动物融合重组型干扰素的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明关于一种动物融合重组型千扰素,特别是关于一种具有抗动物病毒活性的 融合重组型干扰素。
【背景技术】
[0002] 千扰素最早是在1957年由英国学者AlickIsaacs和JeanLindenraann在进行流 感病毒试验中所发现，当细胞遭受病毒感染后位即制造一种细胞激素，诱发邻近细胞产 生抗病毒蛋白，干扰病毒的复制。该细胞激素隨后被命名为〒扰素（Interferon,IFN)。干 扰素的抗病毒作用，主要是由第一型千扰素（IFNa/|3)所负责。干扰素除了具有抗病毒 作用外,还具有抗肿瘤、促进细胞分化和免疫调节等功用。
[0003] 目前市面上的干扰素刺剂j为针对人类所开发设计肩如：用来治疗人类B型与 C型肝炎等病毒性疾病以及卡波西氏瘤（Kaposi'ssarcoma,KS)、黑色素神瘤（malignant meIanoma)等肿瘤疾病上的干'扰素。
[0004] 至于经济动物方面，以干扰素治疗病毒性疾病的情形并不普遍。若无有效的疫苗 来预防某一动物病毒，当畜群受该病毒感染时，只能使用支持性疗法处理，但效果往往不 彰，而造成畜牧业重大损失；因此，动物干扰素的开发，对动物保健产业而言说是刻不容 缓且极为重要的事。
【发明内容】
[0005] 本发明于第一部份中提供一种动物融合重组型干扰素。由于干扰素属于小分子蛋 白质，在体内半衰期短（约2-8小时）且不稳定，因此本发明所提供的动物融合重组型千扰 素是将动物干扰素蛋白与半衰期较长的动物免疫球蛋白IgG…Fc片段融合，而形成较稳定 的动物融合重组型干扰素。于一较佳实施例中^该动物干扰素蛋白以及该动物免疫球蛋白 IgG-Fc片段是以由甘氨酸（Glycine,G)及丝氨酸（Serine,S)组成的连接子（linker)所连 接起来的。
[0006] 于一实施例中，该干扰素蛋白为猪干扰素a，该猪干扰素a系与如SEQID Nos: 2、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45 及 47 所示之氨基酸序列其中至 少一者具有至少80%序列同源性，较佳者,具有85%序列同源性,更佳者,具有90%序列同 源性，甚至是91 %、92 %、93 %、94 %、95 %、96 %、97 %、98 %、99 %序列同源性。于一较佳实 施例中，该猪干扰素a选自于由如SEQIDNos:2、17、19、21、23,25、27、29、3i、33、35、37、 39、41、43、45及47所示之氨基酸序列所组成之群组中至少一者。
[0007] 于一实施例中，该动物免疫球蛋白IgG-Fc片段为猪免疫球蛋白IgG-Fc片段，该猪 免疫球蛋白IgG-Fcjt段与如SEQID免8:4、49、51、53及55所示之氨基酸序列其中至少 一者具.句主少80%序列同源性，较佳者，具有85%,)予列同源性,史.彳虫者，具.句90%,丨予列同源 性,甚至是91 %、92 %、93 %、94%、95 %、96 %、97 %、98 %、99 %序列同源性。于一较佳实施 例中，该猪免疫球蛋白IgG-Fc片段选自于由如SEQID?^:4、49、51、53及55所示之氨基 酸序列所组成之群组中至少一者。
[0008] 于一实施例中，该连接子系与如SEQIDN〇:6所示之氨基酸序列具有至少80% 序列同源性，较佳者，具有85%序列同源性，更佳者，具有90%序列同源性，甚至是91 %、 92 %、93 %、94 %、95 %、96 %、97 %、98 %、99 %序列同源性。于一较佳实施例中，该连接子具 有如SEQIDNo:6所示之氨基酸序列。
[0009] 于一实施例4v该动物融合重组型干扰素系与如SEQIDNos:8、57、59、61、63、65、 67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、 113、115、117、119、121、123、125、127、129、131'133、135、137、139、141、143、145、147、149、 15i、！53、155、i57、159、i6U163、i65、167、169U7iJ_73、175、177、：l79J_81、183、185、：l87、 189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221 及 223 所示 之氨基酸序列其中之一具有至少80%序列同源性；较佳者，具有85%序列同源性，更佳者， 具有90 %序列同源性，甚至是91 %、92 %、93 %、94 %、95 %、96 %、97 %、98 %、99 %序列同 源性。