子发酵罐至二级种子发酵罐移种管道进行灭菌操作；
[0087] e)检查移种管道是否有渗漏，固定螺丝是否拧紧，管道球阀是否渗漏；
[0088] f)检查移种管道与种子罐、发酵罐相连处阀门是否关闭，没有关闭的立即关闭；
[0089] g)调整罐内压力，调高一级种子发酵罐压力，调低二级种子发酵罐压力，使得两者 压差在0. 05到0. 1之间；
[0090] h)将一、二级种子发酵罐移种相关的阀门打开，并关闭或切断与之无关的阀门；
[0091] i)通过二级种子发酵罐上的视窗观测移种是否完成，完成后关闭移种管道的移种 阀，调整罐压到工艺要求值；
[0092] j)移种结束后，用蒸汽再次进行一级至二级消毒移种管道；
[0093] k)移种结束后，二级种子发酵罐内温度保持32±2°C、罐压保持0.05±0.01Mpa、 通气量5±0. 5m3/h，搅拌转速70±2Rap;
[0094] L)培养3小时后，调节二级种子发酵罐通气量至7±0. 5m3/h ;
[0095]m)培养6小时后，调节二级种子发酵罐的搅拌转速80±2Rap;
[0096]n)维持一级种子发酵罐温度保持32±2°C、罐压保持0. 05±0. 0IMpa、通气量 7±0. 5m3/h;搅拌转速80±2Rap直至培养24小时。
[0097]6)将一级种子发酵罐内培养足够24小时的酵母菌培养液以7%~8%的移种量移 种至二级种子发酵罐内；
[0098]7)配制酵母菌三级发酵罐所用的YH)培养基2100L;
[0099] 8)对三级发酵罐进行移种量移种处理；具体步骤是：
[0100] a)对三级空气过滤器进行消毒操作；
[0101] b)对三级发酵罐进行空消操作；
[0102] c)对三级发酵罐进行实消操作；
[0103] d)对二级种子发酵罐至三级发酵罐移种管道进行灭菌操作；
[0104] e)检查移种管道是否有渗漏，固定螺丝是否拧紧，管道球阀是否渗漏；检查移种 管道与种子罐、发酵罐相连处阀门是否关闭，没有关闭的立即关闭；
[0105] f)调整罐内压力，调高二级种子发酵罐压力，调低三级发酵罐压力，使得两者压差 在0. 05到0. 1之间；
[0106] g)将二、三级种子发酵罐移种相关的阀门打开，并关闭或切断与之无关的阀门；
[0107] h)通过三级发酵罐上的视窗观测移种是否完成，完成后关闭移种管道的移种阀， 调整罐压到工艺要求值；
[0108] i)移种结束后，用蒸汽再次二级至三级消毒三级发酵罐内的移种管道。
[0109] j)移种结束后，三级发酵罐内温度保持32±2°C、罐压保持0.05±0.01Mpa、通气 量 30 ± 2m3/h，搅拌转速 55 ± 2Rap;
[0110] k)培养2小时后，调节三级发酵罐的通气量至50±2m3/h、调节搅拌转速 60±2Rap ;
[0111] L)维持二级种子发酵罐温度保持32±2°C、罐压保持0. 05±0.0 IMpa、通气量 7±0. 5m3/h ;搅拌转速80±2Rap直至培养10~16小时。
[0112] 9)将二级种子发酵罐内培养足够24小时的酵母菌培养液以9%~10%的移种量 移种至三级发酵罐内；
[0113] 10)实时监测三级发酵罐内酵母菌培养过程中溶氧、温度、pH值的参数，根据菌种 生长和泡沫情况，调节通气量、转速；
[0114] 11)结合实验室各项检测，培养过程出现酵母菌浓度下降，则结束培养，对三级发 酵罐进行4°C冷却操作；
[0115] 12)待三级发酵罐温度冷却至15°C以下，对发酵罐内酵母菌悬浊液进行固液分离 操作；
[0116] 13)对固体菌种进行称重、配比；
[0117] 14)喷施烟丝。
[0118] 采用老技术时每批次使用原料：
【主权项】
1. 用于卷烟制品烟叶自身微生物菌种醇化的酵母菌培育方法，其特征在于包含下述步 骤： 1) 实验室内制备酵母菌种子液，培养24小时； 2) 配制酵母菌一级种子发酵罐所用的YH)培养基21L; 3) 对一级种子发酵罐进行接种处理； 4) 配制酵母菌二级种子发酵罐所用的YH)培养基210L; 5) 对二级种子发酵罐进行接种处理； 6) 将一级种子发酵罐内培养足够24小时的酵母菌培养液以7 %~8 %的移种量移种至 二级种子发酵罐内； 7) 配制酵母菌三级发酵罐所用的YH)培养基2100L; 8) 对三级发酵罐进行移种量移种处理； 9) 将二级种子发酵罐内培养足够24小时的酵母菌培养液以9%~10%的移种量移种 至三级发酵罐内； 10) 实时监测三级发酵罐内酵母菌培养过程中溶氧、温度、pH值的参数，根据菌种生长 和泡沫情况，调节通气量、转速； 11) 结合实验室各项检测，培养过程出现酵母菌浓度下降，则结束培养，对三级发酵罐 进行4°C冷却操作； 12) 待三级发酵罐温度冷却至15°C以下，对发酵罐内酵母菌悬浊液进行固液分离操 作； 13) 对固体菌种进行称重、配比； 14) 喷施烟丝。
