邻氨基苯甲酰胺化合物及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001 ] 本发明属药物合成领域，涉及新型邻氨基苯甲酰胺化合物，制备方法和应用。具体 涉及一种含哌啶或哌嗪的邻氨基苯甲酰胺化合物和吡啶类似物，及其制备方法和在医学上 的应用。
【背景技术】
[0002] 报道显示，恶性肿瘤已成为严重危害人民生命健康的常见病。据不完全统计，全世 界每年约有2000万的新发病例；我国每年的新发病例约为160-200万，死亡130万。研究 显示，由于肿瘤早期具有转移的能力，临床诊断原发肿瘤中约50%的患者已产生远位转移， 肿瘤细胞増长快、易变异，从而产生多药耐药，导致化疗失败，据有关统计，其中90%以上与 肿瘤细胞的多药耐药相关，目前临床上应用的抗肿瘤药物远不能满足治疗的要求。
[0003] 分子靶向抗肿瘤药物的研究是当前抗肿瘤药物研究领域的主要潮流和趋势。近年 来，革E向Hedgehog(Hh)信号通路的抗肿瘤药物成为这一领域新的研究热点。Hedgehog(Hh) 信号通路在肿瘤的发生发展中发挥着重要的作用，与人类约1/3的肿瘤有着密切的联系。 有研究报道，异常激活Hh信号传导，将导致髓母细胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、 膀胱癌、卵巢癌等多种肿瘤的发生。Hedgehog是在研究果蝇的发育过程中发现的一种分节 性基因，Hh信号主要是通过跨膜蛋白Ptch和Smo介导向胞内传递。无 Hh信号时，Ptch与 Smo结合，抑制Smo的作用，导致其下游转录因子Gli转录活性的抑制。当有Hh信号时，Hh 与Ptch结合，解除Ptch对Smo的抑制作用，恢复活性的Smo通过级次信号转递，激活Gli 转录活性，启动Hh靶基因的转录和表达。
[0004] 目前在靶向Hh信号通路的抗肿瘤药物研究中，已有多个药物上市或进入临床研 究,如美国Genentech公司的Vismodegid (⑶C-0449)于2012年已被FDA批准上市，用于皮 肤癌的治疗。另外，Erismodegid(LDE225,瑞士 Norvatis 公司）、LEQ_506(瑞士 Norvatis 公司）和LY-2940680 (美国Lilly公司）等正在进行临床II期及III期，临床研究显示对 皮肤癌、脑癌、髓母细胞瘤和其他实体瘤疗效显著。
[0005] 更为有意义的是，Hedgehog信号通路抑制剂在治疗对酿氨酸激酶抑制剂伊马替尼 产生耐药的非小细胞肺癌（CML)患者过程中，不仅能减少CML细胞的数量，还能减少耐伊马 替尼CML细胞的生长，而目前已有抗肿瘤药物耐药性的问题是肿瘤临床治疗面临的重要难 题。因此，研发具有我国自主知识产权的靶向Hh信号通路的抗肿瘤药物，对改善我国肿瘤 患者的经济负担，提高肿瘤临床治疗效果，具有重要的意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供具有良好Hedgehog信号通路抑制作用的新型邻氨基苯甲酰 胺化合物，具体涉及一种含哌啶或哌嗪的邻氨基苯甲酰胺化合物及其吡啶类似物。
[0007] 本发明的另一目的是提供上述邻氨基苯甲酰胺化合物的制备方法，尤其涉及制备 含哌啶或哌嗪的邻氨基苯甲酰胺化合物及其吡啶类似物的方法。
[0008] 本发明的邻氨基苯甲酰胺化合物具有下述通式（I )的结构：
[0014] R2 = H或或苄基
[0015] R3 = H或F或CF3或2-羟基-2-异丙基或3-羟基-3-异戊基或酯基
[0016] 本发明中，优选的化合物具有下述化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9的结构：
[0017]
[0018]
[0021] 本发明所述的化合物通过体外Hedgehog信号通路抑制活性测试，结果显示，所述 的化合物具有良好的Hedgehog信号通路抑制活性，可进一步研制开发为新型的Hedgehog 信号通路抑制剂和抗肿瘤药物。
[0022] 本发明对体外Hedgehog信号通路抑制活性测试，结果显示，本发明中化合物显示 出较好的Hedgehog信号通路抑制活性，其中化合物4和8对于Hh信号通路中的靶基因 Gli 抑制活性IC5。值小于0. 1 μ M。本发明的化合物可以进一步制备Hedgehog信号通路抑制剂。
[0023] 本发明中，所采用的药效学试验方法，是本领域技术人员所熟知的方法；
[0024] 本发明中，所采用的NIH3T3细胞和双荧光素酶报告检测试剂盒是本领域技术人 员可通过市购的途径所获得的。
