防治肥胖症的三萜皂苷类化合物、制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于三萜皂苷类化合物及其制备和应用技术领域，具体涉及从绞股蓝中提 取分离得到的三萜皂苷类化合物及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 绞股蓝（Gynostemma pentahyllum(Thunb. )Makino)是萌芦科（Cucurbitaceae) 绞股蓝属多年生草质藤本植物。
[0003] 现代研宄表明，绞股蓝具有降血糖、降血脂、改善心脑血管系统、增强机体免疫力 以及抗肿瘤等广泛的生物活性，且其主要生物活性成分为三萜皂苷类化合物。
[0004] 鉴于三萜皂苷类化合物具有较高的药用价值，本领域尚需对其进行深入研宄。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种结构新颖的三萜皂苷类化合物及其制备方法和应用。
[0006] 本发明的第一方面，提供一种式I所示的三萜皂苷类化合物或其药学上可接受的 盐，
[0007]
[0008] 式中，*表示消旋、R构型或S构型。
[0009] 在另一优选例中，所述三萜皂苷类化合物为式Ia或式Ib所示的化合物：
[0010]
toon] 本发明的第二方面，提供第一方面所述的三萜皂苷类化合物的制备方法，包括以 下步骤：
[0012] (a)采用溶剂提取绞股蓝地上部分得到提取液；
[0013] (b)将所述提取液进行浓缩得到浸膏；
[0014] (C)将所述浸膏溶于水后得到分散液；
[0015] (d)将分散液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取后取正丁醇萃取液， 减压回收溶剂，得正丁醇部位浸膏；
[0016] (e)采用硅胶柱色谱层析所述正丁醇部位浸膏，以二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂 进行梯度洗脱，减压回收溶剂后再次进行硅胶柱色谱层析，用乙酸乙酯-甲醇溶液进行梯 度洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂后进行ODS填料中压柱色谱，以甲醇-水溶液进行梯度 洗脱，得到含所述三萜皂苷类化合物的流份；
[0017] (f)以半制备型反相高效液相色谱分离纯化所述流份，得到所述三萜皂苷类化合 物。
[0018] 在另一优选例中，所述绞股蓝地上部分包含叶、茎。
[0019] 在另一优选例中，所述绞股蓝为二倍体绞股蓝或四倍体绞股蓝，较佳为四倍体绞 股蓝。
[0020] 在另一优选例中，所述步骤（a)具有一个或多个以下特征：
[0021] (1)所述溶剂选自：甲醇、乙醇、丙酮、水中的一种或两种以上的混合物；
[0022] (2)所述提取的次数为2-5次；
[0023] (3)所述提取的时间为1-15小时；
[0024] (4)所述绞股蓝地上部分与所述溶剂的料液比为I :2-10 (kg/L)，较佳为1 :3_8,更 佳为1:5 ;
[0025] (5)所述提取在回流下进行。
[0026] 在另一优选例中，所述步骤（a)中用溶剂提取2~5次，每次1~3小时。
[0027] 在另一优选例中，所述提取的时间为2-10小时，较佳为3-8小时。
[0028] 在另一优选例中，所述浸膏与水的料液比为1:2~1:15 (kg/L)，较佳为1:2-1:12， 更佳为1:5-1:10。
[0029] 在另一优选例中，所述步骤（d)具有一个或多个以下特征：
[0030] (1)所述石油醚与分散液的体积比为1:2~5:1，较佳为1:1~2:1 ;
[0031] (2)所述乙酸乙酯与分散液的体积比为1:2~5:1，较佳为1:1~2:1 ;
[0032] (3)所述正丁醇与所述分散液的体积比为1:2~5:1，较佳为1:1~2:1。
[0033] 在另一优选例中，所述步骤（e)具有一个或多个以下特征：
[0034] (1)二氯甲烷-甲醇溶液中二氯甲烷与甲醇的体积比为100:1~0.5:1 ;
[0035] (2)乙酸乙酯-甲醇溶液中乙酸乙酯与甲醇的体积比为10:1~0· 5:1 ;
[0036] (3)甲醇-水溶液中包含5vol%-lOOvol%甲醇，余量为水。
[0037] (4)二氯甲烷-甲醇溶液以体积比100:1、20:1、10:1、5:1、1:1、0· 5:1进行梯度洗 脱；
[0038] (5)乙酸乙酯-甲醇系统以体积比10:1、5:1、2:1、1:1、0· 5:1进行梯度洗脱；
[0039] (6)甲醇-水溶液以5vol %甲醇-水、20vol %甲醇-水、40vol %甲醇-水、 60vol %甲醇-水、80vol %甲醇-水、IOOvol %甲醇溶剂进行梯度洗脱。