2. 根据权利要求1所述的用于卷烟制品烟叶自身微生物菌种醇化的酵母菌培育方法， 其特征在于：所述对一级种子发酵罐进行接种处理的具体步骤是： 1) 对一级空气过滤器进行消毒操作； 2) 对一级种子发酵罐进行空消操作； 3) 对一级种子发酵罐进行实消操作； 4) 采用火焰封口接种； 5) 接种结束后，一级种子发酵罐内温度保持32±2°C、罐压保持0. 05±0.OIMpa、通气 量 10 ±lL/min，搅拌转速 90 ± 2Rap; 6) 培养5小时后，调节一级种子发酵罐的通气量至15±lL/min; 7) 培养8小时后，调节一级种子发酵罐的搅拌转速100±2Rap; 8) 维持一级种子发酵罐温度保持32±2°C、罐压保持0. 05±0.OIMpa、通气量15±IL/ min，搅拌转速100±2Rap直至培养24小时。
3. 根据权利要求1所述的用于卷烟制品烟叶自身微生物菌种醇化的酵母菌培育方法， 其特征在于：所述对二级种子发酵罐进行接种处理的具体步骤是： 1、）对二级空气过滤器进行消毒操作； 2) 对二级种子发酵罐进行空消操作； 3) 对二级种子发酵罐进行实消操作； 4) 对一级种子发酵罐至二级种子发酵罐移种管道进行灭菌操作； 5) 检查移种管道是否有渗漏，固定螺丝是否拧紧，管道球阀是否渗漏； 6) 检查移种管道与种子罐、发酵罐相连处阀门是否关闭，没有关闭的立即关闭； 7) 调整罐内压力，调高一级种子发酵罐压力，调低二级种子发酵罐压力，使得两者压差 在0. 05到0. 1之间； 8) 将一、二级种子发酵罐移种相关的阀门打开，并关闭或切断与之无关的阀门； 9) 通过二级种子发酵罐上的视窗观测移种是否完成，完成后关闭移种管道的移种阀， 调整罐压到工艺要求值； 10) 移种结束后，用蒸汽再次进行一级至二级消毒移种管道； 11) 移种结束后，二级种子发酵罐内温度保持32±2°C、罐压保持0. 05±0.OIMpa、通气 量 5±0. 5m3/h，搅拌转速 70±2Rap; 12) 培养3小时后，调节二级种子发酵罐通气量至7±0. 5m3/h; 13) 培养6小时后，调节二级种子发酵罐的搅拌转速80±2Rap; 14) 维持一级种子发酵罐温度保持32 ± 2 °C、罐压保持0. 05 ± 0.OIMpa、通气量 7±0. 5m3/h;搅拌转速80±2Rap直至培养24小时。
4. 根据权利要求1所述的用于卷烟制品烟叶自身微生物菌种醇化的酵母菌培育方法， 其特征在于：所述对三级发酵罐进行移种量移种处理的具体步骤是： 1) 对三级空气过滤器进行消毒操作； 2) 对三级发酵罐进行空消操作； 3) 对三级发酵罐进行实消操作； 4) 对二级种子发酵罐至三级发酵罐移种管道进行灭菌操作； 5) 检查移种管道是否有渗漏，固定螺丝是否拧紧，管道球阀是否渗漏；检查移种管道 与种子罐、发酵罐相连处阀门是否关闭，没有关闭的立即关闭； 6) 调整罐内压力，调高二级种子发酵罐压力，调低三级发酵罐压力，使得两者压差在 0? 05到0? 1之间； 7) 将二、三级种子发酵罐移种相关的阀门打开，并关闭或切断与之无关的阀门； 8) 通过三级发酵罐上的视窗观测移种是否完成，完成后关闭移种管道的移种阀，调整 罐压到工艺要求值； 9) 移种结束后，用蒸汽再次二级至三级消毒三级发酵罐内的移种管道。 10) 移种结束后，三级发酵罐内温度保持32±2°C、罐压保持0. 05±0.OIMpa、通气量 30±2m3/h，搅拌转速 55±2Rap; 11) 培养2小时后，调节三级发酵罐的通气量至50±2m3/h、调节搅拌转速60±2Rap; 12) 维持二级种子发酵罐温度保持32±2 °C、罐压保持0. 05±0.OIMpa、通气量 7±0. 5m3/h;搅拌转速80±2Rap直至培养10~16小时。
5. 根据权利要求2所述的用于卷烟制品烟叶自身微生物菌种醇化的酵母菌培育方法， 其特征在于：所述采用火焰封口接种的具体步骤是： 1) 调整一级种子发酵罐的罐压在0.005~0.OlMpa之间，并用酒精清洁接种口四周； 2) 将接种环点燃，套在接种口，用扳手拧开接种口，并将接种口盖置于充满酒精的培养 皿中； 3) 将菌种瓶在火焰上方打开，瓶口在火焰上烧5s，以2%的接种量迅速将酵母菌种子 液倒入罐内； 4)将接种口盖在火焰上灭菌后拧紧。
【专利摘要】提供一种用于卷烟制品烟叶自身微生物菌种醇化的酵母菌培育方法，采用菌种扩大培养，使小小的微生物细胞在几十个小时内完成巨大的数量累计，以2％～10％体积接入发酵罐，经过一级种子、二级种子发酵阶段，再经过三级发酵、超高转速离心，最终得到所需的菌种。本发明通过优化酵母菌空气流量生长条件，提高了酵母菌产量，降低了原料、能源消耗，具有很高的实用价值。
【IPC分类】C12N1-16, A24B15-20
【公开号】CN104789485
【申请号】CN201510234201
【发明人】严雍, 赵宗儒, 陈培荣, 李翛, 柳婧雯, 徐旭, 高凌, 班峥嵘, 赵青, 侯晓辉, 韩明, 姚刚
【申请人】陕西中烟工业有限责任公司宝鸡卷烟厂
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年5月11日