一种甜叶悬钩子水溶性多糖用于保护肝脏及激活乙醛脱氢酶的应用
【技术领域】
[0001] -种从蔷薇科悬钩子属植物甜叶悬钩子提取的水溶性多糖用于保护肝脏及激活 乙醛脱氢酶的应用，属于医药用途。
【背景技术】
[0002] 乙酸脱氢酶（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH) (EC1. 2. 1. 10) (CAS[9028-91-5])，作为醛脱氢酶的一种，负责催化乙醛氧化为乙酸的反应。在酒精代谢 中起主要作用，广泛存在于各种动物、植物和微生物体内。哺乳动物乙醛脱氢酶根据其亚 细胞定位、结构及动力学特性和原始序列的相似性可以分为三类：第一类存在于细胞质中 (ALDH1)，第二类存在于线粒体中（ALDH2)，第三类则是可诱导性的细胞质的乙醛脱氢酶和 可诱导性的微粒体的乙醛脱氢酶（如ALDH3)。乙醛脱氢酶2(ALDH2)是存在于线粒体内的 广泛参与体内醛类物质氧化的一种醛类氧化酶，ALDH2基因位于第12号染色体，它的主要 多态性位于外显子12的G1510A，正常的等位基因记为ALDH2*1，单碱基突变的等位基因记 为ALDH2*2。突变基因表达的酶中，残基487的谷氨酸变为赖氨酸，造成酶的催化活性基本 丧失。有ALDH2*2突变表达出的酶无法正常代谢乙醇的氧化产物乙醛，血液乙醛浓度增高， 造成一系列饮酒后的不良反应，如脸红、头晕、心跳加快等。而纯合子的ALDH22*2活性近 乎为零。由于ALDH2*2携带者对乙醛代谢较差，有认为乙醛对肝脏的损伤是酒精肝在亚洲 人群中常见的原因。有研究表明，ALDH2突变型患者阿尔茨海默病的发病率更高，ALDH2的 失活导致乙醛的蓄积与乙醇性多发性神经病变有关，ALDH2可减轻神经细胞的氧化应激损 伤，对神经保护具有重要的意义，激活ALDH2将为神经退行性变疾病的治疗提供靶点。同时 又研究提出，ALDH2基因参与了冠状动脉粥样硬化性心脏病（CHD)的发生发展过程，在缺氧 心肌中ALDH2基因下调，ALDH2对氧化刺激导致的神经细胞、内皮细胞损伤有明显的拮抗作 用，而ALDH2基因G487A多态性有可能成为老年CHD发生的独立危险因素。
[0003] 酒精性肝病是由于长期大量饮酒导致的肝脏疾病。初期通常表现为脂肪肝，进而 可发展成酒精性肝炎、肝纤维化和肝硬化。其主要临床特征是恶心、呕吐、黄疸、可有肝脏肿 大和压痛。并可并发肝功能衰竭和上消化道出血等。严重酗酒时可诱发广泛肝细胞坏死， 甚至肝功能衰竭。酒精性肝病是我国常见的肝脏疾病之一，严重危害人民健康。
[0004] 酒精性肝病主要是乙醇及其代谢产物乙醛直接或间接诱导的炎症反应，氧化应 激、肠源性内毒素、炎性介质和营养失衡（尤其是蛋白质-热量营养不良）等多种因素相互 作用的结果。另外，"二次打击"学说认为，酒精因素作为初次打击，通过氧化应激促使反应 性氧化物增加，而诱发肝脏脂肪聚集。在氧化应激相关的脂质过氧化及炎性细胞因子的作 用下，使脂肪变的肝细胞发生第二次打击，造成炎症、坏死和纤维化。乙醛是肝细胞内乙醇 代谢的主要产物，其药理毒性比乙醇更为剧烈。乙醛可通过多种途径作用于肝组织，首先， 乙醛可直接作用于肝组织，对肝脏产生毒性作用。其次，乙醛还可损伤大多数肝细胞的线粒 体和微管，进而引起脂肪酸氧化和肝细胞分泌功能障碍，导致肝细胞内脂肪酸蓄积和分泌 性蛋白贮留。大量研究已经显示乙醛在活体生理状态下能与多种蛋白发生共价结合，形成 稳定的和不稳定的乙醛蛋白加和物（APA)。其形成不但改变了蛋白质的结构，而且造成了 蛋白质功能异常，如蛋白酶失活、DNA修复蛋白功能障碍、谷胱甘肽耗竭、线粒体损伤、氧利 用障碍和胶原蛋白合成增加。而且可作为抗原诱生免疫反应，产生相应抗体，引起肝细胞炎 症、坏死及纤维组织增生。
