一种活性示踪下肠道免疫调节活性荔枝多糖级分制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及功能食品领域，尤其涉及一种活性示踪下肠道免疫调节活性荔枝多糖 级分制备方法。
【背景技术】
[0002] 荔枝是亚热带地区的主要特色水果，因其果皮鲜艳美观、肉汁细腻香甜而深受国 内外消费者的喜爱，被誉为"果中珍品"。我国是荔枝的主产国，种植面积和产量均居世界第 一。广东省作为荔枝的主产区其产量占全国荔枝总产量的60%以上。由于荔枝上市时间集 中，且保鲜时间短，鲜销市场压力巨大。开展精深加工利用研宄、延长其产业链是促进荔枝 产业可持续发展的必由之路。目前市场上的荔枝深加工产品还比较少，荔枝干、荔枝果汁等 产品尚不足以体现荔枝这一珍稀水果的价值。
[0003] 据《本草纲目》记载"常食荔枝能补脑健身，治疗瘰疬，开胃益脾；干制能补元气，可 作为产妇及老弱者的补品"，现代药理学研宄表明多糖是荔枝中的主要活性成分，具有抗氧 化和免疫调节等活性。充分发挥荔枝的"食疗"特性和优势，制备其免疫活性多糖用于功能 食品的研发是开展荔枝精深加工利用的重要途径。近来的医学研宄表明，肠道粘膜免疫系 统对维持机体的免疫稳态具有重要作用，被认为是人体最大的免疫器官之一，肠道是多糖 与人体直接作用的主要组织，肠粘膜及肠壁上分布着大量的淋巴细胞以及派氏结等淋巴细 胞组织能够与多糖发生相互作用，有研宄发现静脉注射的中药多糖的免疫调节作用不及口 服给药效果明显，提示了肠道免疫在多糖免疫调节中可能具有十分重要的作用。而多糖作 为一种生物大分子被人体口服摄入后很难被消化酶水解，因此能够吸收入血的多糖量非常 有限。对银耳多糖的吸收利用情况的研宄表明，大鼠口服摄入银耳多糖后只有0. 4%能够以 完整的多糖结构吸收入血，如此低的生物利用率很难使其达到可以发挥免疫调节活性的血 药浓度。
[0004] 水果多糖一般为杂多糖，由单糖组成和高级结构差异显著的多种多糖级分组 成，不同的分离制备方法所得到的多糖在其结构特征上会存在明显的差别。如申请号为 201210108487. 6的发明专利公开了一种荔枝多糖的提取工艺，该发明采用微波法对荔枝中 的多糖进行提取，具体为：将荔枝干去壳、去核、在水中浸泡后打浆；将浆液置于微波炉中 加入料液比为1:6~1:12的水，设置微波的功率为480~800W，微波提取8~12min ;过滤、离 心，取上清液浓缩，加入60~80%的乙醇溶液，静置10~15h ;离心、取上清液浓缩、干燥得成 品。该发明只是采用常规的微波提取方法，并没有结合荔枝多糖的生物活性对提取条件进 行优化，使得制备的荔枝多糖肠道免疫调节活性较低，且该方法得到的只是一种多糖含量 相对较低的粗多糖，其中含有色素，蛋白、无机盐等多种杂质，且多糖的均一性较低，为多种 不同分子量范围的多糖级分组成的杂多糖。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种活性示踪下肠道免 疫调节活性荔枝多糖级分制备方法，解决通过普通方法制备的荔枝多糖溶解性和肠道免疫 调节活性较低的问题。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明采用如下方案实现： 一种活性示踪下肠道免疫调节活性荔枝多糖级分制备方法，对干制的荔枝果肉依次进 行超高压酶解辅助热水浸提法提取荔枝粗多糖、脱蛋白处理、透析脱除小分子处理和乙醇 分步沉淀处理后，制得具有肠道免疫调节活性的荔枝多糖级分。
