一株球毛壳菌及其应用_3

文档序号:8375830阅读:来源:国知局
9690,保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院 微生物研宄所。
[0019] 该菌株我们命名为FSR-74,分类命名为:球毛壳菌Chaetomiumglobosum。
[0020] 实施例2 球毛壳菌FSR-74菌株对人参真菌病害病原菌生长的抑制作用 采用3点杯碟对峙,生长速率法测定菌株FSR-74对人参7种真菌病害病原菌的抑制作 用:用直径5mm的打孔器将活化好的人参病原菌菌落制成相应尺寸的菌饼,无菌接种至马 铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)平板(直径90mm)的正中央,在距病原菌2. 5cm处的3方各 接入一个待测菌的菌饼,另1方为空白,作为处理组,每个处理重复3次;另在一块PDA平板 只接种人参病原菌,作为对照组,均置于25 °C培养箱培养7d,待对照组病原菌菌落长满平 板,测量处理组病原菌菌落直径(单位:_),并按照如下公式计算抑菌率。每种病原菌重 复3次,结果取平均值。抑菌率(%)=(对照病原菌菌落扩展半径一与生防真菌对峙培养 的病原菌菌落扩展半径)/对照病原菌菌落扩展半径X100% 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)配方为:土豆200g/L,葡萄糖10g/L,琼脂15g/L,蒸 馏水 1000mL,2yg/mL青霉素,pH为 6.8~7.2。
[0021] 结果如表1所示,菌株FSR-74对分别引起人参根腐病、锈腐病、黑斑病、立枯病、 疫病、菌核病和灰霉病的腐皮镰孢菌(F.solani)、毁灭柱孢菌(C.destructans)、人参链 格孢菌(A.panax)、立枯丝核菌(R.solani)、恶疫霉菌(P.cactorum)、人参核盘菌(S. schinseng)和灰葡萄孢菌(B.cinerea)7种病原菌均具有明显的抑制作用。特别是对引 起人参根腐病的腐皮镰孢菌的抑菌率达到67. 48%,对引起人参立枯病的立枯丝核菌和引起 人参菌核病的人参核盘菌的抑菌率为62%左右,对引起人参锈腐病的毁灭柱孢菌和人参灰 霉病的灰葡萄孢菌的抑菌率为50%~53%,对引起黑斑病的人参链格孢和人参疫病的恶疫霉 菌的抑菌率也达到了 46. 67%,反映出菌株FSR-74对人参7种主要病原真菌的防治作用具有 广谱性(表1)。
[0022] 表1球毛壳菌FSR-74对人参病原真菌的抑制作用(%)
【主权项】
1. 一株球毛壳菌(CXaeFSR-74,其特征在于,其保藏号为CGMCC No.9690〇
2. 如权利要求1所述的球毛壳菌FSR-74,其特征在于,在马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (PDA)平板上25 °C培养时生长较慢,菌落浅褐,橄褐或棕褐色,具灰白色或橄褐色气生菌 丝,背面棕褐色,常具橄褐色渗出物,菌落边缘常呈不整齐的波裂状;FSR-74的显微结构在 10X50光学显微镜下观察,子囊果表生,以褐色假根固着于基质表面,在反射光下为橄绿色 至橄褐色,倒卵形至近球形,直径160~240ym,高约220~300ym;子囊果壁由暗褐色交错 丝组织构成;顶生毛大量而密集,曲折状、波浪状或稍呈螺旋状卷曲,褐色,具隔,基部隔膜 较明显,不分枝,表面具密集疣点,基部宽约2. 5~4ym;侧生毛曲折状,分隔明显;子囊棍 棒状,27~36X11~15ym,内有8个子囊孢子,子囊壁容易消解;子囊孢子柠檬形,两侧扁, 两端各具一细尖,成熟时褐色,8. 5~11X7~8. 5ym,具单个顶生芽孔;马铃薯葡萄糖琼脂培 养基(PDA)配方为:土豆200g/L,葡萄糖10g/L,琼脂15g/L,蒸馏水1000mL,2yg/mL 青霉素,pH为6. 8~7. 2。
3. 如权利要求1或2所述的球毛壳菌FSR-74在防治植物真菌病害中的生防机制及应 用。
4. 如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述植物为人参。
