抑癌基因IRX1的saRNA分子及其组合物和其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物领域，具体地说，本发明涉及一抑癌基因IRX1的saRNA分子及其 组合物和其应用。
【背景技术】
[0002] 抑癌基因是一大类可抑制细胞生长，并潜在抑制癌变的基因群。正常情况下它们 对细胞的发育、生长和分化起重要调控作用。染色体上某些位点等位基因的杂合性丢失 (L0H)及启动子区高甲基化是导致抑癌基因失活的重要分子机制，如何实现抑癌基因功能 复活是目前肿瘤预防和治疗的一条重要方向。
[0003] Iroquois homeobox proteinl (IRX1)基因属于易洛魁家族同源盒基因，基 因定位于5号染色体短臂5pl5. 33区，已被证实在胃癌和头颈癌中IRX1发挥抑癌基 因作用（Guo X,et al. Oncogene, 2010. 29(27): 3908-20 ;Bennett KL,et al. Cancer Res, 2008. 68(12) : 4494-9)。
[0004] 小分子激活RNA (small activating RNA, saRNA)是新近发现的祀向基因启动子 DM序列的双链小RNA分子，由saRNA激活祀基因使之再活化的现象被称之为RNA激活 (RNAactivation, RNAa)。saRNA是通过碑1向基因启动子区特定序列实现激活碑1基因的功效， 已有用于抑癌基因的调控和实验性治疗研究的报道。RNA激活技术的开发为W抑癌基因为 祀点的实验研究与祀向治疗提供了极其有前景的选择。
【发明内容】
[000引本发明的目的在于提供一抑癌基因IRX1的saRNA分子，W激活癌细胞内失活的抑 癌基因IRX1，实现治疗肿瘤的目的。
[0006] 为此，本发明公开了一抑癌基因IRX1的saRNA分子，其特征在于其序列与IRX1 基因启动子区距转录起始位点W上-1781至-2930区域的序列（SEQ ID NO ;1)互补，增加 IRX1基因的表达，其中优选所述其序列与IRX1基因启动子区距转录起始位点W上-1955 至-2728区域的序列（SEQ ID NO ;2)互补。
[0007] 在一些实施例中，所述saRNA分子其序列为SEQ ID NO ;3, SEQ ID NO ;4, SEQ ID NO ;5, SEQ ID NO ;6, SEQ ID NO ;7,或 SEQ ID NO ;8,其中优选为 SEQ ID NO ;5 或 SEQ ID NO ;6。
[0008] 本发明提供如上所述saRNA用于在执行IRXl基因在哺乳动物细胞中的激活(例 女口，增加基因的表达）针对IRX1基因的启动子序列的区域。
[0009] 另一方面，本发明还公开了一种用于激活IRX1基因的组合物，包括至少第一条核 糖核酸链，所述第一条核糖核酸链，其序列为SEQ ID N0;3，SEQ ID N0;4，SEQ ID N0;5，SEQ ID NO ;6, SEQ ID NO ;7,或SEQ ID NO ;8,与IRXl基因启动子区距转录起始位点W上区域的 序列（SEQ ID NO ;2)互补，增加IRX1基因的表达。
[0010] 在某些方面，组合物可W包括第二条核糖核酸链，其特征在于，当所述第一条核糖 核酸链序列为SEQ ID NO ;3所示，所述第二条核糖核酸链序列为SEQ ID NO ;4;当所述第一 条核糖核酸链序列为SEQ ID NO ;5所示，所述第二条核糖核酸链序列为SEQ ID NO ;6;当第 一核糖核酸链序列为SEQ ID NO ;7所示，第二个核糖核酸链序列为SEQ ID NO ;8。
[0011] 在某些实施例中，所述组合物可包含至少一种saRNA分子，其含有一个核糖核酸 的序列为与选自序列 SEQ ID N0;3，SEQ ID N0;4，SEQ ID N0;5，SEQ ID N0;6，SEQ ID NO: 7,或 SEQ ID NO ;8,其中优选为 SEQ ID NO ;5 和 SEQ ID NO ;6,或为与序列 SEQ ID NO ;3, SEQ ID NO ;4, SEQ ID NO ;5, SEQ ID NO ;6, SEQ ID NO ;7,或 SEQ ID NO ;8 中之一具有至少 99 %，95 %，90 %，85 %，或更少的序列同一性的序列。
