一种嘧啶类新化合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种具有抑制肿瘤细胞生长的嘧啶类新化合物，具有较好的水溶性， 较阳性对照药具有安全性和有效性的优势，可以制备成注射液用于治疗肿瘤。
【背景技术】
[0002] 肿瘤是危害人类健康的严重疾病，肿瘤的防治工作一直是医药研宄领域的重点。 目前，由于工业发展中带来的环境污染等问题，人类的生存环境质量不断下降，造成肿瘤疾 病的发病率与致死率不断上升。放疗、化疗是目前治疗肿瘤的主要手段。但化疗、放疗在抑 制了癌细胞发育的同时也抑制了正常细胞的发育，降低了机体免疫力，导致新的并发症。治 疗肿瘤疾病的特效药并不能令人满意，目前临床所用细胞毒性药物选择性不高，导致对正 常细胞的恶性杀伤，限制了其应用。因此，寻找新的、无创伤、无细胞毒作用的抗肿瘤药物成 为国际医药领域的重要方向。
[0003] 本发明涉及一种新化合物，经过体外、体内抗肿瘤实验证明具有较好的活性，经过 溶解性试验证明具有较好的水溶性，安全性和有效性均优于阳性对照药。
【发明内容】
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[0005] 本发明提供了一种抗肿瘤化合物，是一种新的化合物及其盐，具体为下式所示式 Ia和Ib化合物或其药学上可接受的盐：
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[0007] 合成路线：
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[0009] 实施例1、化合物Ia和Ib的合成
[0010] 如合成路线所示：
[0011] ⑴、化合物4的合成：
[0012] 将原料2(111.(^，1.0111〇1)、硫酸钾（17.48,0.1111〇1)和无水氯化锂（4.28,0.1111〇1) 加入到200.0 mL苯甲醚中，控温120~125°C，再将3,4_二苯甲酰醛-2-脱氧-2, 2-二 氟-D-呋喃核糖-1-甲磺酸酯（548. 0g，I. 2mol)和400.0 mL苯甲醚的混合液滴加至反应 瓶中，搅拌反应4h，反应毕，控温60°C以上，慢慢加入300.0 mL乙酸乙酯，滴加220.0 mL浓 盐酸，有大量白色固体析出，搅拌30min。过滤，滤饼再加至1000.0 mL水中，搅拌下用碳 酸氢钠调节pH到8. 0~8. 5,然后过滤，滤饼用适量的水洗涤，滤干，真空烘箱干燥，干燥 温度保持在65~70°C，真空度保持在0. 08~0.1 mPa，干燥6h以上，得到405. 2g化合物 4(3α/3β = 1/7. 1)，为白色固体，收率 85.7%〇 HNMR(400Hz，DMSO) :7.98-7.96(m，4H)， 7· 48-7. 46 (m，2H)，7· 38-7. 36 (m，4H)，7· 30 (d，5 = 5. 6Hz，1H)，6· 39 (s，1H)，4· 95-4. 92 (m， 1H)，4· 85-4. 83 (m，1H)，4· 50 (d，J = 5. 6Hz，1H)，4· 25-4. 22 (m，2H) ;MS (m/z) :472. 5。
[0013] (2)、化合物5的合成：
[0014] 室温搅拌下，将化合物4(330. 0g，0.70mol)溶于700.0 mL甲醇中，滴加浓氨水 (100. 0mL，28%，15. Omol/L)，搅拌反应3h以上。反应结束后，加水700.0 mL，减压浓缩溶液 至原来体积的1/2即可除去其中的甲醇，加入乙酸乙酯500.0 mL，充分搅拌30min。静置分 层，分出有机层。水层再加入乙酸乙酯200.0 mL萃取，分出有机层，合并有机层，加入活性 炭脱色，过滤。滤液减压浓缩，得残留固体。残留固体用200.0 mL异丙醇搅拌溶解，慢慢滴 加浓盐酸调pH至3. 5~3. 7,温度控制在70~75°C搅拌30min，冷却至室温，搅拌析晶3h 以上。过滤得白色固体，用真空烘箱干燥，温度保持在45~50°C，真空度保持在0.08~ 0.1 mPa，干燥6h以上，得到153. 8克白色固体，为化合物5,收率82. 7%。HNMR(400Hz， DMSO) :7. 30(d，J = 5. 6Hz，1H)，6· 39(s，1H)，5· 76(d，J = 5. 6Hz，1H)，4· 12-4. 10(m，1H)， 3· 92-3. 90 (m，1H)，3· 79-3. 76 (m，2H)，2· 00 (s，2H) ;MS (m/z) :264. 2。
[0015] (3)、化合物la的合成：
