一种连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，尤其涉及连翘脂素葡萄糖醛酸苷类衍生物制备方法及 在抗病毒方面的作用。
【背景技术】
[0002] 连翘脂素葡萄糖醛酸苷类衍生物，是从木犀科（Oleaceae)连翘属植物连翘 (Forsythiasuspensa(Thunb. )vahl)的干燥叶中提取的有效成分。连翘作为中药应用，已有 两千年历史，始见于《神农本草经》。《神农本草经》上载："主寒热，痈肿恶疮，结热，鼠瘘瘰 疬。"
[0003] Murakami首次从连翘果实中得到齐墩果酸以来，连翘及其同属植物中已有六十余 种成分见诸报道、其主要含萜类、苯乙醇及其甙类、木脂素类、黄酮类和一些醇、酯、醚和酮 等类化合物。
[0004] 连翘属中的木脂素成分主要为木脂内酷和双环氧木脂素。1978年，Nishibe 等从连翅中分得了 arctigenin，mataresinol，arctiin 和 matairesinoside。1985 年，Tsukamoto 等从连翅果实中分得了 phillygenin，（+)-pinoresinol，phillyrin， (+)-pinoresnol-0-D-glucoside 和（+)-epinoresinol_4-〇-glucoside。1997 年，刘冬雷 等又从连翘果实中分得了（+)松脂素单甲基醚-β-D-葡萄糖营（pinoresinolmonomethyle ther-β-D-gluco-side)。近来生合成研宄表明，连翘属中木脂素前体是松伯醇，已知连翘属 中木脂素及其苷的3,3'位全是甲氧基取代，4,4'位可以是羟基，甲氧基取代或与糖成苷。
[0005] 三种连翘脂素葡萄糖醛酸苷类衍生物系首次从连翘叶中发现，葡萄糖醛酸衍 生物具有良好的活性。例如青蒿素葡萄糖醛酸衍生物（Efficient Preparations of the β -Glucuronides of Dihydroartemisinin and Structural Confirmation of the Human Glucuronide Metabolite. Paul M. 0'Neill，Feodor Scheinmann, Andrew V. Stachul ski, James L.Maggs, and B. Kevin Park. J. Med. Chem. , 2001,44 (9), pp 1467 -1470)、依达拉奉葡萄糖酸酸衍生物（Synthesis of the metabolites of a free radical scavenger edaravone(MCI-186, Radicut?).Kazutoshi ffatanabe, Masao Taniguchi, Masaki Shinoda. Redox Report，Vol. 8，No. 3, 2003,157-161)、风车子素 A_1 葡萄糖酸 酸衍生物(Regi〇-and Stereospecific Synthesis of Mono-β -d-Glucuronic Acid Derivatives of Combretastatin A-1. Rajendra P. Tanpure, Tracy E.Strecker, David J.Chaplin, Bronwyn G. Siim, Mary Lynn Trawick and Kevin G. Pinney. J. Nat. Prod., 2010,73(6)，pp 1093 - 1101)、白藜芦醇葡萄糖醛酸衍生物（WANG LAIXI ;Heredia，A.; Song, HJ ；ZHANG ZHA0JUN ；YU BIAO ；Davis, C. ；Redfield, R. Resveratrol glucuronides as the metabolites of resveratrol in humans Characterization, synthesis, and anti-HIV activity. J. Pharm. Sci. 2004,93 (10)，2448-2457)和姜黄素葡萄糖醛酸衍生物 (K. S. Psrvathy，Μ· Sc. University of Mysore. 2009)等等。因此我们研宄了三种连翘脂素 葡萄糖醛酸苷类衍生物的制备方法，并进行了药理研宄。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种新的抗病毒药物来源，连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物、其 制备方法和其抗病毒的应用，本发明提供的连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物具有抗病毒的作 用，可用于制备用于治疗和预防流感病毒的药物或保健品；连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物的 制备方法工艺简单，操作方便，适合工业化放大生产。
[0007] 为实现本发明的目的，本发明一方面提供一种结构通式如式（I )所示的连翘脂 素葡萄糖醛酸衍生物：
[0008]
[0009] 其中：R1= H，R 2= C nH2n+1，R3= C 3211+1或 R C nH2n+1，R2= C nH2n+1，R3= H 或 R「R2 =-CH2-，R3= CnH2n+1;n = 1 ~30〇