[0025] 本发明的含哌嗪或哌啶的邻氨基苯甲酰胺化合物和吡啶类似物尤其可制备 Hedgehog信号通路抑制剂和抗肿瘤药物。鉴于异常激活Hh信号传导，将导致髓母细胞瘤、 乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、膀胱癌、卵巢癌等多种肿瘤的发生。本发明所述的恶性肿 瘤包括Hedgehog信号通路异常激活所致的相关肿瘤，包括髓母细胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、 肺癌、结肠癌、膀胱癌、卵巢癌、皮肤癌。
【具体实施方式】
[0026] 实施例1 :合成化合物1，6-[4-[2_(二苄基胺基）苯甲酰基]哌嗪-1-基]-烟酸 乙酯
[0027] 1)合成6-哌嗪基烟酸乙酯
[0028] 6_ 氯烟酸乙酯（12g, 0· 06mol, 1.0 Oequiv)、哌嗪（8. 35g, 0· IOmol, I. 50equiv)溶 解于乙腈（100mL)中。加入碳酸钾（17.878,0.13111〇1，2.0(^1^)，氮气保护下，1001：下回 流12h。TLC监测反应完全，抽滤，蒸干滤液。加入乙酸乙酯、水分液，少量水洗两次，合并有 机层，饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，静置。滤液旋干，即得产品11. 63g (乳白色固体）产 率：86· 6 %。MS (ESI) m/z ([M+H]+) : 236. 1。
[0029] 2)合成N，N-二苄基-2-胺基苯甲酸
[0030] 邻氨基苯甲酸（10.0 g)、苄氯（15. 4g)加入到水（200ml)中，加入碳酸钾（40. 2g)， 加热回流12h，冷却，得到的碱性溶液用DCM(200ml X 3)萃取除去多余的氯苄，水层冰浴下 用浓盐酸调PH至约等于4,乙酸乙酯（200ml X 3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠洗，无水硫 酸钠干燥，减压蒸去溶剂得产品18. 2g，产率79%。MS(ESI)m/z([M+H]+):316. 1。
[0031] 3)合成6-[4-[2_(二苄基胺基）苯甲酰基]哌嗪-1-基]-烟酸乙酯。
[0032] N，N-二苄基-2-胺基苯甲酸2. 0g，EDC/HC1 (2. 4g)加入到THF (50ml)中，室温搅拌 30min，加入6-哌嗪基烟酸乙酯I. 5g，氩气保护，室温搅拌2h，TLC监测反应完全，减压蒸去 THF，加入乙酸乙酯和饱和食盐水各50ml震摇分层，水层EA (50ml X 3)萃取，合并有机层，饱 和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，乙醇重结晶得纯化的产物I. 8g，产率55 %。 MS(ESI)m/z([M+H]+):535.1。1HnmrgoomHz1CDCIS) S8.80(d，J = 1.8Hz，lH)，8.05(dd，J =9. 0, 2. 3Hz, 1H) , 7. 32 - 7. 14 (m, 12H) , 7. 04 (t, J = 7. 2Hz, 2Η) , 6. 54 (d, J =9. 0Hz, 1Η) , 4. 34 (q, J = 7. IHz , 2Η) , 4. 24 (m, 5Η) , 3. 97 (m, 1 Η) , 3. 80 - 3. 69 (m, 1Η), 3. 50 (m, 2Η), 3. 31 - 3. 19 (m, 2Η) ,3.18- 3. 09 (m, 1Η), 1. 37 (t, J = 7. ΙΗζ, 3Η). 〇
[0033] 实施例2:合成化合物2, [1-[2_(苄基胺基）苯甲酰基]-4-[5_(2-羟基丙 烷-2-基）-吡啶-2-基]]哌嗪
[0034] 1)合成[1-[2_ (二苄基胺基）苯甲醜基]_4_ [5_ (2_羟基丙烷_2_基）-批 啶-2-基]]哌嗪。
[0035] 500mg6-[4-[2-(二苄基胺基）苯甲酰基]哌嗪-1-基]-烟酸乙酯，溶 解于THF(15ml)中，氩气保护，冷却至-KTC，用注射器加入碘甲烷的格式试剂 (CH3MgI, 3ml，3. 0M/L)，自然升温至室温，室温下搅拌2h，TLC监测反应完全，饱和氯化铵溶 液（50ml)淬灭反应，分层，水层用乙酸乙酯（50ml X 3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠洗，无 水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗产物420mg，取IOOmg制备薄层分离得纯化的产物40mg。 MS(ESI)m/z([M+H]+) :521. 1。
[0036] 2)合成[1-[2_(苄基胺基）苯甲醜基]-4-[5-(2-羟基丙烷-2-基）-批 啶-2-基]]哌嗪
[0037]