一种与人类乳腺癌相关的血清标志物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医学领域，涉及一种与人类乳腺癌相关的血清标志物及其应用； 具体涉及血清rniR-598-3p或miR-598-3p与CA153的组合及其应用。
【背景技术】
[0002] 乳腺癌（breast cancer, BC)是女性最常见恶性肿瘤之一，全球每年约有120万新 发乳腺癌病例，50万死亡病例，在我国每年约有19万新发乳腺癌病例。近年来乳腺癌的发 病率逐年上升，发病年龄日趋年轻化，早期诊断和辅助化疗、激素治疗等综合治疗手段使得 乳腺癌的死亡率有所递减，但仍属于发病率和死亡率最高的女性恶性肿瘤。
[0003] 乳腺癌早期予以手术治疗，5年生存率高达60 %以上，所以乳腺癌早期诊断具有 重要意义。现阶段临床上乳腺癌的辅助诊断使用超声、乳腺钥靶、CT、MRI检查等多种手段， 但误诊率仍高且不能早期诊断。由于肿瘤组织标本需手术切除后获得限制了其在临床的 应用。细针穿刺细胞学检查虽是诊断乳腺癌的主要方法，但是具有损伤性，且诊断灵敏度 和准确度受肿块大小、位置深浅、操作经验、涂片制作、读片水平等因素影响。此外，肿瘤标 志物因其无创性而广泛应用于临床，如肿瘤标志物糖链抗原153 (CA153)，但其阳性率仅为 53%。
[0004] 微小RNA (miRNA)是一组非编码小RNA，长约18-25个核苷酸，主要通过结合靶基因 mRNA的5' UTR、编码区或3' UTR，在转录后水平对基因的表达行负调控功能，在细胞增殖、 分化、凋亡、免疫反应及肿瘤形成等一系列过程中发挥重要作用。多数miRNA具有高度保守 性、时序性和组织特异性。miRNA和肿瘤的关系为肿瘤的诊断及治疗带来了新思路。Calin 等发现50%以上的miRNA基因定位于与肿瘤相关的区域或脆弱位点，首次证明miRNA失调 在肿瘤发生中发挥重要作用（Calin G A，et al, Human microRNA genes are frequently located at fragile sites and genomic regions involved in cancers, Proc Natl Acad Sci U S A, 2004, 101(9) :2999-3004)。Takemizawa 等报道了第一个肺癌相关性 miRNA:let-7(Takamizawa J, et al, Reduced expression of the let-7microRNAs in human lung cancers in association with shortened postoperative survival, Cancer Res, 2004, 64(11) :3753-3756)。有研究表明，miRNA异常表达参与了乳腺癌的发生和发 展，对于乳腺癌的诊断和预后判断具有重要价值。Zhu等对乳腺癌患者血清miR-155的含 量进行了小样本的研究，发现血清miR-155水平在乳腺癌患者和非乳腺癌患者中没有显著 性差异，但在癌组织孕酮受体阳性的患者中血清含量要高于阴性患者，提示其可能不是诊 断乳腺癌的指标，但有希望提示患者病程或预后的相关信息（Zhu W，et al, Circulating microRNAs in breast cancer and healthy subjects, BMC Res Notes, 2009, 2 (89))。血清 miRNA-lOb在乳腺癌骨转移患者中显著高表达，可以作为乳腺癌骨转移的肿瘤标志物（Zhao FL, et al, Serum over expression of microRNA-10b in patients with bone metastatic primary breast Cancer，J Int Med Res, 2012, 40 (3): 859 - 866)。