[0012] 在某些实施例中，所述组合物可包括两个或多个的saRNA分子，其中每个saRNA核 糖核酸链，互补的祀基因IRX1的启动子区域内的不同的位置。
[0013] 另一方面，本发明公开一种增强哺乳细胞中抑癌基因IRX1表达的方法。
[0014] 另一方面，本发明公开如上所述saRNA在制备治疗细胞增生性疾病药物中的用 途。
[0015] 本发明首次发现了抑癌基因IRX1的saRNA分子，其能有效地激活癌细胞内失活的 抑癌基因IRX1，具有抑制癌细胞增殖的生物学功效，为肿瘤的基因治疗提供了新方法和新 分子祀点，对开发肿瘤的祀向治疗新策略具有重要意义，具有潜在临床应用价值。
【附图说明】
[0016] 图1.几个小双链RNA序列作用祀点示意图。
[0017] 图2.小双链RNA序列激活IRX1基因表达的英光定量PCR检测。
[001引图3. W小双链RNA dsIRXl-2119为例激活IRX1基因表达的免疫印迹法检测。
[0019] 图4.小双链RNA序列dsIRXl-2119激活IRX1基因表达的细胞增殖活力检测。
[0020] 图5.小双链RNA序列dsIRXl-2119激活IRX1基因表达的细胞克隆形成能力检测。
【具体实施方式】
[0021] 如本文所用，术语"分离的"是为了描述的兴趣(例如，可W是多核巧酸或多肤）的 化合物，其中化合物可能会自然发生的环境中，不同的是。
[0022] 本文所用的术语"纯化的"用于此是指从生产环境，在该环境中取出的化合物，是 至少60 %，优选75 %，并且最优选90 %无与它是天然相关的其它构件或W其他方式与在生 产过程中。
[0023] 本文所用的术语"互补"是指多核巧酸形成碱基对彼此的能力。通常是在反平行 的多核巧酸链的碱基单位之间通过氨键形成碱基对。多核巧酸链互补碱基对沃森-克里克 的方式(如A-T，A-U，C-G)，或W任何其他方式，允许形成复式。
[0024] 完美的互补性或100%的互补性是指，其中每一个多核巧酸链的核巧酸单元的情 况氨键与第二多核巧酸链的碱基单位，没有一个"不匹配"。不到完美的互补性指的情况是： 不是所有的核巧酸单位的两股彼此的氨键。例如，对于2个20聚体，如果只有两个在每条 链上的碱基对的氨键彼此的多核巧酸链表现出10%的互补性。在相同的例子中，如果在每 条链上的18个碱基对可W彼此的氨键，表现出的多核巧酸链90% W上的互补性。实质性的 互补性是指约79 %，约80 %，约85 %，约90 %，约95 %或更大的互补性。
[0025] 本文所用的术语"共辆物"（conjugate)是指一种多核巧酸，是共价键或非共价地 与改变的多核巧酸的物理性能，如增加的稳定性和/或促进的双链RNA的细胞摄取的分子 或基团，例如，但不显着影响的能力的多核巧酸的碱基配对与互补的多核巧酸。"末端共辆" 可W具有直接或间接地连接，通过一个连接器的3'和/或5'末端的多聚核巧酸链或双链 多聚核巧酸的分子或基团。可具有一个内部的共辆的分子或基团直接或间接地连接，通过 一个连接基团对基础，如核糖的2'位，不干扰Watson-化ick碱基配对的其他位置，例如， 5-氨基帰丙基尿巧。
[0026] 在一个双链多核巧酸中的一个或两个5'端的多核巧酸链组成的双链多核巧酸可 W承担的共辆分子或基团，和/或一个或两个3'末端的多聚核巧酸链的含有双双链多核巧 酸能承受的共辆分子或基团。
[0027] 共辆物可W含有，例如，氨基酸，肤，多肤，蛋白质，抗体，抗原，毒素，激素，脂质，核 巧酸，核巧，糖，碳水化合物，聚合物，如聚己二醇和聚丙二醇，W及类似物所有该些类的物 质或衍生工具。另外的例子，共辆物包含类固醇，如胆固醇，磯脂，二-和H -甘油醋，脂肪 酸，姪类，可含有或不含有不饱和基或取代，酶底物，生物素，地高辛，和多糖。还有其他的 例子包括己基-S-立苯基甲硫醇，琉基胆固醇，烷基链如dodecandiol或^^一烷基，磯脂如 二-十六烷基-外消旋-丙H醇，H己基1，2-二-0-十六烷基-硫離邻3-H-麟酸醋，聚胺， 聚己二醇，金刚焼己酸，踪搁基，十八烷基胺基团，hex}daminoca;rbonyl oxyc holesterol, 法呢基，香叶基团。
[0028] 共辆物也可包括可检测的标记。例如，共辆物可W是英光团共价连接的多聚核巧 酸。共辆物可W包括如TAMRA，B0DIPY英光团，切衍生物，例如切3或切5, D油syl，或本领 域中已知的任何其他合适的英