一种表皮生长因子受体egfr抑制剂及其制备方法与用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药领域，具体涉及一种表皮生长因子受体EGFR抑制剂及其制备方 法和用途。
【背景技术】
[0002] 表皮生长因子受体EGFR(EpidermalGrowthFactorReceptor)是ErbB受体家族 的一种，是一种糖蛋白，属于酪氨酸激酶型受体，细胞膜贯通，分子量170KDa。EGFR位于细 胞膜表面，与配体结合激活EGF和TGF(transforminggrowthfactor)。激活后，EGFR由 单体转化为二聚体后激活它位于细胞内的激酶通路，引导下游的磷酸化，包括MPAK，Akt和 JNK通路，诱导细胞增殖。研究表明在许多实体肿瘤中存在EGFR的高表达或异常表达，EGFR 与肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关。EGFR的过表达在恶 性肿瘤的发展中起重要作用，肾癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、胶质细胞瘤等组织中 都有EGFR的过度表达。
[0003] 蛋白质酪氨酸激酶是一类将ATP的磷酸基团转移到蛋白质底物的酪氨酸残基的 酶。许多生长因子受体蛋白包括表皮生长因子受体通过磷酸化而起作用，表皮生长因子受 体EGFR酪氨酸激酶使表皮生长因子受体磷酸化，临床上，EGFR酪氨酸激酶抑制剂已被用于 癌症的治疗，如吉非替尼、厄洛替尼被用于治疗非小细胞肺癌取得了一定的疗效。
[0004] 然而许多肿瘤中存在有变异型的EGFR酪氨酸激酶，或则药物治疗后 EGFR酪氨酸激酶发生突变，从而使药物失效、S卩临床上表现出耐药性或则抗药 性。2004年即有在吉非替尼对非小细胞肺癌治疗中出现了EGFR酪氨酸激酶突变 的报道（Science, 2004,Vol. 304,1497-1500;NewEnglandJournalofMedicine 2004, 350, 2129-2139)。其中一种变异发生在EGFR酪氨酸激酶的守门残基790位点，由原 来在该位点的L-苏氨酸（T)为L-甲硫胺酸（M)替代，被称为T790M变异，变异后EGF酪氨 酸激酶R不再与吉非替尼、厄洛替尼结合，从而使药物失去效果，病人出现耐药性。
[0005] 综上所述，开发去除或降低耐药性产生的抗癌药物非常必要。
【发明内容】
[0006] 本发明针对T790M变异的EGFR酪氨酸激酶，设计了一系列的抑制剂分子，发现了 对T790M变异EGFR具有高抑制活性的化合物，并且该化合物对癌细胞具有明显的抑制作 用，这种化合物是一种新的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂，包含a，(6-不饱和羧酸 酰胺类化合物或其药学上可接受的盐，该抑制剂可以对T790M/L858R变体EGFR实现高活性 抑制，并可以抑制或杀灭EGFRT790M变异的肿瘤细胞，有望成为一种治疗相关肿瘤的方法。
[0007] 本发明提供的一种具有通式（I)结构的表皮生长因子受体EGFR抑制剂及其药 学上可接受的盐，该类化合物含有a，(6-不饱和羧酸酰胺结构，其可作为一种不可逆EGFR 抑制剂，
[0008]
[0019] 本发明还提供了上述表皮生长因子受体EGFR抑制剂的制备方法，如Scheme1所 示，该方法包括以下步骤：起始原料经多步常规化学反应得到中间体II，中间体II依次经 过加氢还原、酰化，或依次经过亲核取代、加氢还原、酰化，最后得到相应的通式（I)化合 物。
[0020] Scheme1通式I化合物的合成与制备
[0021]
[0022] 本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含上述表皮生长因子受体 EGFR抑制剂或其药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体。
[0023] 所述药物组合物为片剂、胶囊、颗粒剂或注射剂的形式。
[0024] 所述药学上可接受的载体选自填充剂、崩解剂、粘合剂和润滑剂中的一种或多种， 包括但不限于任何和全部的溶剂、分散介质、包衣、吸收延迟剂等，这样的介质和药剂用于 药学活性物质在本领域是众所周知的。
[0025] 本发明还提供了所述表皮生长因子受体EGFR抑制剂或其药学上可接受的盐作为 蛋白酪氨酸激酶抑制剂的用途；
[0026] 优选地，所述蛋白酪氨酸激酶抑制剂为表皮生长因子受体抑制剂；
[0027] 更优选地，所述表皮生长因子受体抑制剂为对T790M变异的表皮生长因子受体的 抑制剂。
[0028] 本发明还提供了所述表皮生长因子受体EGFR抑制剂或其药学上可接受的盐或所 述药物组合物在制备用于治疗表皮生长因子受体过度表达相关疾病的药物中的用途；
[0029] 优选地，所述表皮生长因子受体过度表达相关疾病选自如肾癌、肺癌、前列腺癌、 胰腺癌、乳腺癌和胶质细胞瘤中的一种或多种。
