一种环烯醚萜类化合物及其制备方法、制剂与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物化学技术领域，具体涉及一种环烯醚萜类化合物及其制备方法、 制剂与应用。
【背景技术】
[0002] 烟草花叶病毒（azasaic κ/τ?Λ?，TMV)是烟草花叶病等的病原体。TMV的寄 主广泛，能侵染30个科的300多种植物，在烟草、番茄等粮经作物上危害严重，给农业生产 造成巨大的经济损失，被列为分子植物病理学上最重要的十种植物病毒之首。在目前的农 业生产中，化学农药防治TMV应用最为广泛，但化学防治效果有限，且易造成农残超标，无 法满足农业可持续性发展的要求。因此迫切需要开发新型抗病毒制剂。
[0003] 植物在进化过程中合成了类型丰富的具有抗微生物活性的次生代谢产物，它们可 以选择性的抵御包括TMV在内的病原物的侵害。由于是植物本身产生的抗病毒物质，植物 源病毒抑制剂对寄主本身毒性小或没有毒性，作用机制独特且资源丰富。云南素有"植物王 国"的美誉，植物中的生物活性天然产物及其衍生物超过40万种，目前已知173种植物含抗 病毒活性物质。因此，筛选新型植物源抗病毒制剂具有重要意义。
[0004] 病毒对植物产生危害的过程可分为侵染寄主、体内复制和症状表达三个部分。因 此，对其中任何部分的抑制均可减轻植物病毒的危害。另外有些活性物质虽然对这三个部 分没有作用，但却能激活寄主产生系统抗性。同时，许多活性物质表现的抗病毒活性可能是 其中一种或多种机制共同起作用的结果。已有研究表明，许多活性物质防治TMV表现在多 个方面，如对TMV侵染的钝化作用、对TMV侵染的预防保护作用以及对TMV侵染的治疗作用 等。
[0005] 龙胆科獐牙菜属植物主要产于云南、贵州、四川等地，是西南少数民族 常用的植物药源。该属植物共有170种，我国约有80种，主要分布在西南地区，仅云南就 有38种。该属药用植物大多具有清热利胆、强心、舒肝健胃、解毒等功效，用于治疗肝炎、黄 疸型肝炎、肝胆等疾病。本课题组前期曾报道西南獐牙菜中的化合物龙胆苦苷和獐芽菜苷 能够抑制TMV的侵染，表明该属植物中的化合物有较好的抗病毒活性。
【发明内容】
[0006] 本发明的第一目的在于提供一种环烯醚萜类化合物；第二目的在于提供所述的环 烯醚萜类化合物的制备方法；第三目的在于提供所述的环烯醚萜类化合物的制剂；第四目 的在于提供所述的环烯醚萜类化合物的应用。
[0007] 本发明的第一目的是这样实现的，所述的环烯醚萜类化合物是从西南獐牙菜中分 离得到，其分子式为C16H22O11，结构式为：
该化合物命名为：Eustomoside ο
[0008] 本发明的第二目的是这样实现的，是以西南獐牙菜为原料，经原料处理、浸膏提 取、有机溶剂萃取、洗脱、分离步骤制备得到，具体包括： Α、原料处理：取阴干的西南獐牙菜粉碎过50~100目筛备用； Β、浸膏提取：将前处理后的西南獐牙菜中加入固液体积比2~5倍的体积百分浓度 75~85%的甲醇超声提取5~10次，每次3~5h，合并提取液，过滤，减压浓缩提取液至相对密度 为I. 2~1. 3得到浸膏； C、 有机溶剂萃取：浸膏中加入固液体积比1~3倍的水搅拌5~30min至呈悬浮状，用与水 等体积的体积浓度95~100%的二氯甲烷溶液萃取2~5次，每次15~40min，将每次水溶萃取 液合并得到萃取液a ; D、 洗脱：将萃取液a上MCI柱，用体积浓度70~80%的甲醇溶液洗脱，收集得到洗脱液 b，洗脱液b上大孔树脂柱，以体积配比0 :1~1:0的甲醇-水溶液进行梯度洗脱，收集各部分 洗脱液并浓缩，合并相同的部分； E、 分离纯化：D步骤洗脱液的0:1部分经半制备柱分离纯化，即得到所述的环烯醚萜类 化合物--Eustomoside0
[0009] 本发明的第三目的是这样实现的，所述的环烯醚萜类化合物中加入药用辅料和/ 或赋形剂制成水剂、片剂、颗粒剂或微乳剂。
[0010] 本发明的第四目的是这样实现的，所述的环烯醚萜类化合物在制备防治TMV药物 中的应用。
[0011] 本发明运用现代分离技术从西南猜牙菜（ciflcia Burk)中分离得到一 种环稀醚砲类化合物Septemfidoside。实验证明Septemfidoside具有较高的抑制TMV侵 染的活性，其抑制效果接近市售抗烟草花叶病药剂宁南霉素。本发明药物制剂不仅对人畜 无毒、无害，使用安全可靠，而且对防治TMV有较好的效果，可用于制备防治TMV的药物制 剂。
【附图说明】
