的浓度和添加至系 统的所有附加的表面活性剂变为胶束。
[0103] 如本文所使用，温和搅拌足以从热处理的颗粒中释放酶。
[0104] 如本文所使用，饲料浆是颗粒前体。
[0105] 如本文所使用，氨基酸残基是被结合以形成多肽分子的氨基酸的侧链，所述侧链 的序列指定了蛋白质。
[0106] 如本文所使用，酶是蛋白质催化剂。
[0107] 如本文所使用的术语"包含"与"包括"、"含有"或"特征为"同义并且是包含性的 或者开放式的，并且不排除另外的、未叙述的要素或方法步骤。
[0108] 在说明书中使用的表示成分、反应条件等等的数量的所有数字都可理解为通过使 用术语"大约"在所有情况下被修改。因此，除非相反地表示，本文所阐述的数值参数是可 以根据要求获得的期望性能变化的近似值。至少，并不是试图将等同原则的应用限制于任 何要求本申请优先权的任何申请中任何权利要求的范围内，应当根据有效数字的数目和普 通四舍五入方法解释每个数值参数。
[0109] 以上描述公开了本发明的几种方法和材料。本发明易于就方法和材料修改，并且 易于就制造方法和设备改变。从对本公开内容的思考或本文公开的发明的实践，这些种改 变对于本领域技术人员而言将变得明显。因此，不意欲将本发明限制于本文公开的具体的 实施方式，而是其覆盖本发明的真实范围和精神内的所有修改和改变。
[0110] 本文所引用的所有参考文献，包括但不限于出版的和未出版的申请、专利和文献 资料参考，通过引用以其整体并入本文并且因此构成本说明书的一部分。就通过引用并入 的出版物和专利或专利申请与本说明书包含的公开内容相矛盾的而言，本说明书意欲取代 和/或优先于任何这种相矛盾的材料。
【主权项】
1. 一种用于从热处理的固体提取多肽的水性组合物，所述水性组合物包含胆汁盐洗涤 剂、变性剂、碱和水。2. 权利要求1所述的组合物，其中所述变性剂是离液剂。3. 权利要求2所述的组合物，其中所述变性剂选自脲、胍盐和高氯酸盐。4. 权利要求3所述的组合物，其中所述变性剂是脲。5. 权利要求4所述的组合物，其中所述脲以从大约0.0 M至大约3. OM的浓度存在于所 述组合物中。6. 权利要求5所述的组合物，其中所述脲以大约IM的浓度存在于所述组合物中。7. 权利要求1所述的组合物，其中所述碱是碳酸氢盐。8. 权利要求7所述的组合物，其中所述碳酸氢盐是碳酸氢钠。9. 权利要求8的所述的组合物，其中所述碳酸氢钠以大约50mM至大约200mM的浓度存 在。10. 权利要求8所述的组合物，其中所述碳酸氢钠以大约IOOmM的浓度存在。11. 权利要求1所述的组合物，其中所述水性组合物具有碱性的pH。12. 权利要求1所述的组合物，其中所述水性组合物具有大约8. 0至大约11. 0的pH。13. 权利要求1所述的组合物，其中所述水性组合物具有大约8. 5至大约pH 10. 5的 pH〇14. 权利要求1所述的组合物，其中所述水性组合物具有10的pH。15. 权利要求1所述的组合物，其中所述胆汁盐洗涤剂包含选自以下的类固醇酸：牛磺 胆酸、甘氨胆酸、胆酸、脱氧胆酸、石胆酸、鹅脱氧胆酸和其任意组合。16. 权利要求1所述的组合物，其中所述胆汁盐洗涤剂包含钠阳离子。17. 权利要求1所述的组合物，其中所述胆汁盐洗涤剂是脱氧胆酸钠。18. 权利要求17所述的组合物，其中所述脱氧胆酸钠以从大约0. 25%至大约3. 00%的 浓度存在。19. 权利要求17所述的组合物，其中所述脱氧胆酸钠以1%的浓度存在。20. -种水性组合物，其包含pH 10. 0的IOOmM碳酸氢钠、1. 0%脱氧胆酸钠和IM脲。21. -种从热处理的饲料颗粒提取多肽的方法，其包括： 提供包含多肽的热处理的饲料颗粒，所述热处理的颗粒已经经受至少70°C的热处理， 将所述热处理的饲料颗粒与水性溶液接触， 搅拌与所述水性溶液接触的所述热处理的饲料颗粒，和 将所述多肽从所述热处理的饲料颗粒分离到所述含水溶液中。22. 权利要求21所述的方法，其中所述水性溶液包含大约或大于临界胶束浓度水平的 洗涤剂，并且提供温和变性剂，其中所述温和变性剂破坏分子间疏水蛋白质-蛋白质相互 作用。23. 权利要求21所述的方法，进一步包含在具有大约或大于临界胶束浓度水平的至少 一种洗涤剂的水性溶液中创建环境。24. 权利要求23所述的方法，进一步包含将所述热处理的饲料颗粒与温和变性剂接 触，其中所述温和变性剂破坏分子间疏水蛋白质-蛋白质相互作用。25. 权利要求21所述的方法，其中所述搅拌包含涡旋所述含有的热处理的固体和所述 水性溶液。26. 权利要求21所述的方法，进一步包含温育与所述水性溶液接触的所述热处理的固 体。27. 权利要求26所述的方法，其中所述温育包含温和搅拌。28. 权利要求26所述的方法，其中所述温育包含大约20°C至40°C或高达所述多肽的熔 化温度的温度。