抗eLtaS蛋白的人源化抗体与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医学领域中抗eLtaS蛋白的人源化抗体与应用。
【背景技术】
[0002] 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)属葡萄球菌属，是人类的一种重要 病原菌，能够引起肺炎、心内膜炎、烧伤及战伤感染、败血症、中毒性休克等多种严重感染 (Lowy FD. New Engl J Med. 1998 ;339, 520-532)，它是革兰氏阳性菌脓毒血症的主要致病 菌，也是烧伤创面感染、急性肝衰竭的重要病原菌（姚咏明等，脓毒症研宄的若干新动态 2000 ;13, 517-519)。其能够在人群密集的区域通过飞沫、接触进行大规模传播。更为严 重的是，金黄色葡萄球菌耐药性不断增强，如1961年发现的对β -内酰胺类抗生素耐药的 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA)，2002年10月又发现了耐万古霉素的金黄色葡萄球菌 (VRSA)。2007年10月，Klevens R M等调查表明美国2005年感染MRSA的人数超过9万 人，感染MRSA的病人死亡率为19. 8 %，死亡人数超过HIV感染的死亡人数（Klevens RM，et al. JAMA. 2007 ;298:1763-1771)。今天细菌耐药性的出现正在逆转过去80年抗生素创造的 奇迹，许多细菌感染的治疗药物选择变得日益有限和昂贵，某些情况下甚至根本无药可用， 抵抗细菌感染亟需新的更有效的治疗策略。
[0003] LtaS(Lipoteichoic acid synthase, LTA合成酶）是金黄色葡萄球菌的细胞膜 蛋白之一，全长646aa，N端位于胞内，C端位于胞外，有5个跨膜区，其功能区位于胞外，与 金黄色葡萄球菌细胞壁主要成分LTA(Lipoteichoic acid)的合成密切相关。I型多肽酶 SpsB可以水解全长LtaS并将其胞外区eLtaS(218_646aa)释放于细菌生长上清中。申请 人在实验过程中证实在小鼠急性腹膜炎模型和肺炎模型中eLtaS可以显著加重金黄色葡 萄球菌对小鼠的感染，从而证实其为金黄色葡萄球菌重要毒力因子之一；进一步还证实针 对eLtaS蛋白的中和性单克隆抗体E4-2可以在小鼠腹膜炎模型和肺炎模型中有效抵抗金 黄色葡萄球菌对小鼠的感染。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是如何预防及治疗金黄色葡萄球菌所致疾病。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了抵抗金黄色葡萄球菌感染的抗eLtaS蛋 白的人源化抗体。
[0006] 本发明所提供的抗eLtaS蛋白的人源化抗体，名称为EA4-2,由重链和轻链组成， 所述重链和所述轻链均由可变区和恒定区组成；所述重链和所述轻链的恒定区均来自于 人；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No. 1的第1-116位氨基酸所示；所述 轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No. 2的第1-111位氨基酸所示。
[0007] 上述抗体中，所述重链的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No. 1所示。
[0008] 上述抗体中，所述轻链的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No. 2所示。
[0009] 其中，SEQ ID No. 1的第1-116位氨基酸为EA4-2的重链可变区序列，SEQ ID No. 1 的第117-446位氨基酸为EA4-2的重链恒定区序列。SEQ ID No. 2的第1-111位氨基酸为 EA4-2的轻链可变区序列，SEQ ID No. 2的第112-218位氨基酸为EA4-2的轻链恒定区序 列。
[0010] 上述抗体中，所述重链的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No. 3所示。
[0011] 上述抗体中，所述轻链的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No. 4所示。
[0012] 上述抗体中，本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化 和点突变的方法，对本发明的所述重链或所述轻链的核苷酸序列进行突变。那些经过人工 修饰的，编码所述重链或所述轻链的核苷酸序列，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等 同于本发明的序列。
[0013] 为解决上述技术问题，本发明还提供了与所述EA4-2相关的生物材料。
[0014] 本发明所提供的与所述EA4-2相关的生物材料，为M或N :
[0015] M、下述El)至E40)中的任一种：
[0016] El)由编码所述重链的核酸分子和编码所述轻链的核酸分子组成的组合物；
[0017] E2)含有El)所述组合物的表达盒；
[0018] E3)表达盒组合物，由E3a)的表达盒和E3b)的表达盒组成：
[0019] E3a)含有编码所述重链的核酸分子但不含有编码所述轻链的核酸分子的表达 盒；
