从废白陶土中提取β-谷甾醇的方法及薄层层析检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从油脂加工废白陶土中提取β-谷留醇的方法及薄层层析检测方法。
【背景技术】
[0002]留醇是一种留族化合物，包括植物留醇、动物留醇和菌类留醇三大类。其中植物甾醇是一种天然活性物质，广泛存在于自然界的植物中。天然的植物留醇主要包括谷甾醇、豆留醇、菜籽留醇和菜油留醇四种，其中玉米油中以谷留醇含量最大。
[0003]大量试验结果显示，谷留醇等植物留醇具有重要的生理活性:①能有效降低血清中胆留醇(无论是游离型还是酯型)水平，起到预防和治疗高血压、冠心病等心血管疾病的作用；②能促进产生血纤维蛋白溶酶原激活因子，可作为血纤维溶解触发素，起到预防血栓症的作用具有抗炎作用具有类似乙酰水杨酸(阿斯匹林)的退热效果；⑤具有阻断致癌物诱发癌细胞形成的功能，抗癌效果显著；?分子结构使其具有较强的皮肤渗透性，促进皮脂分泌和温和保持水分，维持润湿、柔软的生理活性和表面活性。
[0004]谷甾醇等植物甾醇在医药领域、化妆品工业、饲料工业、食品中应用广泛。在日本，已出现含60%的谷留醇和生育酚混合的药品，作为降低血清胆固醇的商品出售。由谷留醇掺入其他药物成分制成的复方谷留醇片，有很好的降血清胆固醇及降血脂作用，能防止动脉粥样硬化的发展，对高血脂症、冠状动脉硬化性心脏病、胸闷、心t季等均有治疗作用。另外，谷留醇软膏在治疗宫颈癌、皮肤癌方面显示出一定的优越性。
[0005]废白陶土作为油脂加工过程中产生的一种下脚料，目前对于其研宄较少，多作为废弃物直接丢弃。如果能从中提取分离出谷留醇，并对其开发利用，其经济效益、社会效益会十分显著，具有广阔的开发前景。
【发明内容】
[0006]针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种从油脂加工废白陶土中提取β -谷甾醇的方法及薄层层析检测方法。
[0007]为实现上述目的，本发明采用下述技术方案:
[0008]一种从废白陶土中提取谷甾醇的方法，步骤如下:
[0009](I)将油脂加工工艺中使用后的废白陶土采用丙酮进行提取，过滤，蒸除丙酮，得油状物；
[0010](2)将步骤(I)的油状物用5% (体积百分数)的浓硫酸-乙醇溶液进行水浴加热，回流提取，蒸除溶剂，再加入80% (体积百分数)的乙醇溶液、氢氧化钠，加热回流皂化，向皂化后的液体中加入去离子水、石油醚，震荡萃取，分层后取石油醚层，重复萃取，合并萃取液，并用去离子水洗涤至中性，蒸除石油醚，即得谷留醇提取物。
[0011]步骤⑴中，丙酮的加入量为废白陶土的2-4倍质量体积(即每克废白陶土中加入丙酮的量为2-4mL);优选的，丙酮的加入量为废白陶土的3倍质量体积。
[0012]步骤(I)中，加入丙酮进行提取的次数为3次。
[0013]步骤⑵中，浓硫酸-乙醇溶液的加入量与油状物的比为(8_12)mL:lg，优选为1mL:1g ;乙醇溶液的加入量与油状物的比为(3-8)mL: lg，优选为5mL:1g ;氢氧化钠的加入量与油状物的质量比为5: (16-17)。
[0014]步骤(2)中，加入浓硫酸-乙醇溶液进行水浴加热的温度为80°C，回流提取的时间为6小时。
[0015]步骤(2)中，加热回流皂化的温度为80°C，时间为2小时。加热回流皂化的温度和时间对皂化的效果都会产生影响，皂化温度过高会使目标物质分解，皂化温度过低，会延长皂化的时间，采用本发明的皂化温度和皂化时间，皂化效果最为理想。
[0016]步骤(2)中，震荡萃取时，去离子水和石油醚的加入量均与皂化后的液体体积相同。
[0017]本发明还提供了一种谷甾醇的薄层层析扫描检测方法，步骤如下:
[0018](I)将谷甾醇提取物用无水乙醇溶解，制成样品液，将谷甾醇标准品用无水乙醇溶解，制成标准液；
