一种高纯度丹酚酸b镁及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种高纯度丹酚酸B镁的制备方法和由此制备的高纯度丹酚酸B镁。 技术背景
[0002] 丹参多酚酸盐是传统活血化瘀中药丹参中的水溶性有效成分，因具有显著的抗氧 化、抗血小板聚集、抗动脉粥样硬化等作用，从而在临床上得到了广泛应用。丹酚酸B镁 (Magnesium Salvianolic acid B，or Magnesium lithospermate B，MLB)是丹参多酌?酸盐 中的主要化学成分。
[0004] 但到目前为止，还未见具有工业化价值的制备高纯度丹酚酸B镁纯化分离方法的 报道。例如：中国专利CN1911272A报道一种高含量丹参多酚酸盐粉针剂及制备方法，但其 丹酚酸B镁的含量仅为50~95%。且由于含量越高、得率越低，要获得95%以上的高纯度 丹酚酸B镁，其工业化生产成本会很高。
[0005] 另外，现有技术中未见以纯度大于95%的基本纯的丹酚酸B镁作为活性成分的药 物。
[0006] 因此，本领域中需要开发一种简单、稳定、得率高的制备丹酚酸B镁的方法，尤其 是需要在制备高纯度（> 95% )丹酚酸B镁的的同时提高得率。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的之一在于提供一种制备丹酚酸B镁的方法，与现有技术方法相比， 用该方法可以提高丹酚酸B镁的得率，尤其是以更高的得率获得高纯度（例如95%以上） 的丹酚酸B镁。具体而言，本发明提供一种丹酚酸B镁的制备方法，其特征在于在添加的镁 盐存在下从丹参药材或丹参提取物中提取或纯化丹酚酸B镁。
[0008] 本发明的另一个目的在于提供一种从丹酚酸B镁产品中除去丹酚酸B镁伴随杂质 的方法，其特征在于在酸性至中性pH条件下用有机溶剂萃取丹酚酸B镁产品的水性溶液。
[0009] 本发明的另一个目的是提供一种药物组合物，其含有药物活性成分和可药用载体 或赋形剂，其中所述药物活性成分是含量大于95% (重量）的丹酚酸B镁，该活性成分中丹 参素和其盐的含量低于0. 5%、紫草酸和其盐的含量低于2. 0%、迷迭香酸和其盐的含量低 于 2. 0%。
[0010] 发明详述
[0011] 现有技术中存在多种从丹参药材中提取丹参多酚酸盐或丹酚酸B镁的方法。发明 人现发现，在这些提取或纯化方法中添加镁盐能够显著提高最终产物丹酚酸B镁的得率。 因此，本发明提供一种一种丹酚酸B镁的制备方法，其特征在于在添加的镁盐存在下从丹 参药材或丹参提取物中提取或纯化丹酚酸B镁。
[0012] 在一个实施方案中，本发明所提供的制备丹酚酸B镁的方法，包括：
[0013]a)将所述丹参药材用第一醇水溶液提取获得丹参提取液，任选地浓缩所述丹参提 取液获得浓缩的丹参提取液；
[0014]b)将所述丹参提取液或所述浓缩的丹参提取液经大孔树脂层析分离，其中用第二 醇水溶液洗脱，收集含有丹酚酸B镁的洗脱液；
[0015] 其中在a)中的第一醇水溶液、b)中的丹参提取液或浓缩的丹参提取液和b)中的 第二醇水溶液的至少一种中添加所述镁盐。
[0016] 在另一个实施方案中，本发明所提供的制备丹酚酸B镁的方法，包括：
[0017]c)将所述丹参提取物经大孔树脂层析分离，其中用第三醇水溶液洗脱，收集合有 丹酚酸B镁的洗脱液。
[0018] 其中在所述丹参提取物和/或所述第三醇水溶液中添加所述镁盐。
[0019] 可用于本发明的镁盐可以是任何不会对本发明产生不利影响的镁盐。在一个具体 实施方案中，所述镁盐包括但不限于下列化合物中的一种或多种：硫酸镁（MgS04)、醋酸镁 -仏。)2)、氯化镁-(：12)、溴化镁（1%81'2)、碳酸镁（1%〇)3)、和碳酸氢镁（1%01〇)3)2)。
[0020] 镁盐的添加量可以为〇?l-500mg每100g丹参药材或丹参提取物。在一个具体实 施方案中，镁盐的添加量为l_300mg每100g丹参药材或丹参提取物，优选5-200mg每100g 丹参药材或丹参提取物，更优选10-150mg每100g丹参药材或丹参提取物，最优选50-100mg 每l〇〇g丹参药材或丹参提取物。
[0021] 根据本发明的方法，所述第一醇水溶液、第二醇水溶液和第三醇水溶液可以相同 或不同，各自独立地选自浓度为0~80 %、5-60 %、10-50 %或20-40 %的Q~C4醇的水溶 液。在一个具体实施方案中，所述第一醇水溶液、第二醇水溶液和第三醇水溶液均为乙醇水 溶液。
[0022] 可用于本发明进行层析分离的大孔树脂包括但不限于下列树脂中的一种或多种： HP20、HPD-80、HPD-100、HPD-100B、HPD-200A、HPD-300、HPD-450、HPD-722、HPD-826、ADS-5、 ADS-8、ADS-21、D101、AB-8、1300-1。