[0005] 甜叶悬钩子是蔷薇科悬钩子属的一个变种，属于多年生有刺灌木，主要生长于我 国广西省的山区，由于其叶味道甘甜，口感独特，故又称广西甜茶，是广西特有的无毒、低热 量、高甜度的野外珍稀天然植物。在民间有悠久的应用历史，长期以来当地百姓一直以其叶 当茶饮用，也用来代糖加工食品。根据广西中药药物标准记载，甜叶悬钩子具有清热降火、 润肺生津、止咳祛痰的功效。其食用性以及药用性早已为当地民间医药所证实。但是直至 上世纪80年代的全国药物调查中发现，虽然悬钩子植物在我国各地均有分布，但都不具备 广西甜叶悬钩子这种甜味，因此该植物被植物学家李树刚确定为悬钩子的变种，与其它悬 钩子区分来。自上世纪80年代发现该物种以来，我国逐步展开了对甜叶悬钩子的研究，在 其食用和药用等方面获得了一定的进展。研究表明，甜叶悬钩子叶片中含有丰富的必需氨 基酸、黄酮苷、甜叶悬钩子苷、多酚、维生素以及人体所必需的多种微量元素；甜叶悬钩子粗 提物具有降糖、降脂、抗炎、抗过敏、改善皮肤瘙痒等多种药理活性。
[0006] 多糖是一类具有广泛生物活性的天然大分子化合物，广泛分布于自然界高等植 物、藻类、微生物（细菌和真菌）及动物体内。多糖类物质是除蛋白质和核酸之外的又一类 重要的生物大分子，是很多植物药发挥药效的物质基础，植物多糖具有复杂的、多方面的生 物活性和功能，如免疫调节功能、抗感染、抗辐射、抗凝血、降血糖、降血脂、促进核酸与蛋白 质的生物合成以及抗衰老等作用。如甘草多糖具有明显的抗病毒和抗肿瘤作用；黑木耳多 糖、银杏外种皮多糖和芦荟多糖可抗肿瘤和增强人体免疫功能；柴胡多糖具有抗辐射、增强 免疫功能等生物学作用；麦冬多糖具有降血糖及免疫增强作用；爬山虎多糖具有抗病毒和 抗衰老作用；石斛多糖、牡蛎多糖、玉郎伞多糖等植物多糖具有保护急性酒精性肝损伤的作 用，且石斛多糖、玉郎伞多糖可增加肝组织ALDH活性，加速乙醛代谢。目前已有部分天然多 糖类化合物用于临床，显示出良好的疗效，已然成为天然药物及保健品研发中的重要部分。
【发明内容】
[0007] 本发明要解决的技术问题是：从蔷薇科悬钩子属植物甜叶悬钩子提取的水溶性多 糖用于保护肝脏及激活乙醛脱氢酶。
[0008] 本发明的技术方案是：
[0009] 1.从蔷薇科悬钩子属植物甜叶悬钩子提取水溶性多糖
[0010] 将甜叶悬钩子干叶粉碎后，用体积百分数为80% -85%的乙醇水溶液在60-80°C 浸泡80-100min，抽滤，弃滤液，茶渣用去离子水在50-70°C保温浸取两次，每次90-150min， 冷却后抽滤，合并两次滤液，加入相当于浓缩物三倍体积的无水乙醇，4°C静置过夜沉淀，离 心分离，得到沉淀物a，称重，用丙酮、乙醚、乙醇交替洗涤3次，加去离子水溶解，加入相当 于沉淀物a质量的2% -3%的三氯乙酸，于4°C静置90-150min，离心分离，取上清滤液置于 蒸馏水中透析20-30h，每隔8h换一次透析液，透析后的溶液冷冻干燥，即得到甜叶悬钩子 水溶性多糖。
[0011] 2.从蔷薇科悬钩子属植物甜叶悬钩子提取的水溶性多糖的结构特征的检测
[0012] (1)总糖含量、糖醛酸含量、蛋白质含量
[0013] 采用苯酚-硫酸法测定蔷薇科悬钩子属植物甜叶悬钩子提取水溶性多糖、草酸盐 溶果胶类多糖、碱溶性多糖的总糖含量，采用间羟基联苯比色法测定其糖醛酸含量，采用考 马斯亮蓝法测定蛋白质含量，其结果见实施例表1。
[0014] (2)单糖组成
[0015] 采用气相色谱测定蔷薇科悬钩子属植物甜叶悬钩子提取水溶性多糖、 草酸盐溶果胶类多糖、碱溶性多糖单糖组成，结果显示，甜叶悬钩子提取水溶性 多糖主要由核糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖5种单糖组成，其摩尔比为 0.146 : 0.403 : 17.745 : 1.436 : 0.382。
[0016] (3)红外光谱
[0017] 甜叶悬钩子提取水溶性多糖中较