[0030] 本发明提供的表皮生长因子受体EGFR抑制剂或其药学上可接受的盐，以及其药 物组合物，可以有效地抑制T790M/L858R变异的表皮生长因子受体，解决在EGFR靶向药物 如吉非替尼、厄洛替尼片对肿瘤治疗中的耐药性，在体外酶学试验中，具有通式（I)的化合 物对激酶的抑制活性达到了IC50 = 0.OOlyM(参见表2);在体外细胞实验中，具有通式 (I)的化合物对癌细胞株NCI-H1975、A549都表现出较强的杀灭活性（参见表3)，有望成为 一个更有效的治疗表皮生长因子受体过度表达相关疾病如肾癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、 乳腺癌、胶质细胞瘤等的药物，从而有望解决EGFR靶向治疗药物中的抗药性问题。另外，本 发明化合物制备工艺简单，理化性质好，质量稳定，易于进行大规模工业化生产。
【具体实施方式】
[0031] 以下通过具体的实施例进一步说明本发明。
[0032] 制备具有通式（I)的化合物的方法包括：起始原料经多步常规化学反应得到中间 体II，中间体II依次经过加氢还原、酰化，或依次经过亲核取代、加氢还原、酰化，最后得到 相应的通式（I)化合物。值得说明的是，通式（I)化合物包括但不限于下述列举的化合物。
[0033] 实施例1 :2-{4_氟-2-甲氧基-5-【N，N-二甲胺甲基-(E)-丙烯酰胺基】}苯胺 基-4-(1-甲基-3-吲哚基）嘧啶（化合物101)的制备
[0037] 将2, 4-二氯嘧啶（450g，3. 02mol)溶于乙二醇二甲醚（6L)中，于冰浴下搅拌，分 批加入三氯化铝，之后于室温下搅拌反应半小时。滴加N-甲基吲哚（400g，3. 05mol)。之后 加热至80°C搅拌反应4小时。液相色谱-质谱联用（LCMS)检测反应完全。停止反应，降至 室温，将反应液缓缓导入冰水中（18L)，迅速搅拌，析出大量橘红色固体，抽滤，用冷水洗涤 滤饼三遍，所得滤饼烘干，得淡红色固体粗品。所得粗品溶于二氯甲烷中（2ml/g)，于室温搅 拌半小时，至呈均匀的悬浮状固体，抽滤，少量冷二氯甲烷洗涤滤饼，烘干，得纯品400g。淡 黄色固体，纯度：99%，收率：54%。LC-MS(ESI):m/z 244(M+H)+。
[0038] 4_氣-2-甲氧基苯胺的制备
[0039]
[0040] 将5-氟-2-硝基苯甲醚（500g，2. 92mol)溶于乙醇（2. 4L)和水（0? 8L)中，加入 氯化铵（78g，I. 46mol)，搅拌下加热至80°C，分批加入还原铁粉，控制反应温度低于85°C， 搅拌反应3小时。LCMS检测反应完全。停止反应，降至室温，过滤，少量乙醇洗涤滤饼，滤液 浓缩。所得残余物溶于乙酸乙酯（IL)中，少量水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液降压浓 缩，干燥，即得产品408g，棕褐色液体，纯度：92%，收率^gHX-MS(ESI) :m/z142 (M+H)+。
[0041] 4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺的制备
[0042]
[0043] 将4-氟-2-甲氧基苯胺（400g，2. 83mol)溶于浓硫酸中，于冰浴下搅拌，之后分批 加入硝酸钾（372g，3. 68mol)，于冰浴下搅拌反应两小时。LCMS检测反应完全。停止反应， 用30%氢氧化钠水溶液调pH至呈中性（pH= 7)，析出大量固体，抽滤，少量冷水洗涤滤饼， 所得粗品干燥，即得产品。棕褐色固体，134g，纯度：93%，收率：25.4%。LC-MS(ESI) :m/z 187(M+H)+〇
[0044] 2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基）苯胺基-4-(1-甲基-3-吲哚基）嘧啶（中间体 A)的制备
[0046] 将3-(2-氯-4-嘧啶基）-1-甲基吲哚（1188,0.485!11〇1)溶于正丁醇（1.51)中， 于室温下搅拌，加入4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺（90g，0. 485mol)和对甲苯磺酸（100g， 0. 582mol)，之后加热至105°C，搅拌反应两小时。LCMS检测反应完全。停止反应，冷却至 室温，将反应液抽滤，少量冷乙醇洗涤，滤饼干燥，得淡黄色固体130g，纯度：98%，收率： 68%。LC-MS(ESI) :m/z394(M+H)+。
[0047] 2-(4-氟-2-甲氧基-5-胺基）苯胺基-4-(1-甲基-3-吲哚基）嘧啶的制备
[0048]
[0049] 将2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基）苯胺基-4-(1-甲基-3-吲哚基）嘧啶（310mg， 0. 788mmol)溶于甲醇（5ml)和四氢咲喃（2ml)中，加入10%Pd/C(50mg)，用氢气置换三遍， 之后于40Psi氢气压下，搅拌反应约2小时。LCMS检测反应完全。滤除钯炭，少量甲醇洗 涤滤饼，滤液减压浓缩干燥，得灰色固体，280mg，纯度：95%，收率：96%。LC-MS(ESI) :m/z 364 (M+H)、
[0050] 2_{4_