[0019](2)将不同质量的谷留醇标准液和样品液分别点于同一块高效薄层硅胶板GF254上，加入展开剂，预平衡，后将娃胶板放入展开缸，上行展开，展距达到8 cm时取出晾干，随后染色液冲洗染色，烘干显色；
[0020](3)薄层扫描仪进行薄层扫描，得到β-谷留醇Rf(比移值)和峰面积积分值；由薄层色谱仪管理软件WinCATS 1.4.1得出β -谷留醇标准液质量和峰面积积分值关系，根据样品液的峰面积积分值计算出样品液β-谷留醇的质量。
[0021]步骤⑵中，不同质量的β -谷甾醇标准液为6种质量梯度，分别为50ng， 10ngj 150ng，300ng，350ng，400ng。
[0022]步骤⑵中，展开剂为正己烷:乙醚:氯仿:乙酸:甲苯，体积比例为(3?5): (0.5?1.5): (2?4): (0.1?0.3): (I?2)。展开剂是影响薄层检测结果的关键因素，本发明对展开剂的组成和配比进行了多次的筛选和优化，采用本发明的展开剂，能够有效的实现目标物质的分离，目标物质的&值适宜。
[0023]步骤(2)中，所述染色液是由磷钼酸和乙酸按lg:20mL混合而成。
[0024]本发明的有益效果:
[0025](I)本发明系首次从油脂加工过程中产生的废白陶土中提取得到谷甾醇，提取方法简单，可实现废物的再利用，具有较高的经济和环保效益；本发明还提供了一种
谷留醇的检测方法，具有简单、快速、准确、稳定等优点，可用于任何一种含谷甾醇的原材料、产品和副产品中谷留醇含量的检测，在谷留醇开发中具有广泛、重要的应用价值。
[0026](2)采用本发明的方法提取谷甾醇后的废白陶土，可以重新用于油脂的加工工艺过程。
【具体实施方式】
[0027]下面通过具体实例对本发明进行进一步的阐述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。
[0028]实施例1:废白陶土中β_谷甾醇的提取及检测
[0029](I) 谷甾醇的提取
[0030]称取玉米油脱色工艺中产生的废白陶土 50g，加150ml丙酮，提取3次，静置分层，合并提取液后蒸除丙酮得油状物16.575g?向油状物中加入180ml 5% (体积百分数)浓硫酸-乙醇溶液，80°C水浴加热，回流反应6小时；蒸除溶剂，加入50ml 80% (体积百分数)乙醇液和5g似0!1，80°0加热回流皂化211。分别加与皂化液相同体积的去离子水、石油醚，震荡萃取，分层后取石油醚层，如此反复三次。合并萃取液，加去离子水洗至中性，石油醚层旋转蒸发去除石油醚，得到β -谷留醇提取物，加无水乙醇定容得样品液9.6ml。
[0031](2) β-谷甾醇的检测
[0032]精密称取β-谷甾醇标准品(Sigma公司)0.2mg，加入无水乙醇定容至2ml，制成浓度为0.lmg/ml的标准液。精密吸取0.5，1，1.5，3，3.5，4ul β -谷甾醇标准液及2.5ul样品液点于同一块高效薄层娃胶板GF254 QOcmX 1cm)上，加入1ml展开剂，展开剂为正己烷:乙醚:氯仿:乙酸:甲苯=4:1:3:0.2:1.5 (V/V/V/V/V)，预平衡20分钟，将板放入展开缸(12011\150]1\100]1)，上行展开，展距8 011，取出晾干，用1ml染色液冲洗染色，染色液配方为:磷钼酸:乙酸=5g:100ml, 105°C烘干显色5min，可见标准品和样品在同一水平上两个点对齐且均被染成蓝色，利用Camag 3型薄层扫描仪在650nm吸收波长下进行薄层层析扫描，扫描速度为20mm/s，数据分辨率为50um/st印，得Rf= 0.38，照射灯为钨灯，进行检测计算，以谷留醇标准品的质量(ng)为横坐标(X)，峰面积积分值(AU)为纵坐标(Y)，由薄层色谱仪管理软件winCATS 1.4.1直接得到标准品与峰面积积分值关系的回归方程:
[0033]Y = 6959.4165+53.9858X，r = 0.99938，RSD = 1.60%。
[0034]结果表明，样品液在50?400ng范围内线性良好，2.5ul样品液中β