[0012] 图1为本发明应用效果对比图； 其中：左图为本发明化合物与对照组效果对比；右图为宁南霉素与对照组效果对比。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以 限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
[0014] 本发明所述的环烯醚萜类化合物，是从西南獐牙菜中分离得到，其分子式为 C16H22O11,结构式为：
该化合物命名为：Eustomoside 〇
[0015] 本发明所述的环烯醚萜类化合物的制备方法，是以西南獐牙菜为原料，经原料处 理、浸膏提取、有机溶剂萃取、洗脱、分离步骤制备得到，具体包括： A、 原料处理：取阴干的西南獐牙菜粉碎过50~100目筛备用； B、 浸膏提取：将前处理后的西南獐牙菜中加入固液体积比2~5倍的体积百分浓度 75~85%的甲醇超声提取5~10次，每次3~5h，合并提取液，过滤，减压浓缩提取液至相对密度 为I. 2~1. 3得到浸膏； C、 有机溶剂萃取：浸膏中加入固液体积比1~3倍的水搅拌5~30min至呈悬浮状，用与水 等体积的体积浓度95~100%的二氯甲烷溶液萃取2~5次，每次15~40min，将每次水溶萃取 液合并得到萃取液a ; D、 洗脱：将萃取液a上MCI柱，用体积浓度70~80%的甲醇溶液洗脱，收集得到洗脱液 b，洗脱液b上大孔树脂柱，以体积配比0 :1~1:0的甲醇-水溶液进行梯度洗脱，收集各部分 洗脱液并浓缩，合并相同的部分； E、 分离纯化：D步骤洗脱液的0:1部分经半制备柱分离纯化，即得到所述的环烯醚萜类 化合物--Eustomoside0
[0016] 0步骤中所述的大孔树脂柱为0900、0130、0101、0201或0301中的一种。
[0017] D步骤中所述的甲醇-水溶液的体积配比为0:1，9:1，8:2,6:4,3:7和1:0。
[0018] E步骤中所述的半制备柱为艾杰尔半制备柱、HPLC半制备柱或日本唯美希半制备 柱中的一种。
[0019] 所述的艾杰尔半制备柱进行纯化，采用甲醇/水溶液进行洗脱。
[0020] 本发明所述的环烯醚萜类化合物的制剂为所述的环烯醚萜类化合物中加入药用 辅料和/或赋形剂制成水剂、片剂、颗粒剂或微乳剂。
[0021] 本发明的Eustomoside药物组合物含Eustomoside活性成分0· 5~90%，其余为药 物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0022] 所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药 物制品辅剂。采用制药和食品领域公认的方法制备成各种剂型、如液体制剂（注射剂、混悬 剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂等）、固体制剂（片剂、胶囊剂、颗粒剂，冲剂等）、喷剂、气雾剂等。
[0023] 上述制剂中可含有辅助物质、稳定剂、助湿剂和其他常用的添加剂，如淀粉、蛋白 粉、果胶、蔗糖、糊精、硬脂酸镁、甘露醇、十二烷基苯磺酸钠等。上述的制剂可按照各种制剂 常规的制备工艺制成。
[0024] 本发明的应用为所述的环烯醚萜类化合物在制备防治TMV药物中的应用。
[0025] 在制备防治烟草花叶病毒病应用中的Eustomoside溶液浓度为5~50 μ g/ml。
[0026] 下面以实施例对本发明做进一步说明： 实施例1 取阴干的西南獐牙菜粉碎，粗粉碎过50目筛；用80%甲醇提取5次，每次2 h ;合并提 取液，过滤除渣，合并滤液，然后减压浓缩得相对密度1. 2的浸膏；浸膏加入1倍体积的水搅 拌至呈悬浮状，用浓度98%二氯甲烷溶液萃取2次，每次15 min ;合并萃取液，过MCI脱 色，用体积浓度75%的甲醇洗脱，收集洗脱液；再上D900大孔树脂柱脱糖，用体积配比0:1， 9:1，8:2，6:4，3:7和1:0的甲醇/水（V/V )溶液洗脱，收集洗脱液，经TLC监测，合并相同 的部分，浓缩得浸膏，0:1部分上HPLC进行分离，用70%的甲醇水溶液洗脱，最后艾杰尔半制 备柱进行纯化，用70%的甲醇水溶液洗脱，得到Eustomoside化合物，本实施例制备得到的 化合物鉴定结果如下： 白色粉末，分子式为 C16H22O11; 1H-NmrGOOMHz, CD3OD) : δ H: 2. 02 (1H, ddd, J=15. 0, 8. 0, 2. 0 Hz, H-6b), 2. 30(1Η, ddd, J=15. 0, 1