人巨细胞病毒交联抗体及其在免疫检测试剂盒中的应用
【专利说明】
[0001] 本申请是申请号为201310267573. 6、申请日2013年6月28日的中国专利申请的 分案申请。
技术领域
[0002] 本发明涉及一种异源交联物，具体而言就是一种由两种异源的抗体通过交联反应 而获得的含有四聚体形式的异源交联抗体的异源交联物，及其在病人阳性血液中病原体抗 体替代物上的应用，属于免疫学技术领域。
【背景技术】
[0003] 如今，诸如病毒、细菌、真菌和寄生虫之类的病原体给人类带来的威胁越来越大。 基于抗原和抗体之间特异性和高灵敏性反应的免疫分析方法，如胶体金免疫层析检测、乳 胶免疫层析检测、放射免疫检测（RIA)、酶联免疫吸附检测（ELISA)、时间分辨荧光免疫检 测（TRFIA)或化学发光免疫检测（CLIA)，已经被广泛地用于临床免疫测试之中。这些免疫 分析方法通常被用来定性或定量地检测人血液中的病原体抗原或抗体，从而快速和准确地 确定感染是否发生和/或感染所处的阶段。
[0004] 临床免疫检测试剂盒一般都包括阴性质控品和阳性质控品。这些质控品往往来 自抗体效价较高的病人阳性血液的系列稀释品，或者直接使用不同抗体效价的病人阳性血 液，包括血清、血浆或全血。但是利用病人阳性血液制备阳性质控品有很多缺点：1)很难获 得同时具有高效价和高特异性的病人阳性血液；2)个体之间的抗体效价和特异性差异较 大，难以标准化；3)成本比较高，4)有些病原体感染病例稀缺，在短时间内很难获得足够的 阳性血液；5)病原体阳性血液具有潜在的传染性，即便经过灭活处理，但仍然难以保证彻 底灭活，同时在收集和灭活病人阳性血液时，操作人员也有潜在被感染的风险。为此，人们 经常使用替代病人阳性血液的质控品。
[0005] 欧洲专利申请EP 0 330 902A2揭示出在检测人血液特异性抗体时，使用一种或 多种人单克隆抗体（如人抗风瘆病毒单克隆抗体和人抗水痘带状疱瘆病毒单克隆抗体）作 为测试对照，但是每次构建的人单克隆抗体只包括一种抗体的恒定区，检测其他抗体类型 需要重新构建，而且由于在伦理上不允许利用人体进行抗体制备，因而不得不利用噬菌体 展示技术和转基因动物等方法来制造人单克隆抗体，这就使得抗体制备比较困难。美国专 利US 6, 015, 662揭示出人鼠嵌合抗体可以用于人血液抗体检测的阳性对照，但是每次构 建的人鼠嵌合单克隆抗体只包括一种抗体的恒定区，检测其他抗体类型需要重新构建，而 且工艺非常复杂，这是因为除了利用杂交瘤技术获得小鼠单克隆抗体之外，还要进行抗体 基因克隆以及人鼠嵌合基因的构建和表达。
[0006] 目前除上述方法制备抗体外，还出现了利用交联剂制备抗体。已有很多种利用 交联剂制备交联抗体的方法。如交联剂琥泊酰亚胺吡啶二疏基丙醋[N-Suc c i n imi dy 1 3-(2-pyridyldithio)propionate, SPDP]可被用来将两种不同的蛋白（包括抗体和酶） 交联在一起而形成交联物（Carlsson J, Drevin H, and Ax6n R. Protein thiolation and reversible protein-protein conjugation. N-Succinimidyl3-(2-pyridyldithio) propionate, a new heterobifunctional reagent. Biochem. J.,1978, 173:723-737)〇交 联剂苯二马来酰亚胺（〇-phenylenedi-maleimide,〇-PDM)也被用来将两种抗体的片段 交联在一起（Glennie M, McBride H, Worth A, et al. . Preparation and performance of bispecific F (ab'gamma) 2antibody containing thioether-1inked Fab'gamma fragments. J. Immunol. , 1987, 139:2367-2375)。欧洲专利 EP 0062227A1 揭示出利用 交联剂戊二醛或高碘酸钠将两种不同物种来源的抗体偶联在一起。此外，美国专利US 4, 507, 234 揭不了交联剂二硫代双硝基苯甲酸[5, 5' -dithiobis-(2-nitrobenzoicacid)， DTNB]可被用来制备交联抗体。美国专利US 4, 929, 543揭示了交联剂S-乙酰巯基丁二酸 酐（S-acetylmercaptosuccinic anhydride, AMSA)和马来酰亚胺己酰基-N-羟基瑭泊酰亚 胺醋（Maleimidohexanoyl-N-hydroxysuccinimide ester，MHS)可被用来制备交联抗体。美 国专利US 5, 478, 753揭示了交联剂4-马来酰亚胺基丁酸-N-琥珀酰亚胺酯（N-y -malei midobutyryloxysuccinimide ester, GMBS)可被用来制备交联抗体。
[0007] 交联抗体也常被用于制备替代病人阳性血液的质控品。美国专利US4, 929, 543揭 示了非人的抗体或其Fab或F(ab'）2片段和人免疫球蛋白或其Fc片段的异源交联物，用于 人血清抗体诊断。美国专利US 5, 478, 753揭示了非人的非IgM和人IgM的异源交联物，用 于血清IgM诊断试剂盒，异源交联物中的非人的非IgM可特异性地识别和结合病原体抗原， 人IgM可以和标记抗体结合。美国专利US 5, 491，218揭示了非人的抗体或其片段和另一 种抗体的异源交联物，如人IgM和抗单纯疱瘆病毒抗体F (ab'）2片段的异源交联物，异源交 联物中非人的抗体特异性地结合一种特定的病原体，另一种抗体特异性地结合一种特定的 抗体类型。中国专利ZL97109106. 4揭示了非人的抗艾滋病病毒抗体或经处理后具有抗体 活性的片段和人免疫球蛋白的异源交联物，可用作病人阳性血液中艾滋病病毒抗体的替代 物。但是以上这些专利中并没有揭示制备出的异源交联物的具体组成，这就造成了异源交 联物不同批次之间质量不稳定，容易产生检测误差，替代性较差。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于提供一种由两种异源的抗体通过交联反应而获得的异源交联 物，所述异源交联物包括由所述两种异源的抗体形成的四聚体形式的异源交联抗体。优选 地，所述两种异源的抗体为非人的病原体抗体和健康的未感染病原体的人抗体；优选地，所 述四聚体形式的异源交联抗体在所述异源交联物中所占的质量比不小于50%。
[0009] 本发明的目的在于一种异源交联物在病人阳性血液中病原体抗体替代物上的