[0007] 多糖的提取可以采用多种方式，例如热水浸提、超声辅助或微波辅助提取等，而本 发明通过超高压酶解辅助热水浸提法提取得到的多糖活性更高；经提取得到的是粗多糖， 需要进一步的去除杂质，因此需要进行脱蛋白的处理；脱去蛋白的多糖通过透析除去里面 含有的盐离子、单糖，同时也可以去除色素之类的杂质，这时得到的多糖杂质含量已经比较 低，但是这时的多糖是由不同分子量的很多种多糖分子组成的不均一的多糖混合物，因其 分子量和单糖组成等的差别，活性也会有明显的不同；本发明进一步用不同终浓度的乙醇 对这种多糖混合物进行分步醇沉，利用不同分子量的多糖溶解在不同浓度的乙醇中的原 理，获得不同分子量分布的多糖级分，从而获得活性最高的多糖级分。
[0008] 干制的荔枝果肉的制备包括如下步骤：将荔枝清洗干净后沥干，送入热风干燥 设备中，于温度86~92°C条件下杀青4~6h ;将经杀青的荔枝送入热泵干燥装置中，于温度 50~65°C、风速lm/s条件下干燥至荔枝中水分含量为25%以下，得干制的荔枝果肉；干燥操 作为每干燥9~12h后关闭热泵干燥装置缓苏3~4h，重复此干燥-缓苏周期3次。
[0009] 从新鲜荔枝果肉和干制荔枝果肉中提取到的多糖在结构特征和活性上有明显的 不同，前者的免疫调节活性低于后者，且相对于热风、真空冷冻等干制方式，热泵干制果干 制备的多糖免疫调节活性最强。
[0010] 超高压酶解辅助热水浸提法提取荔枝粗多糖具体步骤为： 511 :干制的荔枝果肉按料液比1 :15~20加入蒸馏水，室温下浸泡l~2h后，打浆得均质 液并在800~1000rpm条件下搅拌25~35min，向均质液中加入纤维素酶2000~3000U/kg和果 胶酶4000~5500U/kg，磁力搅拌的条件下酶解60~80min，将酶解均质液转移至铝箔袋中，排 出空气后封口，超高压条件下保压一段时间，卸压后将内容物倒出； 512 :将步骤Sll处理后的酶解均质液于80~90°C的水浴下浸提4~6h并趁热过滤，滤液 于4000~5000rpm条件下离心8~12min，收集上清液备用； 513 :对S12中得到的沉淀按料液比1:15~20再次加入蒸馏水并按照S12的浸提步骤 重复操作1~2次，收集并合并每次离心后的上清液，于60~70°C旋转蒸发至上清液体积的 1/8~1/10,得粗多糖溶液。
[0011]目前多糖的提取方法有多种，从一开始的浸提有传统的热水浸提，也有很多采用 超声、微波辅助提取，其多糖提取得率会有明显的差别，导致很多研宄会倾向于采用得率更 高的方法。但不同的提取方法所得多糖的活性差异却不是很清楚。本发明针对这一问题， 通过在线活性跟踪比较，有针对性的做出设置，使得提取的多糖活性最高；本发明中，酶浓 度太低达不到水解效果，浓度太高水解过度会降低多糖提取率，酶解时间和温度同样有此 影响。超高压处理的保压时间和压力都是经过单因素实验比较得出的，如果压力太高或太 低或保压时间太长或太短，对其所得多糖单位重量的免疫调节活性虽无明显影响，但多糖 的得率都会明显降低。热水浸提的料液比和温度也经过特别设置，料液比太高时虽然多糖 提取比较完全但多糖提取液浓度太低，旋蒸时间加长，不节能，如果料液比太低，提取率会 很低，造成原料的浪费。浸提温度会直接影响多糖的提取率，低于80°C时荔枝多糖的溶出 率会有明显降低，有些多糖的提取温度会达到95°C，但本发明经过对比分析发现温度高于 90°C后不仅多糖的溶出率没有提高，而且得到的多糖的溶解性和免疫调节活性方面反而降 低，因此把温度限定在80~90°C范围内，步骤Sll显著提高了多糖的溶出率。本技术方案所 得多糖的提取得率和多糖的免疫调节活性显著高于单纯热水浸提以及超声辅助和微波辅 助提取。本技术方案不对磁力搅拌的条件进行限制，调整转速能够起到搅拌均匀的效果即 可。同时不对旋转蒸发的转速进行限制。