[0020] E3b)含有编码所述轻链的核酸分子但不含有编码所述重链的核酸分子的表达 盒；
[0021] E4)含有El)所述组合物的重组载体；
[0022] E5)含有E2)所述表达盒的重组载体；
[0023] E6)含有E3)所述表达盒组合物的重组载体；
[0024] E7)重组载体组合物，由E7a)的重组载体和E7b)的重组载体组成：
[0025] E7a)含有编码所述重链的核酸分子但不含有编码所述轻链的核酸分子的重组载 体；
[0026] E7b)含有编码所述轻链的核酸分子但不含有编码所述重链的核酸分子的重组载 体；
[0027] E8)重组载体组合物，由E8a)的重组载体和E8b)的重组载体组成：
[0028] E8a)含有E3a)所述表达盒的重组载体；
[0029] E8b)含有E3b)所述表达盒的重组载体；
[0030] E9)含有El)所述组合物的重组微生物；
[0031] E10)含有E2)所述表达盒的重组微生物；
[0032] El 1)含有E3)所述表达盒组合物的重组微生物；
[0033] E12)含有E4)所述重组载体的重组微生物；
[0034] E13)含有E5)所述重组载体的重组微生物；
[0035] E14)含有E6)所述重组载体的重组微生物；
[0036] E15)含有E7)所述重组载体组合物的重组微生物；
[0037] E16)含有E8)所述重组载体组合物的重组微生物；
[0038] E17)含有El)所述组合物的转基因动物细胞系；
[0039] E18)含有E2)所述表达盒的转基因动物细胞系；
[0040] E19)含有E3)所述表达盒组合物的转基因动物细胞系；
[0041] E20)含有E4)所述重组载体的转基因动物细胞系；
[0042] E21)含有E5)所述重组载体的转基因动物细胞系；
[0043] E22)含有E6)所述重组载体的转基因动物细胞系；
[0044] E23)含有E7)所述重组载体组合物的转基因动物细胞系；
[0045] E24)含有E8)所述重组载体组合物的转基因动物细胞系；
[0046] E25)含有El)所述组合物的转基因动物组织；
[0047] E26)含有E2)所述表达盒的转基因动物组织；
[0048] E27)含有E3)所述表达盒组合物的转基因动物组织；
[0049] E28)含有E4)所述重组载体的转基因动物组织；
[0050] E29)含有E5)所述重组载体的转基因动物组织；
[0051] E30)含有E6)所述重组载体的转基因动物组织；
[0052] E31)含有E7)所述重组载体组合物的转基因动物组织；
[0053] E32)含有E8)所述重组载体组合物的转基因动物组织；
[0054] E33)含有El)所述组合物的转基因动物器官；
[0055] E34)含有E2)所述表达盒的转基因动物器官；
[0056] E35)含有E3)所述表达盒组合物的转基因动物器官；
[0057] E36)含有E4)所述重组载体的转基因动物器官；
[0058] E37)含有E5)所述重组载体的转基因动物器官；
[0059] E38)含有E6)所述重组载体的转基因动物器官；
[0060] E39)含有E7)所述重组载体组合物的转基因动物器官；
[0061] E40)含有E8)所述重组载体组合物的转基因动物器官；
[0062] N、下述 Nl 和 / 或 N2:
[0063] Nl、与所述重链相关的生物材料，为下述Al)至A12)中的任一种：
[0064] Al)编码所述重链的核酸分子；
[0065] A2)含有Al)所述核酸分子的表达盒；
[0066] A3)含有Al)所述核酸分子的重组载体；
[0067] A4)含有A2)所述表达盒的重组载体；
[0068] A5)含有Al)所述核酸分子的重组微生物；
[0069] A6)含有A2)所述表达盒的重组微生物；
[0070] A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物；
[0071] A8)含有A4)所述重组载体的重组微生物；
[0072] A9)含有Al)所述核酸分子的转基因动物细胞系；
[0073] A10)含有A2)所述表达盒的转基因动物细胞系；
[0074] All)含有A3)所述重组载体的转基因动物细胞系；
[0075] A12)含有A4)所述重组载体的转基因动物细胞系；
[0076] N2、与所述轻链相关的生物材料，为下述BI)至B12)中的任一种：
[0077] BI)编码所述轻链的核酸分子；
[0078] B2)含有BI)所述核酸分子的表达盒；
[0079] B3)含有BI)所述核酸分子的重组载体；
[0080] B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；
[0081] B5)含有BI)所述核酸分子的重组微生物；
[0082] B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；
[0083] B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；
[0084] B8)含有M)所述重组载体的重组微生物；
[0085] B9)含有BI)所述核酸分子的转基因动物细胞系；
[0086] B10)含有B2)所述表达盒的转基因动物细胞系；
[0087] BI 1)含有B3)所述重组载体的转基因动物细胞系；
[0088] B12)含有M)所述重组载体的转基因动物细胞系。
[0089] 上述生物材料中，本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向 进化和点突变的方法，