[0023] 在一个实施方案中，根据本发明的方法还可以包括将上述步骤b)或c)中收集的 含有丹酚酸B镁的洗脱液浓缩得到浓缩洗脱液，将所述浓缩洗脱液的pH值调至3~7,再用 有机溶剂萃取得到含有丹酚酸B镁的萃余液。可用于调节所述浓缩洗脱液的pH值的物质 没有特别限制，可以是一种或多种无机酸或有机酸，例如盐酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、三氟乙 酸、甲酸和乙酸中的一种或多种。可用于萃取的有机溶剂可以选自C3-C6的醇、C1-C3羧酸 C1-C6烷基酯或二（C1-C5烷基）醚，更优选可用于萃取的有机溶剂是下列溶剂中的一种或 多种：正丁醇、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、甲基叔丁基醚、乙醚。
[0024] 在一个任选的有利实施方案中，本发明的方法还包括浓缩所述含有丹酚酸B镁的 萃取液，再经醇沉、过滤和干燥得到含有丹酚酸B镁的固体物质。所述醇沉所用的溶剂可以 是乙醇或乙醇水溶液，优选浓度为85~95%的乙醇水溶液。可用于进行所述干燥的方法可 以是喷雾干燥、真空干燥或者冷冻干燥中的一种或多种。
[0025] 另外，本申请发明人还出人意料地发现一些在提取纯化过程中常常伴随丹酚酸B 镁的杂质可以简单地通过水性溶液的有机溶剂提取来除去。
[0026]因此，本发明的另一个方面提供一种从丹酚酸B镁产品中除去丹酚酸B镁伴随杂 质的方法，其中在酸性至中性pH条件下（优选pH3_7)用有机溶剂萃取丹酚酸B镁产品的 水性溶液。所述丹酚酸B镁产品优选为从丹参药材提取获得的丹酚酸B镁的含量大于或等 于50 %的产品，优选丹酚酸B镁含量大于或等于55 %、60 %、65 %、70 %、75 %、80 %、85 %、 90%、95%，该含量低于99%、98%、97%、96%、95%。本发明涉及这些端值组成的任何数值 范围。这里所述的丹酚酸B镁伴随杂质包括丹参素或其盐、紫草酸或其盐以及迷迭香酸或 其盐，例如丹参素钠、丹参素钾、迷迭香酸钠、迷迭香酸钾、紫草酸二钾、紫草酸镁等。这些物 质与丹酚酸B镁属于同系物，理化性质非常接近。在不显著损失丹酚酸B镁的前提下通过 有机溶剂提取实质性除去这些性质相近的杂质确实是出人意料的。可用于萃取的有机溶剂 优选选自C3-C6的醇、C1-C3羧酸C1-C6烷基酯或二（C1-C5烷基）醚，更优选地，所述有机 溶剂为选自正丁醇、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、甲基叔丁基醚、乙醚中的一 种或多种。
[0027] 本发明的另一个目的是提供一种根据本发明的方法制备的高纯度丹酚酸B镁产 品，其中所述高纯度丹酚酸B镁产品包括以重量计大于95%、优选大于96%、更优选大于 97%、最优选大于98%的丹酚酸B镁。在一个实施方案中，所述高纯度丹酚酸B镁产品包括 以重量计小于或等于5%，优选小于或等于4%，更优选小于或等于3%，最优选小于或等于 2 %的杂质，所述杂质包括丹参素、紫草酸和迷迭香酸中的一种或多种。
[0028] 本发明的另一方面提供一种药物组合物，其含有药物活性成分和可药用载体或 赋形剂，其中所述药物活性成分是从丹参药材提取获得的含量大于95% (重量）的丹酚 酸B镁产品，该产品中丹参素和其盐的含量低于0. 5%，优选低于0. 4%、低于0. 3%、低于 0. 2 %、低于0. 1 %、低于0. 05 % ;紫草酸和其盐的含量低于2. 0 %，优选低于1. 5 %、低于 1. 〇%、低于0. 9%、低于0. 8%、低于0. 7%、低于0. 6%、低于0. 5%、低于0. 4%、低于0. 3、 低于0. 2%、低于0. 1% ;迷迭香酸和其盐的含量低于2. 0%，优选低于1. 5%、低于1.0%、 低于0. 9 %、低于0. 8%、低于0. 7%、低于0. 6%、低于0. 5%、低于0. 4%、低于0. 3、低于 0. 2 %、低于0. 1 %。优选地所述丹酚酸B镁产品中丹参素和其盐的含量高于0. 01 %、紫草 酸和其盐的含量高于〇. 1%、迷迭香酸和其盐的含量高于〇. 1%。优选所述药物组合物中 丹酚酸B镁产品中丹酚酸B二钾盐的含量低于0. 5 %，优选低于0. 3 %，更优选低于0. 1 %。 所述药物组合物中所述丹参酚酸B镁产品中丹酚酸B二钾盐的含量可以高于0. 01 %，高于 0. 05%，或高于0. 1%。优选地本发明的药物组合物的丹酚酸B镁产品中丹酚酸B游离酸的 含量低于1 %，优选低于〇. 5 %，优选低于0. 3 %，更优选低于0. 1 %。所述药物组合物中所述 丹参酚酸B镁产品中丹酚酸B游离酸的含量可以高于0. 01%，高于0. 05%，或高于0. 1%。 在上述涉及某一成分的上限和下限值时，本发明涉及任一上限值与任一下限制组成的数值 范围。最优选地，本发明药物组合物中的丹酚酸B镁产品是通过本发明中描述的方法制得 的。
[0029] 丹酚酸B镁可以用于治疗心血管疾病，例如用于治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞和 缺血性中风等。
[0030] 本发明获得的高纯度丹酚酸B镁除去了生物活性较弱的现有技术中难以除去的 杂质如紫草酸镁、迷迭香酸钠等。而且本发明发现，丹酚酸B镁具有良好的稳定性，与游离 的丹酚酸B相比对心脏的毒性更低，而且在延长大鼠尾出血时间的实验中，丹酚酸B镁体现 出优于游离酸（丹酚酸B)、其它盐（丹酚酸B二钾）和低纯度混合