甾体化合物,含其药物组合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及从杜仲叶中分离得到的一种新的留体化合 物，含其药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 杜仲Oliv.属被子植物门，杜仲科，杜仲属，落叶乔木，高达 20m，树皮灰褐色，连同枝、叶、根均含胶，折断有银白色细丝。叶椭圆或椭圆伏卵型，长6~ 18cm，边缘有锯齿，下边脉上有毛，叶柄长1~2cm，果为翅果扁平而薄，内含一种子。杜仲作 为中药在我国已有2000多年的药用历史，《神农本草经》和《本草纲目》均将其列为上品，其 具有多种功效，主要用于治疗肾虚腰痛，筋骨无力，妊娠漏血，胎动不安，高血压症。
[0003] 近年来，各国学者对杜仲化学成分进行了大量研宄，目前分离得到并经鉴定的有 机化合物有70种以上，无机矿物元素不少于15种。研宄发现，杜仲皮、花、叶和枝条等各 部分中含有相似的化学成分，主要包括木脂素类、环烯醚萜类、黄酮类和留体类等有机化合 物。现代药理学证明，杜仲具有多种功能活性，如降血压、抗衰老、抗癌、抗菌、镇痛、消炎， 利尿、镇静、安神，抗病毒作用，增强机体非特异免疫力，并能对细胞免疫进行双相调节等功 效，另外对神经中枢也有一定作用。杜仲也因其显著的生理活性得到了众多学者的关注。
[0004] 现代研宄表明，有些植物不但具有调节机体的免疫功能，还具有非特异性的抗病 毒功能。S-腺苷-L-高半脫氨酸水解酶（S-Adenosyl-L-homocysteine hydrolase，SAH 水 解酶）是一类具有独特广谱抗病毒活性的腺苷衍生物的作用靶，尤其是抗出血热病毒抑制 剂的目的靶，广泛存在于脊椎动物(如人、牛、狗、兔、大鼠、小鼠)、植物、真菌及其他微生物 细胞内，具有重要的生理功能。SAH水解酶与转甲基作用密切相关，真核细胞及病毒mRNA 5'-末端必须具有甲基化的帽状结构，才能进行翻译。mRNA 5'-末端甲基化依赖于腺苷甲 硫氨酸的多种甲基转移酶催化，SAH是酶反应产物，亦是该酶的竞争性反馈抑制剂。SAH水 解酶可将SAH水解成腺苷及L-高半胱氨酸，该反应是可逆的，体外趋向合成，体内趋向水 解。体内转甲基化产生的SAH被SAH水解酶不断水解，使转甲基反应继续进行，无 SAH的累 积。如SAH水解酶被抑制，细胞内SAH积累，抑制转甲基酶，进而影响mRNA功能，病毒蛋白 不能合成，也就不能生成子代病毒，病毒复制受到抑制。大多数病毒mRNA需甲基化的帽状 结构，且对转甲基酶的抑制比细胞mRNA敏感，细胞内SAH浓度稍有增加，便首先受到波及， 此特点赋于SAH水解酶抑制剂有选择性。因此，SAH水解酶在国际上被用于作为筛选抗出 血热病毒抑制剂的体外筛选模型。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从杜仲叶中分离得到的一种新的甾体化合物（I )，其 药物组合物及其制备方法和用途。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的： 具有下述结构式的留体化合物（I )，
药物组合物，其中含有治疗有效量的化合物（I )和药学上可接受的载体。
[0007] 所述的化合物（I )的制备方法，其特征在于，包含以下方法步骤：（a)阴干的杜仲 叶用90%乙醇热回流提取3次，合并提取液，浓缩至无醇味，得浓缩液；（b)将步骤（a)所得 的浓缩液依次用石油醚、二氯甲烷和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、二氯甲 烷萃取物和正丁醇萃取物；（c)对步骤（b)中二氯甲烷萃取物用正相硅胶分离，依次用体积 比为50:1、20:1、10:1、5:1和1:1的二氯甲烷-丙酮梯度洗脱得到5个组分；（d)将步骤（c) 中的组分2用反相硅胶分离，依次用体积百分浓度为30%、50%、70%和100%的甲醇水溶液梯 度洗脱，得到4个组分；（e)将步骤（d)中的组分3用葡聚糖凝胶S印hadex LH-20分离，用 体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱，得到纯的化合物（I )。
[0008] 所述的化合物（I )在制备抗病毒药物中的应用。
[0009] 所述的药物组合物在制备抗病毒药物中的应用。
[0010] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物 组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I )，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒 和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0011] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0012] 图1为化合物（I )化学结构式； 图2为空白对照曲线及SAH水解酶活性测定结果； 图3为化合物（I )对SAH水解酶的抑制作用。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0014] 主要材料和试剂：乙醇、石油醚、二氯甲烷、正丁醇、丙酮均为分析纯，购自南京 化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦科技有限公司；Ado, Sigma公司；L-Hey， Sigma公司；DTNB，Sigma公司；二硫苏糖醇（DTT)，分析纯，上海伯奥生物科技有限公司；乙 二胺四乙酸（EDTA)，分析纯，天津市远航化学品有限公司；硫酸铵，分析纯，天津市东丽区 天大化学试剂厂；磷酸二氢钾，分析纯，天津市东丽区天大化学试剂厂；磷酸氢二钾，分析 纯，天津市东丽区天大化学试剂厂；wistar大鼠，哈尔滨医科大学实验动物中心。杜仲叶产 自江苏大丰林业基地。
[0015] 核磁共振仪(德国Bruker公司）;WRS-1B型数字熔点测定仪(上海精密仪器科学有 限公司）;WatersSynaptTMQ-TOF 型质谱仪（美国 Waters 公司）;Waters2545-2767-UV2489 自 动纯化系统(美国Waters公司）；薄层色谱及柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂)。
[0016] 实施例1 :化合物（I )的制备方法 提取分离步骤：（a)阴干的杜仲叶（10. 5 Kg)用90%乙醇热回流提取，提取三次，每次 30L，提取2. 5小时，合并提取液，浓缩至无醇味，得浓缩液；（b)步骤（a)所得浓缩液依次用 石油醚（2L)、二氯甲烷（2L)和水饱和的正丁醇（2L)萃取，得到石油醚萃取物、二氯甲烷萃 取物（265g)和正丁醇萃取物；（c)对步骤（b)中的二氯甲烷萃取物用正相硅胶分离，依次用 体积比为50:1、20:1、10:1、5:1和1:1的二氯甲烷-丙酮梯度洗脱，每个梯度洗脱6个柱体 积，合并相同梯度洗脱液浓缩得到5个组分；（d)将步骤（c)中的组分2 (78g)用反相硅胶 分离，依次用体积百分浓度为30%、50%、70%和100%的甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱 5个柱体积，合并相同梯度洗脱液浓缩得到4个组分；（e)将步骤（d)中的组分3 (5. 4g)用 葡聚糖凝胶S印hadex LH-20分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱，得到纯 的化合物（I ) (27mg)。
[0017] 结构确证：白色针状的结晶；HR-ESMS显示[M+Na]+为m/z 461. 3424,结合核磁特 征可得分子式为C3tlH46O2，不饱和度为8。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρπι，⑶Cl 3, 600ΜΗζ):1·32 (lH，m，l-H)，L08 (lH，m，l-H)，L53 (lH，m，2-H)，L28 (lH，m，2-H)，3.54 (lH，m，3-H)， 2.22 (lH，dd，4-H)，1.97 (lH，dd，4-H)，5.28 (lH，dd，6-H)，2.19 (lH，m，7-H)，1.95 (lH，m， 7-H)，1.4