[0016] 准确量取120.0 mL吡啶加入到1.0 L的带有温度计的三口圆底烧瓶中，冷却至 〇_5°C，缓慢滴加92. 0克三氯氧磷，滴加的过程中控制温度不超过10°C，滴加完毕后搅拌反 应1小时。将化合物5(131. 5g，0. 50mol)溶于150.0 mL吡啶中，然后缓慢滴加到上述反应 液中，2小时内滴加完毕，自然升温至室温，搅拌反应过夜。反应结束后，加入500.0 mL蒸馏 水，慢慢滴加浓盐酸调pH至3. 0~4. 0,充分搅拌30min，抽滤，滤饼用蒸馏水洗绦，真空烘 干燥，温度保持在45~50°C，真空度保持在0. 08~0.1 mPa，干燥6h以上，得到化合物1的 粗品，用乙醇重结晶后得到103. 2克化合物la，收率66. 6%。HNMR(400Hz，DMSO) :7. 30 (d， J = 5. 6Hz，1H)，6· 39(s，1H)，5· 76(d，J = 5. 6Hz，1H)，4· 12-4. 10(m，1H)，3· 92-3. 90(m，1H)， 3.79-3.76(m，2H)，2.00(s，2H) ;MS(m/z) :310.2。
[0017] (4)、化合物lb的合成：
[0018] 准确称取50. 0克化合物la溶于150.0 mL乙醇中，然后将13. 6克碳酸氢钠溶于 50.0 mL蒸馏水中，缓慢滴加到上述反应液中，1小时内滴加完毕，搅拌反应2小时。反应结 束后，减压蒸馏除去溶剂得到固体，加入50.0 mL蒸馏水复溶，搅拌下，慢慢滴加丙酮直至有 沉淀析出，将反应液冷却至-l〇°C，再滴加50.0 mL丙酮，充分搅拌1小时，抽滤，滤饼用丙酮 洗涤，真空烘干燥，温度保持在45~50°C，真空度保持在0. 08~0.1 mPa，干燥2h以上，得到 40. 6 克化合物 lb，收率 72. 6%。HNMR(400Hz，DMS0) :7. 30(d，J = 5. 6Hz，1H)，6. 39(s，1H)， 5· 76 (d，J = 5. 6Hz，1H)，4· 12-4. 10 (m，1H)，3· 92-3. 90 (m，1H)，3· 79-3. 76 (m，2H)，2· 00 (s， 2H) ;MS(m/z) :348.2。
[0019] 实施例2、化合物lb的抑瘤作用比较
[0020] 建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型，模型建立后20只裸鼠随机分成四组，每组5 只，分别给予：对照组（A组）：生理盐水腹腔注射；(B组）：盐酸吉西他滨（GEM)50mg/kg*d 腹腔注射，每周2次；（C组）：1b化合物50mg/kg · d，每周2次。给药后定期观察裸鼠的行 为及对外界刺激的反应，检测各组裸鼠体重及皮下移植瘤体积的变化，并绘制生长曲线；28 天后处死裸鼠，测量各组肿瘤重量，计算抑瘤率，RT-PCR检测瘤组织VEGF、Bcl-2及Bax的 mRNA表达水平，免疫组化及免疫印迹法（Westen Blot)检测瘤组织VEGF和Caspase-3的蛋 白表达水平。CD34标记血管内皮细胞测定肿瘤的血管密度（MVD)。结果20只裸鼠实验期 间无一只死亡，成瘤率100%。
[0021] (1)对照组、GEM组、Ib组的移植瘤体积分别为（I. 256±0. 128) cm3、 (0.898±0.142)cm3、（0.442±(X117)cm3，瘤体重量分别为（L412±0.138)g、 (0. 864±0. 112)g、（0. 512±0. 091)g，GEM组、Ib组移植瘤体积及瘤体重量较对照组 减小，其中Ib组作用最显著，对照组、GEM组、Ib组的抑瘤率分别为：（28. 3±3. 2) %、 (48. 8±4· 2) %、（63. 7±6· 0) %。
[0022] (2) RT-PCR 显示 GEM 组、Ib 组 VEGF mRNA 及 Bcl-2mRNA 表达下调，Bax mRNA 表达 上调，Ib组与对照和GEM组比较均有统计学意义（P0.0 5)。
[0023] (3)免疫组化及免疫印迹法（Westen Blot)显示GEM组、Ib组VEGF蛋白表达下调， 而Caspase-3蛋白表达上调，⑶34标记血管内皮细胞测定肿瘤的血管密度（MVD)显示GEM 组、Ib组肿瘤的血管密度（MVD)减少，Ib组与GEM组比较均有统计学意义（P0.0 5)。
[0024] 结论：SZ1501及盐酸吉西他滨（GEM)均具有明显的抗肿瘤作用，Ib相对于盐酸吉 西他滨组可达到更好的作用，抑瘤作用更加明显，可应用于胰腺癌的联合化疗。实施例3化 合物Ib的小鼠急性毒性试验
[0025] NIH小鼠40只，19-21g，雌雄各半，随机均衡分为两组：给药组与辅料对照组。给药 组NIH小鼠尾静脉注射给予Ib水溶液（80mg/4ml，经过预实验后选择的剂量），给药容积： 0. 2ml/次/IOg体重，一日两次，两次给药时间间隔为6小时，即一日给药剂量为：800mg/ kg，辅料对照组给予等量的空白辅料（0. 1 %碳酸钠溶液），观察记录给药后小鼠急性毒性 反应及累积死亡数。