血液样品收集装置的制造方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种血液样品收集装置，尤其涉及一种用于稳定血液样品中游离核酸 水平及保持游离核酸完整性的血液样品收集装置。
【背景技术】
[0002] 早在1948年，血液中游离的脱氧核糖核酸（简称为rfDNA)就被发现了，但其在临 床医学的应用还未超过二十年。具体地的说，rfDNA被证明存在于系统性红斑狼疮患者的 血清中。
[000引现在对于C巧NA的研究有两大热点：
[0004] -个是利用癌症患者中的rfDNA明显升高来诊断癌症，rfDNA水平在癌症患者的 血清中明显增高。据调查，类风湿关节炎、大肠癌、乳腺癌、膜腺癌、头颈部癌症患者的rfDNA 浓度都明显上升。该rfDNA提取自癌症患者的血浆或血清，呈现出典型特征的肿瘤DM,并 且可W充当非侵入性生物标记用于癌症检测和管理；
[0005] 另一个是胎儿C巧NA在产前诊断中的应用，临床应用涉及了胎儿rfDNA分析，包 括了性别判定，单基因奈乱，妊娠相关疾病和非整倍体检测。
[0006] 健康人的C巧NA浓度水平极低，平均循环浓度是30ng/ml，C巧NA通常来说是双链 的，大约为18~21个碱基大小。其浓度极易受到血细胞裂解、核酸酶降解等因素影响而波 动。
[0007] 影响rfDNA的精确检测的主要因素如下：
[000引 （1)血细胞自然裂解释放出其基因组DNA，干扰cfDNA的检测；
[0009] (2)样品在抽取、加工过程中受机械损伤而导致细胞裂解，该导致rfDNA浓度水平 增高；
[0010] 做血浆中DNA酶的存化导致CfDNA的降解，因此CfDNA浓度水平降低。
[0011] 为减少细胞DNA的对血浆CfDNA的污染，减少DNA酶的降解作用，现阶段主要采用 如下技术：
[0012] (1)选用带有特殊添加剂的不同类型的血液样品收集装置，如带抗凝血剂巧DTA、 肝素、巧樣酸盐）的采血管，W防止全血细胞凝血，减少来自白细胞的DNA释放；
[001引 0)改善样品存储条件，如4°C低温保存，抑制DNA酶的活性；
[0014] (3)优化离也分离条件，W减少分离血浆过程中，血细胞裂解释放DNA。
[0015] 通过W上技术处理，对C巧NA的精确检测可得一定的改善。但是由于运输及离也 分离过程产生机械振动等因素，血细胞裂解仍然存在；在4C低低温情况下，DNA酶仍然具 有一定的活性，血液中的核酸水平仍然存在不稳定因素，长期保存的条件下，真正的游离核 酸仍然有大量损失，不利于游离核酸的精确检测。同时现有条件下，血液采集、运输和存储 都必须在低温下进行，但是低温给样品的采集、运输和存储带来了许多不便与困难，同时 经济成本较高。
[0016] 李勤在其硕±学位论文《体外存放和甲酵处理对孕妇血浆中胎儿DNA水平的影响 的实验研究》中介绍了一种甲酵处理血样W减少细胞裂解、抑制DM酶活性，W延长血液样 品体外存储时间的方法。然而由于甲酵具有导致核酸断裂、核酸-蛋白质交联、核酸交联等 作用，甲酵破坏核酸结构的完整性，不利于对cfDNA的精确检测分析。
[0017] 中国发明专利"常温保存核酸的采集容器"（申请公布号CN103789202A ;申请公布 日2014.05. 14)，其公开了如下的技术方案，"一种常温保存核酸的采集容器，包括采集管和 胶塞，胶塞密封在采集管的管口上，胶塞的外面设有保护帽，采集管内设置有添加剂，所述 添加剂由血液抗凝剂及其缓冲液、防腐固定剂、核酸酶抑制剂、代谢抑制剂及细胞膜稳定剂 混合而成。所述采集管是用玻璃或塑料制作；玻璃为娃测玻璃或石英玻璃；塑料为聚对苯 二甲酸己二醇醋（PET)、聚对苯二甲酸了二醇醋（PBT)或聚蔡二甲酸己二醇醋（阳脚。所述 胶塞是用橡胶制作，橡胶为下基橡胶。所述胶塞可W用铅塑膜替代"，该添加剂含有甲酵。
[0018] 因此有必要提供一种可W稳定血液样品中游离核酸水平及保护游离核酸的完整 性的血液样品收集装置，W消除甲酵对核酸的结构完整性的不利影响，最小化细胞核酸物 质的影响，最小化运输、存储、加工处理条件对游离核酸水平影响，比如机械震荡导致的DNA 链的损伤。
【发明内容】
[0019] 本发明目的是为了克服现有血液样品收集装置无法稳定血液样品中游离核酸水 平及保护游离核酸的完整性的缺陷，发明一种血液样品收集装置，该装置可在常温下长期 保存（7~14天）血液样品，稳定血液样品中游离核酸水平，保护游离核酸的完整性，有利 于对rfDNA的精确检测分析。
[0020] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0021] 血液样品收集装置，包括一容器，容器内设有添加剂，所述添加剂由血液抗凝剂、 血细胞核酸稳定剂、血浆核酸稳定剂、抑缓冲液组成。
[0022] 具体的，上述血液样品收集装置的容器有两种实现方案。
[0023] 方案一，容器包括采集管，其管口处设有密封胶塞，胶塞的外面设有保护帽。
[0024] 方案二，根据权利要求1所述的血液样品收集装置，其特征在于，所说容器包括采 集管，其管口与密封胶塞可拆的相连，胶塞的外面设有保护帽，保护帽上固定设有可截留细 胞并允许血浆通过的微孔滤膜制成的膜囊。
[0025] 较佳的，所说的采集管由玻璃或塑料制成。
[0026] 较佳的，所说的玻璃为娃测玻璃或石英玻璃；塑料为聚对苯二甲酸己二醇醋、聚对 苯二甲酸下二醇醋或聚蔡二甲酸己二醇醋中的一种。
[0027] 较佳的，所说胶塞由橡胶制成。更进一步的，所说的橡胶为下基橡胶。
[0028] 所说胶塞可由铅塑膜替代。
[0029] 较佳的，所说血液抗凝剂选自草酸盐、肝素盐、构稼酸盐中的一种或多种；
[0030] 所说抑缓冲液为甘氨酸-氨氧化轴-盐酸缓冲液、H轻甲基氨基甲焼-盐酸缓冲 液中的一种；
[0031] 所说血细胞核酸稳定剂选自尿囊素、5, 5-二甲基海因、嗯哇焼中的一种或多种； [003引所述血浆核酸稳定剂选自N-己酸甲亚胺、N-(3-己酸-戊胺）的一种或多种； [0033] 其中，血液抗凝剂按1.0~4. Omg/ml血液的剂量添加；血细胞核酸稳定剂按 0.0 Olg~3. 5g/ml血液的剂量添加；血细胞核酸稳定剂与血浆核酸稳定剂的摩尔比为 1:0. 01~1:5