一种水稻细菌性褐条病菌噬菌体及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于水稻细菌性褐条病防治技术领域，具体设及一种水稻细菌性褐条病菌 瞻菌体及其应用。
【背景技术】
[0002] 水稻是我国主要的粮食作物、经济作物，是世界上=分之一人类的主食。水稻细菌 性褐条病菌（Acidovorax avenae subsp. avenae)为假单胞杆菌属细菌，该病原菌主要在稻 种、稻草上越冬，通过稻株的气孔、伤口侵入为害。该病原菌引发的主要症状是在水稻秩苗 上沿叶脉在叶片叶銷上产生褐色条斑，严重时可造成屯、叶枯死；在水稻上还会出现早穗崎 形穗和不实率增加。
[0003] 水稻褐条病是水稻生产上最重要的细菌性病害之一。此病一般在旱、中稻秩田期 发生比较普遍，旱稻本田期也常在江河两岸W及地势低珪等易溃地区造成严重危害。洪溃 过后，受浸的稻田往往会引起发病，严重时影响灌浆，釉粒增多引起减产。近年来南方旱、中 稻生长季节暴雨频繁秩，苗受淹和遭受洪溃侵袭现象严重，诱发细菌性褐条病菌局部大流 行，造成水稻产量损失较大，其发病面积不断扩大，危害程度日益严重。
[0004] 目前，控制水稻细菌性褐条病的主要手段包括多种消毒剂、防腐剂、抗生素、抗代 谢物等。然而，随着该些药物的广泛应用，不但产生了大量的药物残留，细菌的多重耐药、高 剂量耐药等现象也越来越严重。而且，耐药菌株的传播进一步加剧，从而增加了对环境和人 类的威胁。面对日益严重的耐药毒株的出现，利用抗生素来控制褐条病菌已经不是最佳防 控方法，寻找更加有效、安全的防止方法势在必行。
[0005] 瞻菌体是病毒的一种，其特别之处是专W细菌为宿主。瞻菌体是一种普遍存在的 生物体，而且经常都伴随着细菌。裂解性瞻菌体感染细菌后，可在宿主菌内快速增殖并使之 裂解。瞻菌体在感染过程中破坏细菌的基因组，该种特性实质上增加了瞻菌体治疗方法的 安全性。同时它还有适应能力强、特异性和准确性高等特点，是一种代替抗生素治疗的可行 方法。瞻菌体作为一种新兴的生物治疗制剂已经越来越受到研究人员的关注，用瞻菌体裂 解其宿主菌从而达到防病治病的目的具有广阔的应用前景。
[0006] 目前还未见能特异性裂解水稻细菌性褐条病菌的瞻菌体的相关报道。
【发明内容】
[0007] 本发明提供了一种水稻细菌性褐条病菌瞻菌体，该瞻菌体能特异性地裂解水稻细 菌性褐条病菌。
[000引一种水稻细菌性褐条病菌瞻菌体，分类命名为水稻细菌性褐条病菌瞻菌体 (Acidovorax avenae subsp.Avenae phage),株号为 API,已于 2014 年 11 月 27 日保藏于位 于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中屯、，保藏编号为CCTCC M 2014599。
[0009] 该水稻细菌性褐条病菌瞻菌体具有二十面头和非收缩性长尾，属于长尾瞻菌体科 (Siphoviridae)。
[0010] 本发明从发病水稻稻种上分离到一株水稻细菌性褐条病菌，其16S rDNA序列如 SEQ ID No. 1所示；利用该菌株作为宿主菌进行裂解性瞻菌体的筛选，获得本发明的水稻细 菌性褐条病菌瞻菌体。一步生长曲线表明该瞻菌体感染宿主菌的潜伏期约为20min，裂解量 约160P即/感染细胞，裂解性较强。
[0011] 本发明还提供了所述水稻细菌性褐条病菌瞻菌体在制备用于抑制水稻细菌性褐 条病菌的瞻菌体制剂中的应用。
[0012] 本发明还提供了一种瞻菌体制剂，其活性成分为所述水稻细菌性褐条病菌瞻菌 体。
[0013] 作为优选，所述水稻细菌性褐条病菌瞻菌体的浓度为2X 109~10 1中即/ml。
[0014] 基于该瞻菌体的裂解性能，本发明还提供了所述水稻细菌性褐条病菌瞻菌体在抑 制水稻细菌性褐条病菌中的应用。
[0015] 本发明还提供了所述水稻细菌性褐条病菌瞻菌体在防治水稻细菌性褐条病中的 应用。
[0016] 所述应用包括；将发病水稻种子浸泡在水稻细菌性褐条病菌瞻菌体悬液（浓度 为2X 109~10 1中即/ml)中；或者将水稻细菌性褐条病菌瞻菌体悬液（浓度为2X 109~ 1〇1中即/ml)喷洒在水稻秩苗上。
[0017] 作为优选，浸泡时间为2~化。
[001引与现有技术相比，本发明的有益效果为；
[0019] 本发明的水稻细菌性褐条病菌瞻菌体能特异性裂解水稻细菌性褐条病菌，且裂解 量约160PFU/感染细胞，裂解性较强，能用于由水稻细菌性褐条病菌引起的水稻细菌性褐 条病的防治。
【附图说明】
[0020] 图1为本发明水稻褐条病菌瞻菌体的平板生长图；
[0021] 图2为本发明水稻褐条病菌瞻菌体的电镜观察图；
[0022] 图3为本发明水稻褐条病菌瞻菌体的一步生长曲线示意图；
[0023] 图4为本发明水稻褐条病菌瞻菌体对水稻褐条病菌的裂解曲线；
[0024] 其中，+ ;加入瞻菌体的宿主菌；不加瞻菌体的宿主菌；
[0025] 图5为本发明水稻褐条病菌瞻菌体对水稻褐条病的防治效果图；
[0026] 其中，左；处理组（种植瞻菌体悬液浸泡处理过的种子）；
[0027] 右；对照组（种植水浸泡处理过的种子）。
【具体实施方式】
[002引下面结合附图和【具体实施方式】对本发明作进一步详细说明。
[0029] 实施例1水稻细菌性褐条病菌瞻菌体的分离
[0030] (1)分离水稻细菌性褐条病菌
[0031] ①水稻病种经过浸泡、研磨后静置一段时间，取上清进行梯度稀释并涂板，将平板 倒置于30°C温箱中培养；
[0032] ②培养4她后挑取疑似水稻细菌性褐条病菌的单菌落，进行纯化；
[0033] ⑨对分离到的菌株分别进行烟草过敏反应W及水稻致病性检测，取检测均为阳性 的菌株，提取基因组DNA，进行16S rDNA测序（测序结果见SEQ ID No. 1)。
[0034] 从而分离并验证获得一株水稻细菌性褐条病菌（Aaa RS-2)，W该菌株作为宿主菌 进行瞻菌体的分离。
[0035] (2)分离水稻细菌性褐条病菌瞻菌体
[0036] ①将病稻种用1 %蛋白腺水浸泡、研磨，400化/min离屯、15min后，取上清用 0. 22 y m微孔滤器过滤，取滤液；
[0037] ②将滤液与步骤（