Grk4变异体和收缩压变化与尿钠排泄率比值的联合应用及方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于诊断领域，具体设及检测GRK4变异体和收缩压变化与尿钢排泄率比 值的试剂联合制备诊断盐敏感性试剂中的应用及方法。
【背景技术】
[0002] 盐是最重要的环境因素之一，但个体对盐负荷或限盐有着不同的血压反应，根据 个体对高盐摄入的血压反应及滞钢程度将其分为盐敏感性、盐不敏感性两大类。敏感者在 正常人群中的检出率从15%~42%不等；盐敏感性个体日后发生高血压的比例明显高于 非盐敏感性个体，其发生冠屯、病、脑卒中的几率也大大增加。另外，在高血压病人中，盐敏感 与否直接影响治疗方案的选择，如利尿剂和巧括抗药是治疗盐敏感性高血压的首选药物； 盐不敏感性高血压属于钢-容量非依赖性高血压，血浆肾素活性正常或升高，利尿剂对该 类高血压患者往往无效。因此，盐敏感性人群的检出不仅对于个体的一级预防，对于发生高 血压、冠屯、病和脑卒中的个体治疗也有一定的指导意义。
[0003] 既往检测盐敏感性的方法很多，急性、慢性盐负荷法，但该些研究过于复杂，费时 临床开展困难，实用性不高。另外，既往提出的盐敏感性标志物也较多，包括：血浆肾素、醒 固酬、血清结合珠蛋白、内源性洋地黄物质、红细胞膜钢-裡反转运速率、尿血管舒缓素、尿 多己/多己胺排泄比率、膜岛素抵抗等，但该些方法在盐敏感性、盐不敏感性患者中存在较 大的重叠，难于成为理想的盐敏感性标志物。因此，急需寻找新的盐敏感性标志物。
[0004] 肾脏是人体负责钢排泄的重要器官，肾脏的利尿、利钢作用受到肾脏自分泌多己 胺的控制。既往的研究发现盐敏感性高血压病人和动物肾脏尿钢排泄功能障碍，多己胺受 体介导的利尿作用下降。由于多己胺受体功能受到GRK4的调节，GRK4在人体存在A142V、 A486V、R6化等变异体，该些变异体存在提高了G服4的活性，导致多己胺受体功能下降。而 GRK4是否可作为盐敏感鉴定指标未见报道。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明的目的之一在于提供检测G服4变异体和收缩压变化与尿钢排 泄率比值的试剂联合制备诊断盐敏感性试剂中的应用；本发明的目的之二在于提供W收缩 压变化与尿钢排泄率比值联合GRK4变异体为标志物诊断盐敏感性的方法。
[0006] 为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
[0007] 1、检测G服4变异体和收缩压变化与尿钢排泄率比值的试剂联合制备诊断盐敏感 性试剂中的应用。
[000引 2、G服4变异体和收缩压变化与尿钢排泄率比值联合诊断盐敏感性的方法，包括如 下步骤：
[0009]a.测定收缩压变化与尿钢排泄率比值ASBP/UNa+;让受试者30分钟内口服生理 盐水1500mU然后测定口服生理盐水前后收缩压变化，记为ASBP;同时测定受试者的尿钢 排泄率，记为UNa+，然后用ASBP除WUNa+计算收缩压变化与尿钢排泄率比值ASBP/UNa+;
[0010] b.G服4的变异体检测：提取受试者基因组DM,然后wSEQIDNO. 1和SEQID NO. 2所示序列为引物进行PCR扩增，PCR产物进行电泳判断G服4是否为变异体；
[0011] C.根据步骤a计算的收缩压变化与尿钢排泄率比值ASBP/UNa+和步骤b检测的 GRK4是否为变异体判断受试者为的盐敏感性。
[001引优选的，步骤b中，所述PCR扩增的条件如下，95°C预变性5min;95°C变性45s， 65°C退火40s，72°C延伸45s，35个循环，最后72°C延伸5min。
[0013] 优选的，步骤c中，判断盐敏感性的判定标准为：
[0014]ASBP/UNa+> 9.38mmHg?min/ y mol,G服4 为变异体判断为盐敏感性；
[0015]ASBP/UNa+在 4. 41-9.38mmHg?min/ y mol,G服4 为变异体判断为盐敏感性；
[0016]ASBP/UNa+《4. 41mmHg?min/ y mol,G服4为野生型判断为非盐敏感性；
[0017]ASBP/UNa+在4. 41-9. 38mmHg?min/ymol,G服4为野生型判断为非盐敏感性； [001引ASBP/UNa> 9. 38mmHg?min/ymol,G服4为野生型判断为中间型；
[0019]ASBP/UNa+《4. 41mmHg?min/ymol，G服4为变异体判断为中间型。
[0020] 本发明的有益效果在于：本发明公开了联合尿钢排泄和G服4变异体做为诊断 盐敏感性的新指标，通过实验证明，利用急性口服盐水负荷前后收缩压变化（ASB巧 与尿钢排泄率扣rinarysodiumexcretion(UNa+))之比可W初步用于鉴定盐敏感 性及非盐敏感性，ASBP/UNa+ > 9. 38mmHg?min/ymo考虑可能为盐敏感性患者， ASBP/UNa+《4. 41mmHg?min/ymol考虑可能为非盐敏感性患者，ASBP/UNa+在 4. 41-9. 38mmHg'min/ymol为中间型。进一步结合G服4的变异体存在与否作为指标，其诊 断价值达94%，敏感性到83%，特异性100%，该发明不仅仅拓宽了诊断盐敏感性的思路及 方法，同时也为更好地预防和进一步有效治疗盐敏感性相关性疾病提供了新的依据。并且 利用该方法诊断盐敏感性快速、有效，患者依从性更好，较静脉盐水负荷法诊断盐敏感性更 佳，具有重要的临床意义。
【附图说明】
[0021] 为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图：
[0022] 图1为G服4基因A142V变异体电泳结果。
[0023] 图2为G服4基因A142V变异体测序结果。
[0024]图3为判断盐敏感性的标准。
【具体实施方式】
[0025] 下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体 条件的实验方法或按照制造厂商所建议的条件。
[0026] 实验对象；选择口诊确诊的原发性高血压患者，排除继发性高血压、合并严重糖尿 病、合并肝肾功能不全、不能耐受检查者，剩余患者作为研究对象，共856名；然后对入选的 研究对象测量屯、率、血压、身高、体重，并计算体重指数炬MI)=体重kg/身高m2;再抽取清 晨空腹血，检测血脂（甘油=醋，胆固醇）、空腹血糖，肌酢指标；询问饮酒史、吸烟史，高血 压病史及服用降压药物情况。
[0027]传统判定盐敏感方法采用Weinberger法（参考文献见WeinbergerMH， MillerJZ，LuftFC，GrimCE，FinebergNS.Definitionsandcharacteristicsof sodiumsensitivityandbloodpressureresistance.Hypertension. 1986 ;8(suppl