[0005] miR-598在食管癌患者中表达上调，提示患者预后良好（Zhao BS, et al，Screening of microRNA in patients with esophageal cancer at same tumor nodemetastasis stage with different prognoses,Asian Pac J Cancer Prev，2013, 14 (1) : 139-143)。目前还没有将血清miR-598-3p作为乳腺癌肿瘤标志物的报 道，若能检测出miR-598-3p在乳腺癌患者中的显著性表达差异，将对乳腺癌的诊断和治疗 具有重要的临床应用价值。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的之一在于提供一种与人类乳腺癌相关的血清标志物。
[0007] 本发明的目的之二在于提供上述血清标志物的检测试剂。
[0008] 本发明的目的之三在于提供一种人类乳腺癌的诊断试剂盒。
[0009] 本发明的目的之四在于提供上述血清标志物在制备人类乳腺癌诊断试剂中的应 用。
[0010] 本发明的目的之五在于提供上述血清标志物和上述血清标志物的检测试剂在制 备人类乳腺癌诊断试剂盒中的应用。
[0011] 发明人通过分离和研究乳腺癌患者及健康人群血清中的miR-598-3p，发现 miR-598-3p与乳腺癌相关，并且能很好的将乳腺癌患者和健康人区分开来，以此研制出了 可便于临床应用的乳腺癌诊断试剂盒，为乳腺癌的筛查和诊断提供数据支持，为发现具有 潜在治疗价值的新型小分子药物提供数据支持。
[0012] 本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
[0013] 本发明提供了一种与人类乳腺癌相关的血清标志物，所述标志物为miR-598-3p 或miR-598-3p与CA153的组合；对于乳腺癌诊断，血清miR-598-3p优于CA153,具有高灵 敏度和高特异性，而且miR-598-3p联合CA153诊断更优。
[0014] 本发明还提供了一种上述血清标志物的检测试剂。对于miR-598-3p来说，所述试 剂能够检测人类血清中miR-598-3p的含量；对于miR-598-3p与CA153的组合来说，所述试 剂能够同时检测人类血清中miR-598-3p和CA153的含量。优选地，对于miR-598-3p来说， 所述试剂包括检测miR-598-3p的引物；对于miR-598-3p与CA153的组合来说，所述试剂包 括检测miR-598-3p的引物和检测CA153的抗体；检测miR-598-3p的引物由正向引物序列 和通用反向引物组成；所述正向引物序列如SEQ ID NO. 1所示。所述检测CA153的抗体可 从商业途径获取，只要能检测血清中CA153的含量即可。
[0015] 本发明还提供了一种人类乳腺癌诊断试剂盒。所述试剂盒包括检测人类血清中 miR-598-3p的含量的试剂。优选地，所述试剂是检测miR-598-3p的引物，检测miR-598-3p 的引物由正向引物序列和通用反向引物组成；所述正向引物序列如SEQ ID NO. 1所示。 [0016] 作为一种可替代的技术方案，本发明提供的人类乳腺癌诊断试剂盒包括检测人类 血清中miR-598-3p的含量的试剂和检测CA153蛋白含量的试剂。优选地，检测人类血清中 miR-598-3p的含量的试剂是检测miR-598-3p的引物，检测miR-598-3p的引物由正向引物 序列和通用反向引物组成；所述正向引物序列如SEQ ID NO. 1所示；检测CA153蛋白含量的 试剂是CA153抗体，所述检测CA153的抗体可从商业途径获取，只要能检测血清中CA153的 含量即可。
[0017] 本发明还提供了上述血清标志物在制备人类乳腺癌诊断试剂中的应用。对于 miR-598-3p来说，所述试剂包括检测miR-598-3p的引物；对于miR-598-3p与CA153的组 合来说，所述试剂包括检测miR-598-3p的引物和检测CA153的抗体；检测miR-598-3p的引 物由正向引物序列和通用反向引物组成；所述正向引物序列如SEQ ID NO. 1所示。所述检 测CA153的抗体可从商业途径获取，只要能检测血清中CA153的含量即可。
[0018] 本发明还提供了上述检测试剂在制备人类乳腺癌诊断试剂盒中的应用。所述人类 乳腺癌诊断试剂盒包括检测人类血清中mi