[0010] 其中，所述取代基的η = 1。
[0011] 本发明另一方面提供一种连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物的制备方法，包括如下顺序 进tx的步骤：
[0012] 1)将连翘叶与提取溶剂水混合后加热，进行煎煮提取2-3次，收集、合并提取液， 获得连翘水提液；
[0013] 2)将连翘水提液采用大孔树脂柱进行分离处理，收集、合并洗脱液，得到连翘树脂 柱洗脱液；
[0014] 3)对连翘树脂柱洗脱液进行干燥处理，然后进行硅胶柱层析处理，分段收集洗脱 液，洗脱液分别干燥，即得。
[0015] 其中，步骤1)中所述加热提取次数优选为2次。
[0016] 特别是，每次煎煮提取过程中，所述连翘叶与提取溶剂水的重量配比为1 :6_10， 优选为1 :8-10。
[0017] 尤其是，第一次煎煮过程中，所述连翘叶与提取溶剂水的重量配比为I :9-10 ;第 二次煎煮过程中，所述连翘叶与提取溶剂水的重量配比为1 :8。
[0018] 特别是，还包括将步骤1)获得的连翘水提液进行浓缩处理，制成连翘浓缩液后再 进行所述的大孔树脂柱分离处理。
[0019] 尤其是，浓缩处理后获得的连翘浓缩液的体积与连翘叶的重量之比为1-5 :1，优 选为 2-2. 5 :1。
[0020] 其中，步骤2)中所述大孔树脂柱层析处理包括以下顺序进行的步骤：首先将连 翘水提液注入大孔树脂柱，接着采用水为洗脱剂进行洗脱，然后采用质量百分比浓度为 3-50%的乙醇溶液为洗脱剂进行洗脱，最后采用无水乙醇为洗脱剂进行洗脱，收集无水乙 醇洗脱液，获得连翘-大孔树脂洗脱液。
[0021] 特别是，大孔树脂柱层析过程中，连翘叶水提液中连翘叶的重量与大孔树脂体积 之比为1 :0. 8-2. 5,优选为1 :1。
[0022] 尤其是，大孔树脂柱分离处理过程中，大孔树脂柱的柱直径与树脂的柱高之比为 1 :5-10,优选为1 :5-7,进一步优选为1 :5· 5-5. 9。
[0023] 其中，步骤2)中所述的大孔吸附树脂选择X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、 D10UWLD中的一种，优选为X-5、AB-8。
[0024] 特别是，采用水为洗脱剂进行洗脱过程中，水的用量与大孔树脂柱的柱体积之比 为2-4 :1，优选为4 :1 ;采用质量百分比浓度为3-50%的乙醇溶液为洗脱剂进行洗脱过程 中，质量百分比浓度为3-50%的乙醇溶液的用量与大孔树脂柱的柱体积之比为2-8 :1，优 选为4-8 :1，进一步优选为8 :1 ;采用无水乙醇溶液为洗脱剂进行洗脱过程中，无水乙醇溶 液的用量与大孔树脂柱的柱体积之比为2-8 :1，优选为4-8 :1，进一步优选为8 :1。
[0025] 其中，步骤3)中所述硅胶柱层析处理包括如下顺序进行的步骤：
[0026] A)对连翘树脂柱洗脱液进行浓缩、干燥处理，制得连翘粗品；
[0027] B)将连翘粗品用水溶解后注入硅胶柱，进行硅胶柱层析处理，分段收集洗脱液，洗 脱液分别干燥，即得。
[0028] 特别是，步骤B)中所述硅胶柱选择反相硅胶柱。
[0029] 其中，所述反相硅胶柱中填料选择C18反相硅胶；粒径5~10 μ m。
[0030] 特别是，所述反相硅胶柱的柱内径10~100mm、长度100~300mm ;优选为柱内径 22. 2mm、长度 250mm。
[0031] 其中，所述硅胶柱层析选择高效液相色谱柱。
[0032] 特别是，所述硅胶柱层析过程中流动相选择甲醇（A)和水（B)的混合液。
[0033] 其中，甲醇与水的体积之比为8 :2-10 :1。
[0034] 特别是，硅胶柱层析过程中柱温20~35°C ;流速4~30ml/min。
[0035] 特别是，硅胶柱层析过程中流动相以等度或梯度洗脱的方式洗脱样品。
[0036] 其中，梯度洗脱[Omin (30 % A) - 25min (50 % A) - 50min (50 % A);流速为 4. OmL/ min ;柱温20°C ;检测波长为273nm0
[0037] 特别是，所述硅胶柱层析的色谱条件如下：以C18反相硅胶为填充 剂（Φ22. 2Χ250πιπι，1〇μπι);甲醇（A) -水⑶为流动相；梯度洗脱[0min(30 % A) - 25min(50% A) - 50min(50% A);流速为 4. OmL/min ;柱温 20°C ;检测波长为 273nm。
[0038] 特别是，所述硅胶柱层析的色谱条件如下：以C18反相硅胶为填充剂 (〇22.2父250臟，1(^111) ;甲醇仏)-水出）为流动相；梯度洗脱：0~251^11，甲醇30%~ 50%;25~5〇1^11，甲醇50%~50%，流速41111/1^11，柱温为20°0，紫外检测波长为27311111。
[0039] 通过上述方法制备而成的连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物为化合物I、II、111，其结构 确认分析如下：
[0040] 化合物I :33-羟基-连翘脂素-8-0- β -D-葡萄糖醛酸苷
[0041] ESI-MS :m/z 533. 1658 [Μ-ΗΓ，分子量为：534 ;分子式为：C26H3Q012。
[0042] 核磁共振氢谱（400MHz，d6-DMS0) : δ (ppm) : 12. 0 (1H，s，C00H)，7. 119-7. 099 (1H， d, J = 8. 0Hz, Ar-H) ,6. 530-6. 943 (2H, d, J = 4. OHz