一种牛樟芝化合物组分分离提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食(药）用菌活性组分分离提取技术领域，具体设及一种牛憧芝化合物 组分分离提取方法。
【背景技术】
[0002] 牛憧芝又名牛憧茹，属于非權菌目、多孔菌科、薄孔菌属、多年生葦菌类，拉了名 为Antrodiacamphorata，是1990年才被生化界发表的新种。其生长区域为台湾山区海拔 450-2000米山林间，只生长在台湾特有百年W上的牛憧树树干腐朽之屯、材内壁，或枯死倒 伏之牛憧树木材潮湿表面，野生憧芝生长期在每年六至十月，采集极为不易。牛憧芝额的子 实体形态多变化，有板状、钟状、马蹄状或塔状；初生时鲜红色，渐长变为白色、淡红褐色、淡 褐色或淡黄褐色。牛憧芝气芳香味辛苦、平。有枯风行气、化渺活血、温中消结、解毒消肿、 镇静止痛、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、提升机体免疫力之效；对于治疗胃肠疼痛、腹泻呕吐、食物 中毒、毒葦中毒、糖尿病、酒精肝、脂肪肝、肝硬化、肝癌等更是有独特功能。牛憧芝是有许多 的生理活性成分，如多糖体、=祗类化合物、超氧歧化酶、腺巧、蛋白质（含免疫蛋白）、维生 素、微量元素、核酸、凝集素、氨基酸、纤维素、血压稳定物质等。牛憧芝的有效成分中W= 祗类化合物为最特别，是其他茹菌无法相比的，=祗类化合物使牛憧芝具有抗癌、保肝等功 效。由于憧芝在台湾被视为独特而珍贵的药用真菌，因此具有极高的研究和商业价值，也是 目前台湾最昂贵的野生真菌，在港澳被称为"神芝"，台湾誉为"森林中的红宝石"。
[0003] 研究表明，牛憧芝成分有多糖、祗类、酱体类化合物、马来酸及班巧酸衍生物 等主要活性化合物，具有护肝、抗癌、调节免疫、去过敏、解毒和抗炎等功效。其中多醋 (Polysaccharides)，牛憧芝在子实体含有多醋体，具有免疫生理活性、预防及控制肿瘤等 生理活性，主要含e-D-glucan(e-D-葡聚糖））其作用是透过激发巨瞻细胞、T淋己细胞、 B淋己细胞W及自然杀手细胞等来增强免疫功能，进而达到抗肿瘤的效果。憧芝多醋体中 有强屯、、降血压、降血糖等功效。=祗类化合物（Te巧enoids)，=祗类化合物是目前憧芝 子实体发现最多的祗类化学成分，一般被认为牛憧芝萃取物中苦味成份的主要来源。其中 多达10多种新发现=祗类为憧芝所独有，实验证实；该些=祗类化合物能抑制肝癌细胞的 增殖、毒杀老鼠血癌（P-388murineleukemia)细胞活性、抗副交感神经作用、抗血清素活 性、活化神经细胞生长能力等功能；比多醋体扮演着更重要的抗肿瘤活性调节角色。高血 压患者往往因为血压高，导致脑血管破裂而中风，S祗类化合物能有效的抑制Angiotensin ConveningEnzyme(AC巧的活性，进而降低血糖。e-D-葡聚醋具有预防肿瘤的免疫生理活 性，增强人体免疫功能，具有抗过敏的作用，帮助调解高血糖。近年来牛憧芝的药理作用得 到医学界的广泛重视，提取分离牛憧芝化合物组分，研制开发新技术新产品前景十分广阔。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种牛憧芝化合物组分分离提取方法，具有有效活性组分分 离效果好，纯化纯度高，成分不易被分解破坏、无有害化学试剂和重金属残留、提取效率高 等优点。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种牛憧芝化合物组分分离提取方法；W牛憧芝子实体粉或菌丝体为原料，采用酶解、 超临界C〇2萃取、离子交换色谱、膜分离超滤和层析法纯化相结合的技术实现牛憧芝化合物 组分的分离提取。
