一种使用吸附树脂获得葡萄籽提取物的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物提取和保健食品领域，特别涉及一种利用大孔吸附树脂从葡萄籽中提取纯化原花青素的工艺。
【背景技术】
[0002]葡萄籽中含有大量的多酚类物质，我们经常所说的葡萄籽提取物一般为原花青素类多酚，原花青素是由单体黄烷-3-醇以不同聚合度连接而成的多酚类化合物，它是目前自然界中发现的抗氧化、清除自由基能力最强的物质，是一种天然的抗氧化剂。
[0003]葡萄籽原花青素提取物中含有很多杂质，诸如多糖、大分子蛋白、脂质等，需对其进行进一步纯化才能得到较高纯度的原花青素，而常用的纯化方法有溶剂萃取、膜过滤及大孔树脂吸附法等。大孔吸附树脂是一种具有较大比表面积、交换速度较快、选择性高、机械强度好、抗污染能力强、热稳定好等特点的高分子聚合物。当前市场上可用于分离纯化葡萄籽原花青素的大孔树脂品种繁多，且分离纯化的效果也不尽相同，中国专利申请CN1603320公开了一种高含量原花青素的制备方法，该方法首先对葡萄籽进行提取，后使用大孔吸附树脂进行提纯，最后还需使用乙酸乙酯和石油醚进行后处理使其原花青素含量达到95%以上，但其后处理还需经乙酸乙酯和石油醚的沉淀处理，经离心干燥进行分离，由于原花青素多为食品药品级别产品，该后处理方法容易在最后一步残留有机溶剂以成品中，所以工业化存在一定的隐患；中国专利申请CN1506362公开了一种使用树脂法提取葡萄籽原花青素的方法，该方法提供了一种使用大孔吸附树脂DlOl或D201提取原花青素含量在38% _90%，其提取含量最高仅能达到90%，且该方法中所提及的葡萄籽粉碎成粉末后的浸提方法虽然能一定程度的提高葡萄籽的提取率，但其同样会增加杂质的含量，粉碎后的葡萄籽在提取时蛋白质、糖类等杂质更容易溶出而难于除去。其次当前市售原花青素95%含量的产品最为普遍，更高含量的产品还有98%以上，葡萄籽原花青素产品作为一种保健类产品被人们所认可，此外就是食品添加剂中大量使用的抗氧化剂和医疗产品中使用，所以对其含量的要求也越来越严格。当前高含量葡萄籽原花青素产品的提取方法无一能避开对有机溶剂的使用。
【发明内容】
[0004]本发明从当前大孔吸附树脂在葡萄籽原花青素提取应用现状出发，结合大孔吸附树脂和层析树脂的优点将其搭配使用，对杂质较多的提取液进行两步纯化达到高纯度的成品要求。
[0005]一种使用吸附树脂获得葡萄籽提取物的方法，其工艺流程依次为:树脂预处理，葡萄籽提取液的制备，葡萄籽提取液的纯化；所述的葡萄籽提取液的纯化包括大孔树脂的纯化和层析树脂的纯化。
[0006]上述的树脂预处理的流程工艺:分别取一定质量或体积的树脂装入树脂柱或层析柱设备，并进行如下预处理:以0.5BV的无水乙醇浸泡树脂24h (1BV为I个树脂床体积)；用IBV的无水乙醇以lBV/h的流速通过树脂柱，再用2BV的去离子水洗至滴出液加水不呈白色浑浊为止；用4wt%? 6wt%的NaOH溶液IBV以lBV/h的流速通洗树脂，后用约2BV的去离子水洗至PH小于9 ;用4wt%? 6wt%的HCl溶液IBV以lBV/h的流速通洗树脂，后用约2BV的去离子水洗至pH大于4。
[0007]上述的葡萄籽提取液的制备工艺为:取大孔吸附树脂柱质量I?20倍的葡萄籽，加入树脂体积5?30倍的去离子水和加水质量0.01 %?0.20%的酸溶液，于85°C水浴中提取60?120min，过滤得提取液，滤渣按照上述过程重复提取O?5次，合并提取液；将提取液在离心机4000r/min下离心5min?lOmin，得到的离心液过孔径I?3 μπι的慢速滤纸，滤液则为树脂的上柱液。
[0008]优选的，葡萄籽提取液的制备工艺为:取大孔吸附树脂柱质量5倍的葡萄籽，加入树脂体积10倍的去离子水和水体积0.04%的酸溶液，于85°C水浴中提取90?lOOmin，过滤得提取液，滤渣按照上述过程重复提取两次，合并提取液；将提取液在离心机4000r/min下离心5min?lOmin，得到的离心液过孔径I?3 μ m的慢速滤纸，滤液则为树脂的上柱液。