于一较佳实施倒中，该动物融合重组型干扰素系选自于由如SEQIDNos:8、57、59、 61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、 109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、 147a49、15i、153、155a57、159、161、i63、165、167、169、i71、173、175、177、i79、181、183、 185、187,189、19i,193、195,197、199,20i、203,205、207,209、21i,2〗_3、215,2〗_7、219,22i及 223所示之氨基酸序列所组成之群组。
[0010] 本发明于第二部分中提供一种编码上述动物融合重组型干扰素的多核昔酸。本发 明所提供之动物融合重组型干扰素是藉由基因转殖技术而得。首先将编码动物干扰素蛋白 的DNA序列，以及编码动物免疫球蛋白IgG-Fc荇段的DNA序列选殖到表现载体系统中，形 成含有编码动物融合重组型干扰素之DNA序列的质体，再将该质体转殖到表现系统札经 诱导蛋白质表现后而得到动物融合重组型干扰素。
[0011] 于一较佳实施例中，除了将编码动物干扰素蛋白的DNA序列以及编码动物免疫球 蛋白IgG-Fc片段的MA序列选殖到表现载体系统中，并将编码南甘氨酸及丝氨酸组成的连 接子（linker)的DNA序列选殖到该表现载体糸统屮，以连接该编码动物十扰系；蚩白的MA 序列以及编码动物免疫球蛋白IgG-Fc片段的DNA序列。
[0012] 于一实施例中，该编码动物干'扰素蛋白的DNA序列系与如SEQIDNos: 1、16、18、 20、22、24、26,28、30、32、34、36、38、40、42,44 及 46 所示之DM序列其中至少一者具有至 少80 %序列同源性，较佳者，具有85 %序列同源性，更佳者，具有90 %序列同源性,甚至是 91 %、92 %、93 %、94 %、95 %、96 %、97 %、98 %、99 %序列同源性。于一较佳实施例中，该编 码动物干扰素蛋白的DNA序列系选自于由如SEQIDNos:i、16、18、20、22、24、26、28、30、32、 34、36、38、40、42、44及46所示之DNA序列所组成之群组中至少一者。
[0013]于一实施例中，该编码动物免疫球蛋白IgG-Fc片段的DNA序列与如SEQI!) N〇S:3、48、50、52及54所示之DNA序列其中至少一者具有至少80%序列同源性，较佳者， 具有85 %序列同源性，更佳者，具有90 %序列同源性，甚至是91 %、92 %、93 %、94 %、95 %、 96%、97%、98%、99%序列同源性。于一较佳实施例中，该编码动物免疫球蛋白IgG-Fc片 段的DNA序列选自于由如SEQIDNos:3、48、50、52及54所示之DNA序列所组成之群组中 至少一者。
[00H] 于一实施倒中^?该编码由甘氨酸及丝氨酸组成的连接子（linker)的DNA序列与如 SEQIDMo:5所示之DNA序列具有至少80%序列同源性，较佳者，具有85%序列同源性，更 佳者，具有 90 %序列同源性，甚至是 91 %、92 %、93 %、94%、95 %、96 %、97 %、98 %、99 % 序 列同源性。于一较佳实施例中，该编码由甘氨酸及丝氨酸组成的连接子的DNA序列系具有 如SEQIDNo: 5所示之DNA序列。
[0015] 于一实施例4v该编码动物融合重组型干扰素的DNA序列与如SEQ:丨DNos: 7、56、 58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、 106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、 144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、+166、168、170、172、+174、176、178、180、 182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、 220及222所示之DNA序列具有至少80%序列同源性，较佳者，具有85%序列同源性，更 佳者，具有 90 % 序列同源性，甚至是 91 %、92 %、93 %、94%、95 %、96 %、97 %、98 %、99 % 序 列同源性。于一较佳实施倒中，该编码动物融合重组型千扰素的DNA序列具有如SEQID Nos:7、56、58、60、62、6