29. 权利要求26所述的方法，其中所述多肽是酶。30. 权利要求29所述的方法，其中在经受所述方法之后所述酶保持催化活性。31. -种低严格度缓冲液，其包含：大约50mM Tris pH 8. 0、大约0. 01 %吐温20和大 约 IOmM CaCl2。32. -种低严格度缓冲液，其包含：50mM Tris pH 8. 0、0. 01 %吐温20和IOmM CaCl 2。33. -种高严格度缓冲液，其选自： a) 脲缓冲液，其包含大约8. OM脲、大约50mM Tris pH 8. 0 ; b) 胍缓冲液，其包含大约6. OM胍、大约50mM Tris pH 8. 0 ;和 c) mRIPA 缓冲液，其包含大约 50mM Tris pH 7. 6、大约 0. 15M NaCl、大约 0. 1% SDS、大 约〇? 5%脱氧胆酸钠和大约1% Triton X-100。34. -种高严格度缓冲液，其选自： a) 脲缓冲液，其包含8. OM脲、50mM Tris pH 8.0; b) 胍缓冲液，其包含6. OM胍、50mM Tris pH 8.0;和 。)1111?1?4缓冲液，其包含5011111'1^8?117.6、0.1511似(：1、0.1%505、0.5%脱氧胆酸钠 和 1% Triton X-100。35. -种用于测量热处理的颗粒中酶的量的方法，其包括： (a) 提供包含酶添加剂的饲料浆，其中所述酶活性是已知的； (b) 提供从所述饲料浆产生的热处理的颗粒； (c) 用低严格度缓冲液处理所述饲料浆和所述热处理的颗粒并测量通过所述处理提取 的酶活性； (d) 用高严格度缓冲液处理所述饲料浆和所述热处理的颗粒并测量通过所述处理提取 的所述酶的量；和， (e) 测定从所述热处理的颗粒提取的所述酶的酶活性。36. 权利要求35所述的方法，其中所述低严格度缓冲液包含水、大约50mM Tri s pH8. 0、大约 0. 01 %吐温 20 和大约 IOmM CaCl2。37. 权利要求35所述的方法，其中所述低严格度缓冲液包含水、50mM Tris pH 8.0、 0? 01 % 吐温 20 和 IOmM CaCl2。38. 权利要求35所述的方法，其中所述高严格度缓冲液选自：包含8. OM脲、50mM Tris pH 8. 0的脲缓冲液；包含6. OM胍、50mM Tris pH 8. 0的胍缓冲液；和包含50mM Tris pH 7.6、0.1511似(：1、0.1%505、0.5%脱氧胆酸钠和1%1'1^仂11父-100的1111?1?六缓冲液。39. 权利要求35所述的方法，其中所述高严格度缓冲液选自：包含大约8. OM脲、大约 50mM Tris pH 8. 0的脲缓冲液；包含大约6. OM胍、大约50mM Tris pH 8. 0的胍缓冲液；和 包含大约50mM Tris pH 7. 6、大约0. 15M NaCl、大约0. 1%SDS、大约0. 5%脱氧胆酸钠和大 约 1% Triton X-IOO 的 mRIPA 缓冲液。40. 权利要求35所述的方法，其中所述高严格度缓冲液是包含pH10. 0的IOOmM碳酸氢 钠、1.0%脱氧胆酸钠和IM脲的组合物。41. 权利要求35所述的方法，其中所述酶是动物饲料酶添加剂。42. 权利要求35所述的方法，其中所述酶选自：肌醇六磷酸酶、纤维素酶、乳糖酶、月旨 肪酶、蛋白酶、过氧化氢酶、木聚糖酶、0 -葡聚糖酶、甘露聚糖酶、淀粉酶、酰胺酶、环氧化物 酶、酯酶、磷脂酶、转氨酶、胺氧化酶、纤维二糖水解酶、脱氨酶或其任意组合。43. 权利要求35所述的方法，其中所述酶的数量由ELISA测定。44. 一种用于从热处理的固体提取多肽的水性组合物，所述水性组合物包含：选自牛 磺胆酸、甘氨胆酸、胆酸、脱氧胆酸、石胆酸、鹅脱氧胆酸和其任意组合的胆汁盐洗涤剂；选 自脲、胍盐和高氯酸盐的变性剂；碳酸氢盐；和水。45. 权利要求1或权利要求44所述的水性组合物，其中所述热处理的固体是动物饲料 颗粒。
【专利摘要】提供用于从在高温下处理的饲料颗粒提取酶的进料测定和缓冲液。本发明的另一个实施方式是测量从动物饲料提取的酶添加剂的酶活性，测量从动物饲料提取的酶的数量，或者测量二者。在一个实施方式中，酶是动物饲料添加剂，例如肌醇六磷酸酶。
【IPC分类】G01N33/573, C07K1/14
【公开号】CN104968670
【申请号】CN201480006397
【发明人】C·波普, A·I·索巴克, A·休斯顿达文波特
【申请人】巴斯夫酶有限责任公司
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2014年1月28日
【公告号】EP2951194A1, US20150361478, WO2014120638A1