一种抗菌肽pjf11及其在抑制种植体周围炎细菌中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种抗菌肽PJF11及其在抑制种植体周 围炎细菌中的应用。
【背景技术】
[0002] 种植义齿具有良好的稳定性和较高的长期成功率，然而随着接受种牙治疗患者数 量的增加，种植体周围炎发生比率也迅速增长。预防种植体周围炎的关键是感染控制，除了 医师在操作过程中严格无菌操作、教会患者保持口腔卫生外，更加重要的是在炎症发生前 或有轻度炎症表现时即以抗菌药物进行预防治疗。这一点在同时有慢性牙周炎病史的患者 中尤为重要，研宄显示，患有牙周炎的患者在接受种植治疗后，发生种植体周围炎的概率明 显高于无慢性牙周炎病史的患者。
[0003] 具核梭杆菌为革兰阴性梭杆菌，专性厌氧，最适生长温度37°C，常见于各类口腔 慢性感染，同时是种植体周围炎和慢性牙周炎的重要致病菌之一，能够作用于专性抗厌氧 菌的抗生素甲硝唑，使其分解产生乙酰胺从而失去抗菌作用，对另一种重要的致病菌牙龈 卟啉单胞菌产生保护作用。金黄色葡萄球菌是革兰阳性需氧球菌，常见于各种口腔术后急 性感染，如拔牙术后，牙周手术后等，同样也见于种植体周围炎。虽然目前关于其与种植体 周围炎的直接致病作用相关的研宄报道较少，但值得注意的是，在种植体周围炎的患者中 经常能检测到金黄色葡萄球菌。另外，金黄色葡萄球菌具有较强的成膜作用，可在钛表面形 成生物膜，为其他致病菌提供保护作用，协同致病。临床上其他金属材料相关感染中也经常 会检测到金黄色葡萄球菌的存在。另外，研宄显示金黄色葡萄球菌可以侵害成骨细胞，影响 成骨过程。
[0004] 目前国内常用于种植体周围炎防治的局部药物有米洛环素软膏(商品名派丽 奥)、氯己定漱口水等。这些药物作用明确，具备杀菌和抑菌能力，在临床得到长期而广泛的 运用。但自上世纪八十年代以来，抗生素发生细菌耐药性后，耐药菌种类逐年增加，学者们 不得不开发更强效的抗菌药物。0 -内酰胺类抗生素(头孢类药物)，已由最早的第一代药 物发展到第四代，抑菌性不断增强，抗菌谱不断拓宽，即便如此，临床上对四代头孢的耐受 性报道并不少见。回顾抗生素发展历史，医学工作者开发一种新药的平均年限约为十年，而 耐药性细菌产生不过两年，这就使得临床药物开发必然落后于耐药性细菌产生。而导致这 些情况发生的原因是抗生素的滥用和抗生素本身的限制。
[0005] 在这样的大背景下，随着耐药性细菌逐年增加，也为口腔科抗生素用药带来警示。 基于此，近二十余年来，围绕着多肽生物活性物质抗菌肽的研宄，得到了广泛开展，希望以 此取代部分抗生素的使用。
[0006] 抗菌肽是一类碱性多肽活性物质，天然抗菌肽分子量达数千，一般由12到50个氨 基酸残基组成。经过学者的大量研宄，发现这种多肽具有良好的热稳定性、广谱的抗菌活 性及不易引发细菌耐药性的优点，其研发在世界范围内掀起了热潮。目前已有数种药物如 Enfuvirtide、PG-1等进入到临床三期实验阶段，已经上市的药物有Daptomycin。
[0007] 然而，抗菌肽在临床应用上的进展却并不显著，这些归因于抗菌肽在应用方面存 在着一些亟需克服的问题。抗菌肽应用最大的难题首先是合成工艺复杂，合成费用昂贵；然 后，相当一部分抗菌肽的细胞毒性还未控制在安全范围内。随着序列长度的增加，氨基酸种 类的不同，上述问题会更加明显。现有文献报道的SMAP29、LL-37及HBD2、HBD3、Cecropin B等均显示具有很强的抑菌作用，但同时这些抗菌肽的肽链长，合成难度大、合成费用高，也 表现了不同程度的细胞毒性。有市场调查显示抗菌肽的生产成本只有能够达到小于10美 元/克，才有望广泛应用于临床。从远期应用的角度来看，不仅要找到有效的多肽，也要开 发出性价比更高的多肽。
【发明内容】
[0008] 本发明针对现有技术的不足，提供了一种肽链短、合成工艺简单、安全无毒的抗菌 肽。
[0009] 本发明的另一目的是提供上述抗菌肽的应用。
[0010] 本发明的上述目的是通过以下技术方案予以实现的。