[0006] 具体步骤如下： (1) 将合格牛憧芝干燥至水分含量《8%，粉碎，过20-30目筛； (2) 将牛憧芝粉用纯化水浸泡，料液比为1 ;10-12,调节抑=4. 5-5. 5,温度50-60°C，时 间化；加入淀粉酶和木聚糖酶，揽拌均匀，超声辅助酶解2-化；将料液升温至100°C，灭酶 2-3min，然后将料液采用100目膜过滤，得酶解提取液（1); (3) 在步骤（2)的滤渣中加入其重量10倍的纯化水，揽拌均匀，再加入纤维素酶，酶解 2-3h，将料液升温至100°C，灭酶2-3min，然后将料液采用100目膜过滤，得酶解提取液（2); (4) 将酶解提取液（1)和酶解提取液（2)合并，混合均匀，0. 09MI^a减压浓缩至可溶性固 形物含量为10-12%，浓缩液的浓度化ix=16. 0-18. 0〇/〇 ; (5) 将浓缩液采用超临界C〇2萃取，条件为；萃取蓋压力25-30MPa，萃取温度50-55°C， 分离温度40°C，I级分离蓋压力8-lOMPa，II级分离蓋压力6MPa，C〇2流速2-2.化/min,萃取 时间4-化，分离蓋收集得到牛憧芝化合物组分的综合萃取物； (6) 采用离子交换色谱和凝胶层析进行分离，吸附部分得a-葡聚糖巧酶，未吸附部分 得0-葡聚糖巧酶； (7) 采用膜分离超滤技术分离提取纯多糖部分； (8) 采用硅胶薄层层析分离，经脱水分馈，得=祗类化合物。
[0007] 步骤（2)中所述的淀粉酶的酶活力为20万U/g，木聚糖酶的酶活力为12万U/g， 用量分别为牛憧芝粉重量的0. 1-0. 2% ;超声波频率为25-30曲Z。
[000引步骤（3)中所述的纤维素酶的酶活力为20万U/g，用量为滤渣重量的0. 2-0. 3%。
[0009] 步骤（6)的具体步骤如下；（1)将葡聚糖凝胶在7-10倍量的蒸馈水中充分溶胀 1-2小时；（2)将凝胶装填入垂直的层析柱中，柱长100cm，直径5cm; (3)萃取物浓缩液体积 为凝胶总床体积的15%-20%，萃取物浓缩液与洗脱液的相对粘度为1. 5-2。
[0010] 步骤（7)的工艺参数如下：超滤膜为中空纤维式纳米膜，中空纤维外径 0. 4-2. 0mm，内径0. 3-1. 4mm，过滤精度0. 005-0. 01ym;超滤温度为25°C，抑值接近浸提介 质的抑，超滤压力为0. 15-0. 18MPa。
[0011] 步骤（8)的具体步骤如下；（1)用95wt. %己醇溶液浸溃化，温度40-45°C，回流2 次，将体积比为10 ;3 ;1的甲苯-己酸己醋-己酸作为展开剂；（2)采用梯度洗脱，收集的规 格；上液量200g，200-300目的硅胶50g，50ml收一馈分。
[0012] 本发明的显著优点在于：本发明具有有效活性组分分离效果好，纯化纯度高，成分 不易被分解破坏、无有害化学试剂和重金属残留、提取效率高等优点，可W同时脱除多糖液 中的盐分和水，实现对多糖和=祗类化合物稀溶液的纯化和分离，作为新原料、中间体应用 于功能食品、保健食品、药品、化妆品等产业的研究开发。本发明具有很高的工业应用价值， 是一项既环保、经济又可工业化生产的现代生物医药活性物质的制备技术。
【附图说明】
[0013] 图1是本发明的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0014] 实施例1;牛憧芝组分分离 原料；牛憧树极木为培养基材栽培的牛憧芝。培养时间为二年。
[00巧]步骤； (1)将牛憧芝子实体净选除杂，干燥至水分《8%，粉碎20-30目，称量牛憧芝子实体粉 碎粉lOOOg。
[0016] (2)将步骤（1)的牛憧芝粉粹粉，按料液比为1 ;10-12,调节pH4. 5-5. 5,温度 50-60°C，用纯化水浸泡化后，再加入淀粉酶1. 5g和木聚糖酶1. 5g，揽均，酶反应2-化。所 述的淀粉酶酶活力为20万U/g，木聚糖酶酶活力为12万U/g，用量分别为粉粹粉重量的 0. 15%;上述酶解过程在超声辅助条件下进行，超声波频率25-30曲Z。酶解反应后将料液升 温至100°C，灭酶2-3min，然后将料液采用100目膜过滤，得酶解提取液（I)备用。
[0017] (3)将步骤（2)的滤渣加纯化水10倍，加入纤维素酶2.5g，反应2-化，所述的纤维 素酶，酶活力为20万U/g，用量为滤渣重量的0.25%。酶解反应后将料液升温至100°C，灭 酶2-3min，然后将料液采用100目膜过滤，得酶解提取液（II)备用。
[001引（4)将步骤（2)的酶解提取液（I)和步骤（2)的酶解提取液（II)合并，进 行混合均匀浓缩，压力0. 09MPa，减压浓缩至可溶性固形物含量为10-12%，浓缩液的浓度 化ix=16. 0-18. 00/0。
[0019]