[0040] 在另一优选例中，步骤（f)中采用乙腈-甲醇-水的溶剂系统进行分离纯化，得 到所述三萜皂苷类化合物，其中，乙腈，甲醇与水的体积比为20-40:10-20:50-60,较佳为 25-35 :12-18 :52-58。
[0041] 本发明的第三方面，提供一种药物组合物，包含：
[0042] (a)第一方面所述的三萜皂苷类化合物；和
[0043] (b)药学上可接受的载体。
[0044] 在另一优选例中，所述药学上可接受的载体为崩解剂、粘合剂、增溶剂和赋形剂中 的一种或两种以上。
[0045] 本发明的第四方面，提供一种食品，包含第一方面所述的三萜皂苷类化合物。
[0046] 在另一优选例中，所述食品为减肥食品。
[0047] 本发明的第五方面，提供第一方面所述的三萜皂苷类化合物的用途，
[0048] (1)用于制备预防和/或治疗肥胖症的药物；
[0049] (2)用作食品辅料或食品添加剂。
[0050] 本发明的第六方面，提供第三方面所述的药物组合物的用途，用于制备预防和/ 或治疗肥胖症的药物。
[0051] 本发明从绞股蓝中提取分离得到的三萜皂苷类化合物，及它们的光学异构体、药 用盐、溶剂合物可以抑制脂肪细胞分化，它们可以以其自身的形式施用，也可以和药学上可 以接受的载体组成药物组合物或食品辅料及食品添加剂而应用；且制备方法简单易行，所 得化合物纯度高，具有良好经济效益和应用前景。
[0052] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附图说明】
[0053] 图1为加药分化7天后油红染色效果图。
[0054] 图2为对油红进行置换后定量图。
[0055] 图3为与脂肪分化相关基因图。
[0056] 图4为免疫荧光分析C/EBP β与染色体DNA结合实验结果图。
[0057] 图5为C/EBP β及磷酸化C/EBP β蛋白表达情况图。
[0058] 图6为CH0P-10蛋白表达情况图。
[0059] 图7为对Wnt/ β -catenin信号通路上下游蛋白表达情况图。
[0060] 图8为SiRNA干扰β -Catenin基因后脂肪分化关键蛋白表达及油红染色图。
【具体实施方式】
[0061] 本申请的发明人经过对绞股蓝的化学成分及其生物活性进行广泛而深入地研宄， 从绞股蓝中成功分离得到多个新的三萜皂苷类化合物，并首次发现一种新的三萜皂苷类化 合物及其同分异构体具有防治肥胖的功能。在此基础上，完成了本发明。
[0062] 绞股蓝
[0063] 绞股蓝为萌芦科植物绞股蓝（Gynostemma pentaphyllum(Thunb. )Makino)的干 燥全草，为多年生攀缘草本。绞股蓝具有悠久的食用历史，始载于明代的《救荒本草》作野 菜食用。日本民间则称其为"甘茶蔓"，作甜茶代用品或糖尿病人的甜味剂。绞股蓝也是五 加科外具有人参皂苷资源的植物之一，具有滋补保健、抗癌防衰、降血脂和降血糖等多种功 能，被誉为"南方人参"。绞股蓝作为卫生部公布的可用于保健品的植物之一，因其保健功效 显著，且安全性很高，适于长期服用，在民间常被当做降脂保健茶饮用。
[0064] 三萜皂苷类化合物
[0065] 本发明的三萜皂苷类化合物，结构如式I所示。
[0066] 在另一优选例中，三萜皂苷类化合物具体结构如下：
[0067]
[0068] 制备方法
[0069] 在另一优选例中，本发明的三萜皂苷类化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0070] (1)将四倍体绞股蓝地上部分用溶剂提取，浓缩提取液得浸膏；
[0071] (2)将浸膏加水溶解得分散液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取后 得到正丁醇萃取液，减压回收溶剂，得正丁醇部位浸膏；
[0072] (3)将正丁醇部位浸膏与硅胶拌样，上样于硅胶柱上，先以二氯甲烷-甲醇溶液为 洗脱剂进行梯度洗脱，减压回收溶剂后再次进行硅胶柱色谱层析，用乙酸乙酯-甲醇溶液 进行梯度洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂后进行ODS填料中压柱色谱，以甲醇-水溶液系 统进行梯度洗脱，收集含所述化合物的流份，将流份直接以半制备型反相高效液相色谱进 行分离纯化，得到所述化合物；
[0073] 在另一优选例中，所述步骤（1)中为将四倍体绞股蓝的地上部分用溶剂提取2~ 5次，每次1~3小时，浓缩提取液得浸膏；
[0074] 在另一优选例中，所述步骤（1)中的溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮或水中的一种或多 种的混合物；
[0075] 在另一优选例中，所述步骤（2)中的浸膏与水的质量比为1:2~1:15。<