克银汉霉FAR3具有如下形态特征：在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上 25°C培养5天，菌落圆形，初白色，大量气生菌丝，4天后菌落转为浅灰色，背面灰色，直径 4. 0?4. 5厘米。菌丝无色，平滑，分枝，无隔膜，宽4. 4?7. 4 ii m ;孢囊球形或卵球形，光滑， 成熟孢囊表面抚状突起，后在突起顶端形成孢囊孢子，25. 0?30. 0 ii m ;孢囊孢子近球形至 球形，单胞，浅褐色，短刺或有时平滑，7. 0?10. 0 y m。将已经在马铃薯葡萄糖琼脂培养基 上活化好的刺孢小克银汉霉菌种接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中25°C培养2天，菌体为 灰白色，菌液为淡黄色。
[0010] 所述的一种刺孢小克银汉霉FAR3,具有如下分子生物学特征：提取菌株FAR3的基 因组DNA，选用真菌18S rDNA的特异性引物NS1、NS8进行PCR扩增并纯化PCR产物，测得 该菌株18S rDNA的序列如下：
[0011]
【主权项】
1. 一种刺孢小克银汉霉FAR3,其特征在于：所述刺孢小克银汉霉[Cunninghamella echinulata (Thaxter) thaxter FAR3]，属于毛霉目，小克银汉霉科，小克银汉霉属的菌种， 该菌种在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，保藏时间为2014年08月07日，保藏编 号为 CGMCC NO. 9504。 所述刺孢小克银汉霉具有如下形态特征：在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上25°C培养5 天，菌落圆形，初白色，大量气生菌丝，4天后菌落转为浅灰色，背面灰色，直径4. 0?4. 5厘 米。菌丝无色，平滑，分枝，无隔膜，宽4. 4?7. 4 μ m ;孢囊球形或卵球形，光滑，成熟孢囊表 面抚状突起，后在突起顶端形成孢囊孢子，25. 0?30. 0 μ m ;孢囊孢子近球形至球形，单胞， 浅褐色，短刺或有时平滑，7. 0?10. 0 μ m。将已经在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上活化好的 刺孢小克银汉霉菌种接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中25°C培养2天，菌体为灰白色，菌 液为淡黄色。
2. 如权利要求1所述的一种刺孢小克银汉霉FAR3,其特征在于：所述的刺孢小克银汉 霉具有如下分子生物学特征：提取菌株FAR3的基因组DNA，选用真菌18S rDNA的特异性引 物NS1、NS8进行PCR扩增并纯化PCR产物，测得该菌株18S rDNA的序列如下： gaattgacct tttctcggta ccatctaata atctagtttg ccatagttct cctcaaaagc 60 cggttgttgc caaccagcct tcaatgatcc cacatgctca ctatgaccat tcaatcggta 120 gtagcgacgg gcggtgtgta caaagggcag ggacgtaatc aacgcaacct gatgagttac 180 gcttactagg aattcctcgt tgaagagcaa taattgcaat gctctatccc cagcacgaca 240 aagtttcaaa agtttcccca gaccttccgg ccaaggtata aaataaactc gttgactttg 300 tcagtgtagc gcgcgtgcgg cccagaacat ctaagggcat cacagacctg ttattgccta 360 aaacttcccc tgaattgtat tcagtagtct ctctaagaag ctggctagcc cgaaggctag 420 aaaccaccaa ctaaaaagtt ggcccagcta attagcagaa taaggtctcg ttcgttatcg 480 gaattaacca gacaaatcac tccacgaact aagaacggcc atgcaccacc acccataaaa 540 tctagaaaga gctttcaatc tgtcaatcct tattatgtct ggacctggtg agtttccccg 600 tgttgagtca aattaagccg caggctccac tcctggtggt gcccttccgt caattccttt 660 aagtttcagc cttgcgtccc atactccccc cagaacccaa aaactttact ttcgctaagc 720 tgctgaatcc tgccagtggc gaggatccaa tcgctagtcg gcatagtttg tggttaagac 780 tacgacggta tctaatcgtc ttcgatccct caactttagt ccctgatcaa tggaaacgtc 840 ctaggtcaaa tgctttcgca gtagtttgtc ttcggtcaat ccaagaattt cacctctagc 900 gaccaaatac aaatgccccc aaccgttcct attcatcatt tcctaaggtc tagtatacca 960 acaaaacaag actaaggtcc tattttatta ttccatgcta acacattcag g