[0009]上述的大孔树脂的纯化工艺及主要参数为:吸附:在室温下，pH3?4，上柱液通过大孔吸附树脂，流速1.5BV/h ;水洗:通约2?3BV的去离子水洗，流速1.5BV/h ;解析:通3BV的55wt%乙醇溶液树脂柱进行解析，流速0.6?0.9BV/h ;后处理:收集0.5BV?3.0BV的解析液，减压蒸馏，回收乙醇溶液，得到浓缩液A。
[0010]上述的层析树脂的纯化工艺及主要参数为:稀释:对浓缩液A以去离子水稀释二倍，得到上柱液B ;吸附:在室温下，通过层析树脂，流速1.0BV/h ;水洗:通约I?2BV的去离子水洗，流速 1.0BV/h ;解析:各用 0.5 ?IBV 的 1Vol % ,30Vol % ,50 % Vol 和 70Vol%浓度的乙醇溶液对树脂进行解析，流速0.5BV/h ;后处理:收集30Vol%和50Vol%的乙醇解析段，减压蒸馏，真空干燥，获得葡萄籽提取物。
[0011]上述的葡萄籽提取液的制备工艺中酸为冰乙酸，甲酸，有机酸中的一种或几种。
[0012]本发明的有益效果是:通过运用二级纯化的操作可达到高纯度的成品要求，并且全部工艺中尽可能避免原花青素高纯度产品对有机溶剂的依赖这一基本观念，完全通过使用树脂对提取液进行纯化，避免有机溶剂的使用而产生残留，提出一种原花青素提取高纯度的绿色环保方法，并且贴近实际生产。
【具体实施方式】
[0013]实施例1
[0014]本实施例为一种使用吸附树脂获得葡萄籽提取物的方法，其工艺流程依次为:树脂预处理，葡萄籽提取液的制备，葡萄籽提取液的纯化；所述的葡萄籽提取液的纯化包括大孔树脂的纯化和层析树脂的纯化。
[0015]上述葡萄籽提取液的制备工艺为:装入60mL重45g大孔吸附树脂，称取3倍质量的干燥葡萄籽135g，加入600mL去离子水、0.27g的99.5wt%冰乙酸，稍作搅拌后以85°C水浴中提取90分钟，提取完毕将提取料液过滤后葡萄籽再重复以上步骤提取三次，合并提取液，通过离心机4000r/min下离心8min，离心液过孔径I?3 μπι的慢速滤纸得到最终提取液，提取率为4.3 %，调pH至3.63。
[0016]上述大孔吸附树脂的纯化工艺:
[0017]a.吸附:树脂柱装入60mL的860021大孔吸附树脂，经过预处理后，在室温下，将提取液以流速1.5BV/h通过大孔吸附树脂；
[0018]b.水洗:加入2BV的去离子水洗，流速1.5BV/h，滴出液澄清；
[0019]c.解析:3BV的55%乙醇溶液，以0.8BV/h的流速通过树脂柱进行解析；
[0020]d.后处理:收集解析出口 0.5BV?3.0BV的解析液，将解析液进行减压蒸馏，回收其中的乙醇溶液，得到105mL浓缩液A。
[0021]取样检测经过大孔吸附树脂纯化后的葡萄籽提取液中原花青素含量为90.4%，提取率3.72%。
[0022]上述层析树脂的纯化工艺:
[0023]a.稀释:对浓缩液A以去离子水稀释二倍，得到310mL上柱液B ；
[0024]a.吸附:层析树脂XCG-18装柱120mL，经过预处理后，在室温下，将稀释液以流速
1.0BV/h通过层析树脂；
[0025]b.水洗:通约IBV的去离子水洗，流速1.0BV/h ；
[0026]c.解析:各用0.5BV的10Vol%、30Vol%、50Vol%和70Vol %浓度的乙醇溶液对树脂进行解析，以0.5BV/h的流速通过树脂柱进行解析；
[0027]d.后处理:收集30Vol %和50Vol %的乙醇解析段，进行减压蒸馏得到60mL浓缩液，真空干燥，获得葡萄籽提取物。
[0028]一个周期结束对树脂进行水洗，加约2BV去离子水将树脂洗至滴出液基本无醇的味道即可。经过两步纯化后葡萄籽提取液中原花青素含量为98.6%，提取率为1.22%。
[0029]实施例2
[0030]本实施例为实施例1的一种可行方案，其工艺流程依次为:树脂预处理，葡萄籽提取液的制备，葡萄籽提取液的纯化；所述的葡萄籽提取液的纯化包括大孔树脂的纯化和层析树脂的纯