5. 如权利要求3或4所述的应用,其特征在于,所述真菌为腐皮镰孢菌( so7a/?i)、毁灭柱抱菌Ofe1Stryctefl1S)、人参链格抱菌(Wteraariapanax)、立Mx趣核麗{Rhizoctonia solan!)、恶疫震惠{Phytophthora cactoruni),灰爆廢 抱菌ciflereaPers.)和人参核盘菌(5W<9roti/?ia 7 种病原菌中的 一种或多种。
6. 如权利要求3-5所述的应用,其特征在于,球毛壳菌FSR-74通过竞争、重寄生、产生 抑菌物质和对人参产生防病促生作用达到抑菌目的。
7. -种微生物制剂,其特征在于,含有球毛壳菌FSR-74孢子的全培养液和培养物。
8. 如权利要求7所述的微生物制剂,其特征在于,其是通过以下制备方法制备得到的: (1) 将球毛壳菌FSR-74试管斜面种活化,取2个5mm菌饼接种于用250mL三角瓶装 的100mL马铃薯葡萄糖(PDB)液体培养基中,在170r/min,25 °C下培养48h,获得种子 液; (2) 将球毛壳菌FSR-74种子液以10% (体积比)接种于发酵培养液中培养,在170r/ min,25°C下培养96h,获得培养液; (3) 将培养液经2层无菌纱布过滤,滤液经血球计数板计数,将孢子悬浮液分散至6 g?L4羧甲基纤维素钠(CMC)溶液中,得孢子悬浮液,孢子含量为2X10 5cfu?ml/1; (4) 将球毛壳菌FSR-74培养液在8000r/mim离心20min,过滤,获得发酵液。
9. 如权利要求7-8所述的微生物制剂,其特征在于,所述的马铃薯葡萄糖(PDB)培养液 的配方为:土豆200g/L,葡萄糖10g/L,蒸馏水1000mL,pH为6. 8~7. 2,121 °C湿热灭菌 30min,冷却后备用。
10. 如权利要求7-9所述的微生物制剂,其特征在于, 所述的PDB培养液是这样配制的:称取200g土豆切块后放入1000mL水中,煮沸至土 豆块变软,过滤得滤液,滤液中加入10g葡萄糖充分混匀,定容,1000mL三角瓶中装量为 300mL培养液,用双层封口膜封好三角瓶口,121 °C湿热灭菌30min,冷却后用于接种。
11. 如权利要求7-10中任一项所述的微生物制剂在防治人参真菌病害中的应用。
12. 如权利要求11所述的应用,其特征在于,所述真菌为毁灭柱孢菌( Ofe1Stryctefl1S)和人参链格抱菌中的一种或多种。
13. 如权利要求12所述的应用,其特征在于,在人参真菌病害发病初期,将所述微生物 制剂的稀释液均匀地施加到土壤中或喷洒于植物茎叶部,所述稀释液中微生物制剂含孢量 为 2X105cfu?mL'
【专利摘要】本发明公布一株球毛壳菌(Chaetomium globosum)FSR-74,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日期:2014年9月19日,其保藏号为CGMCC No.9690。所述菌株在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)平板25℃培养时生长较慢,菌落浅褐,边缘常呈不整齐的波裂状。FSR-74子囊果表生,以假根固着于基质表面;顶生毛波浪状,褐色,具隔,表面具密集疣点;子囊内有8个子囊孢子;子囊孢子柠檬形,具单个顶生芽孔。球毛壳菌(Chaetomium globosum)FSR-74对引起人参根腐病、疫病、菌核病、锈腐病、黑斑病、立枯病和灰霉病的主要病原菌具有高效广谱的抑菌作用。本发明还提供球毛壳菌(Chaetomium globosum)FSR-74在防治植物真菌病害中的生防机制和应用,以及在制备防治植物真菌病害的微生物制剂中的应用。CGMCC No.969020140919
【IPC分类】C12N1-14, A01P3-00, A01N63-04, C12R1-645
【公开号】CN104694397
【申请号】CN201410796936
【发明人】杨利民, 肖春萍, 韩梅
【申请人】吉林农业大学
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2014年12月22日
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