的制备方法
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及一种H走皂巧Ri的制备方法，特别涉及一种姜状H走皂巧Ri的制备方 法。
【背景技术】：
[0002] 人参皂巧（Ginsenoside，GS)是一种固醇类化合物，H聰皂巧，主要存在于人参属 药材中，是人参的主要有效成分。人参皂巧都具有相似的基本结构，都含有由30个碳原子 排列成四个环的留焼类固醇核，它们依糖巧基架构的不同而被分为两组：达玛焼型和齐域 果焼型。现已明确知道的人参皂巧单体约有40余种；在人参中的含量在4%左右。其中研 究最多且与肿瘤细胞调亡最为相关的为R的与化2。众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活 性，对正常细胞无毒副作用，与其他化疗药物幼日顺笛）联合应用有协同作用。
[0003] 人参皂巧Ro(Ginsenoside-Ro)为齐域果焼型人参皂巧，又被称为竹叶参V，存在 于人参，牛膝，竹叶参中，具有表面活性剂作用，对柴胡皂巧具有增溶的作用，能促进细胞增 生，调节小鼠脾细胞化1/化2型细胞因子的产生，能促进毛发生长，还能抑制5a-还原酶和 抗慢性也绞痛的作用。
[0004] 人参皂巧Ro结构存在糖巧键、醋巧键，易水解，所W人参皂巧Ro很不稳定(文献： 刘宏群.人参中丙二酸单醜基和齐域果酸型皂巧研究巧].中国农业科学院，2010)。人参 皂巧Ro在加热条件下醋巧键易破坏，该种报道大多集中在定性分解及通过结构物质推测 其产物。人参皂巧Ro在酸性条件下的水解难于控制，但人参皂巧Ro在碱性条件下的水解 情况及水解产物尚无报道，本发明人研究了人参皂巧Ro在碱性条件下的稳定性，考察了不 同温度不同抑值下人参皂巧Ro的水解情况，结果发现水解符合一级动力学反应。水解速 率与水解温度和水解体系的抑值相关，相同的水解温度，抑值越高，水解越快；相同的抑 值，温度越高水解越迅速。
[0005] 本发明人在研究人参皂巧Ro在碱性条件下的水解时意外的发现其水解产物中含 有大量的姜状H走皂巧Ri。
[0006] 姜状H走皂巧Ri是一种已知物质，存在于姜状H走、竹叶参、牛膝、人参等药材中， 具有降糖的特性，具有体外抗氧化能力等重要的价值。
[0007] 本发明由此开发出一种有用的用人参皂巧Ro制备姜状H走皂巧Ri的制备方法。
【发明内容】
：
[0008] 本发明的目的是提供一种人参皂巧Ro碱水解得到姜状H走皂巧Ri的制备方法， 该制备的关键步骤是控制人参皂巧Ro的水解条件。
[0009] 本发明提供一种姜状H走皂巧Ri的制备方法，所述方法，步骤如下：
[0010] 1)取人参皂巧Ro,加水溶解，用碱调节抑为8-13. 8,在温度60-8(TC的条件下进 行
[0011] 水解反应30-60min，反应结束后，冷却，抑值调节至7,得水解液；
[0012] 2)水解液过处理好的大孔吸附树脂柱，优选AB-8、DlOl、Cleanert-PS树脂，最优 选Cleanert-PS树脂，流速约0. 5-1.OmL?min-i，弃去流出液，待水解液流至树脂层液面时， 用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用醇洗脱，优选甲醇或己醇，最优选 甲醇，收集醇洗脱液；
[0013] 3 )将醇洗脱液和硅胶拌样，挥干醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水 =75-55:25-45:10,优选65 ;35 ;10的下层液进行洗脱，分段收集样品，层析法检测，将含相 同物质的样品进行合并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状H走皂巧Ri 洗脱液，浓缩干燥即得姜状H走皂巧Ri。
[0014] 其中步骤1所述的碱是指甘氨酸-氨氧化轴缓冲溶液，测砂-氨氧化轴缓冲液，碳 酸轴-碳酸氨轴缓冲液，碳酸轴-氨氧化轴，磯酸氨二轴-氨氧化轴，氯化钟-氨氧化轴缓 冲溶液或氨氧化轴缓冲溶液中的一种。优选磯酸氨二轴-氨氧化轴或氯化钟-氨氧化轴缓 冲溶液调节PH至12-13。
[0015] 最优选用磯酸氨二轴-氨氧化轴调节K1至12或用氯化钟-氨氧化轴缓冲溶液调 节PH至13 ;
[0016] 本发明优选的姜状H走皂巧Ri制备方法，步骤如下：
[0017] 1)取30mg人参皂巧Ro,加入水溶解，磯酸氨二轴-氨氧化轴或氯化钟-氨氧化轴 缓冲溶液调节PH至12-13,温度为7(TC，揽拌水解45min，冷却，pH值调节至7,得到水解液； [001引 2 )水解液过处理好的C1eanert-PS商品树脂柱（内径1cm,树脂床高约2cm; 300ym，使用前用甲醇进行处理，再用水冲洗至无甲醇)，流速约1. 0血?mirTi，弃去流出液， 待流至树脂层液面时，用水冲洗，洗至流出液不能发生Molish反应为止，然后用甲醇洗脱， 收集甲醇洗脱液。
[0019] 3)将甲醇洗脱液和硅胶拌样，挥干甲醇，干法上正相硅胶柱，用氯仿：甲醇：水 =65 ;35 ;10 (下层）进行洗脱，每4mL收集一次样品，点薄层板，将含相同物质的样品进行合 并，将各洗脱液进行质谱检测，分子量为794的物质为姜状H走皂巧Ri洗脱液，经过浓缩干 燥得到18mg姜状H走皂巧Ri。
[0020] 本申请姜状H走皂巧Ri收率能够达到72%左右。
[0021] 本发明的方法是在研究人参皂巧Ro水解过程中获得的，该研究过程如下：
[0022] 1、仪器与试剂
[0023] 人参皂巧Ro对照品(天津马克生物科技有限公司，纯度为99%，批号；201310912); 氯仿为分析纯，甲醇、己膳为色谱纯(德国Merck公司），磯酸为色谱纯(天津市光复精细化工 研究所)，超纯水为实验室自制；Waterse2695高效液相色谱仪，Waters2489紫外检测器， 岛津U化C-IT-T0F，化址er400M核磁共振仪，Milli-Q超纯水系统(美国Millipore公司）， XS105梅特勒精密电子分析天平(上海梅特勒-巧利多仪器上海有限公司）。
[0024] 2、方法与结果
[0025] 2. 1人参皂巧Ro水解产物测定
[0026] 2. 1. 1 色谱检测条件WatersSymmetiTCi8 柱（4. 6mmX250mm, 5ym);流动相：己 膳-0. 05%磯酸，梯度洗脱程序；0~20min，30%己膳~70%己膳；流速；1血/min;检测波长： 203皿；柱温；3(TC;进样量；10yL。人参皂巧Ro水解结果见图1。
[0027] 2. 1. 2工作曲线的绘制取人参皂巧Ro对照品适量，配制成质量浓度为 0. 60mg?m。的储备液，分别稀释5、10、20、40、80、160倍，分别吸取上述不同质量浓度的人 参皂巧Ro对照品10yL进样，测定其峰面积。W人参皂巧Ro的进样质量为横坐标（X)，色 谱峰的峰面积（Y)为纵坐标，进行线性回归，得工作曲线方程Y= 3346 554X+ 174 456,（r =0