[0011] 一种抗菌肽PJF11，其氨基酸序列如SEQIDNO: 1所示，并且在其肽链的一端连接 有醋酸根，另一端连接有氣基。
[0012] 本发明所提供的一种新的抗菌肽PJF11肽链短，利用常规方法即可合成，生产成 本低，对种植体周围炎细菌具有显著的抑菌活性，且具有较低的溶血性，对人体安全无毒， 可有效应用于抑制种植体周围炎细菌对口腔的感染，特别是针对具核梭杆菌、金黄色葡萄 球菌的感染。
[0013] 本发明还提供上述的抗菌肽PJF11在抑制种植体周围炎细菌中的应用。
[0014] 本发明还提供上述的抗菌肽PJF11在种植体抗菌涂层中的应用。
[0015] 本发明还提供上述的抗菌肽PJF11在抑制具核梭杆菌中的应用。具核梭杆菌是一 种厌氧菌，常见于感染种植体周围炎的组织，是优势菌种之一。
[0016] 优选地，所述抗菌肽PJF11对具核梭杆菌的最低抑菌浓度为25yg/ml。
[0017] 优选地，所述抗菌肽PJF11对具核梭杆菌的最低杀菌浓度为25yg/ml。
[0018] 本发明还提供上述的抗菌肽PJF11在抑制金黄色葡萄球菌中的应用。金黄色葡萄 球菌也常在感染种植体周围炎的组织中分离出来，虽然它与种植体周围炎直接致病作用相 关性较少，但与金属材料的感染相关性高，并常见于院内交叉感染，金黄色葡萄球菌可参与 钛金属表面生物膜的形成，为其他致病菌提供屏障保护作用，引起继发感染。
[0019] 优选地，所述抗菌肽PJF11对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为25yg/ml。
[0020] 优选地，所述抗菌肽PJF11对金黄色葡萄球菌的最低杀菌浓度为50yg/ml。
[0021] 与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明发现抗菌肽PJF11对种植体周 围炎细菌具有显著的抑菌活性，且对人体安全无毒，同时PJF11具有肽链短、合成简单、成 本低等特性，可有效应用于抑制种植体周围炎细菌对口腔的感染，特别是针对具核梭杆菌、 金黄色葡萄球菌的感染。
【附图说明】
[0022] 图1为抗菌肽PJF11对金黄色葡萄球菌的抑菌曲线。
[0023] 图2为纸片扩散法测定的抑菌结果；1-4号为含肽PJF11分别为80yg、40yg、 20yg、10yg的纸片；5号为阳性对照组；6号为阴性对照组。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合说明书附图和具体实施例对本发明做进一步详细说明，但实施例并不对 本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常 规试剂、方法和设备。
[0025] 本发明实施例将具核梭杆菌和金黄色葡萄球菌作为代表性细菌进行研宄，所得实 验结果可在一定程度上反映临床的实际情况。
[0026] 本发明实施例选用的菌种来源于广东省微生物菌种保藏中心，具核梭杆菌 ATCC10953,金黄色葡萄球菌ATCC6538。
[0027] 实施例1 发明人设计了一种抗菌肽PJF11，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，并且在其肽链的 一端连接有醋酸根，另一端连接有氨基。该抗菌肽PJF11由浙江Ontores Biotechnologies 公司合成。
[0028] 本实施例研宄了抗菌肽PJF11对种植体周围炎细菌具核梭杆菌和金黄色葡萄球 菌的最低抑菌浓度（MIC)。
[0029] 实验方法：取对数生长期的细菌悬液调节菌浓度至约lX106cfU/ml，取抗菌肽 PJF11干粉用相应的肉汤稀释配制成浓度呈2倍递减的400. 0、200. 0、100. 0、50. 0、25. 0、 12. 5、6. 2yg/ml的系列浓度，将抗菌肽溶液与等量菌悬液混匀后得到终浓度为200. 0、 100.0、50.0、25.0、12