一种降血糖益生菌制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品领域，具体涉及一种降血糖益生菌制剂的制备方法。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是一种全身代谢性疾病，其特征是血糖水平的慢性增高，是由多种环境因 素和遗传因素联合作用导致的胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗引起的疾病。糖尿病不积极治 疗随时间的延长会引发一系列的并发症，如心脑血管疾病、视网膜病变、糖尿病肾病、神经 病变、肢端坏死等。随着经济的发展、饮食结构的改变，糖尿病发病率逐年上升，现在已经成 为严重威胁人类健康的世界公共卫生问题。中国糖尿病患者已经达到9200万，位居世界 第一，79. 4%的人45岁以后有糖尿病，给社会和经济带来沉重的负担。糖尿病分为1型和 2型，1型发病人群主要是青少年，因体内不产胰岛素需终身体外补充胰岛素，2型发病人群 主要为中、老年人，发病原因主要是机体对胰岛素敏感性下降或自身胰岛素分泌相对不足， 95%以上的糖尿病患者属于2型糖尿病。目前，糖尿病仍是一种无法完全治愈的疾病。对糖 尿病的预防采取四级预防措施，一级预防最重要，目的是减少糖尿病的发病率。国际糖尿病 联盟（IDF)提出了糖尿病现代治疗的5个要点，分别是：饮食控制，运动疗法，血糖检测，药 物治疗和糖尿病教育。临床上虽然认识到采用饮食疗法、运动疗法和药物治疗等相结合的 方式治疗糖尿病，但总体上还是以药物治疗为主，主要是胰岛素和口服降糖药，大致分为磺 脲类、双胍类、中药制剂、其他降糖药及辅助用药类，以控制血糖升高，减轻糖尿病的症状， 延缓糖尿病进一步恶化及并发症的出现。
[0003] 有研究表明，肠道菌群在健康者、肥胖者和2型糖尿病者之间的组成存在差异性， 提示肠道菌群是影响机体代谢性疾病病理生理的可能因素，因此通过对肠道菌群的有效调 节来预防或治疗由高脂饮食所引起的代谢性疾病是一行之有效的方法。"益生菌"是机体补 充摄入的具有活性的微生物，可以有效改善肠道菌群的平衡，对宿主产生良好的健康效应。 大量研究表明，益生菌株具有调节体内菌群平衡、提高机体免疫力、降低血清胆固醇、血压、 血糖、抗癌等生理功能。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的之一是为提供一种具有降血糖功能的益生菌制剂及其制备方法，通 过调节肠道菌群来预防或治疗由高脂饮食所引起的代谢性疾病，减少因服用药物而带来的 副作用。
[0005] 本发明提供一种降血糖益生菌制剂，包括嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus)BLCC2-0024,干酷乳杆菌（Lactobacilluscasei)BLCC2_0003 和婴儿双歧杆 菌（Bifidobacteriuminfantis)BLCC3-0002,所述嗜酸乳杆菌BLCC2-0024 已于 2015 年 3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCN0:M2015129;所述干酪乳杆 菌BLCC2-0003,已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC N0:M2015125;所述婴儿双歧杆菌BLCC3-0002,已于2015年3月18日保藏于中国典型培养 物保藏中心，保藏编号CCTCCN0:M2015124。
[0006] 进一步的，所述降血糖益生菌制剂包括粉剂、片剂和胶囊。
[0007] 进一步的，所述降血糖益生菌制剂在预防及辅助降血糖的药物中的应用。
[0008] 本发明还提供一种上述降血糖益生菌制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0009] 取菌株，经斜面培养基活化后，将活化后的菌株转接到一级种子培养基中，制得一 级种子液；然后再将所述一级种子液转接入发酵培养基进行高密度培养；
[0010] 待所述发酵培养基中菌体密度达到10scfu/mL，收集发酵液；
[0011] 将所述发酵液离心，收集获得菌体，加入保护剂，冻干成菌粉；
[0012] 将冻干菌粉按照一定的比例复配，加入低聚糖混合物，混合均匀即得到所述降血 糖益生菌制剂。
[0013] 进一步的，所述菌株包括嗜酸乳杆菌（Lactobacillusacidophilus)BLCC2-0024， 已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCN0:M2015129;干 酷乳杆菌（Lactobacilluscasei)BLCC2_0003,已于2015年3月18日保藏于中国典型培 养物保藏中心，保藏编号CCTCCN0:M2015125 ;婴儿双歧杆菌（Bifidobacteriuminfantis) BLCC3-0002,已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC N0:M2015124〇
[0014] 进一步的，所述活化嗜酸乳杆菌（Lactobacillusacidophilus)BLCC2-0024 和干 酪乳杆菌（Lactobacilluscasei)BLCC2-0003的斜面培养基均为MRS固体培养基，所述 MRS固体培养基以质量分数计包括：葡萄糖2. 0%、柠檬酸铵0. 2%、乙酸钠0. 5%、磷酸氢 二钾0. 5%、硫酸锰0. 02%、硫酸镁0. 05%、蛋白胨1. 0%、牛肉膏1. 0%、酵母膏0. 5%、土 温-800. 1 %和琼脂粉1. 5%，调pH5. 8~6. 0 ;所述一级种子培养基和所述发酵培养基均 为不含琼脂的上述MRS液体培养基；所述MRS固体培养基活化培养条件为：25~40°C培养 22~26h;所述一级种子培养基培养条件为：25~40°C条件下，静置培养12~24h;所述 发酵培养基培养条件为：25~40°C条件下，间歇搅拌培养48~96h，搅拌速度为间歇搅拌 100 ~200r/min，5 ~20min/2h。
[0015] 进一步的，所述活化婴儿双歧杆菌（Bifidobacteriuminfantis)BLCC3-0002 的 斜面培养基为TPY固体培养基，所述TPY固体培养基以质量分数计包括：酪蛋白胨1%、大 豆蛋白胨0.5%、酵母粉0.25%、磷酸氢二钾0.2%、MgCl2 ? 6H20 0.05%、氯化钙0.015%、 ZnS04, 7H20 0.025 %、氯化铁0.01%、L-半胱氨酸盐酸盐0.005 %、葡萄糖1.5%、吐 温-800. 1 %和琼脂粉1. 5%，调节pH至6. 3~6. 6,115°C条件下灭菌20min;所述一级种子 培养基和上述发酵培养基均为不含琼脂的上述TPY液体培养基；所述TPY固体培养基活化 培养条件为：32~40°C厌氧培养20~28h;-级种子培养液培养条件为：32~40°C条件下 静置培养16~30h;发酵培养基培养条件为：28~40 °C，初始pH值为6. 0~7. 0,发酵时间 为48~96h。
[0016] 进一步的，所述一级种子液转接发酵培养基的接种量为卜5%。
[0017] 进一步的，所述保护剂以质量百分比分计，包括：90_98 %的10 %脱脂奶粉和 2-10 %的丙三醇。
[0018] 进一步的，所述冻干菌粉的复配比例为干酪乳杆菌BLCC2-0003 :嗜酸乳杆菌 BLCC2-0024 :婴儿双歧杆菌BLCC3-0002 = 2-4 :2-5 :3-5,所述降血糖益生菌制剂产品中3 株菌菌落总数不少于2X109cfu/g。
[0019] 本发明的有益效果在于：本发明的降血糖益生菌制剂，其有效成分由嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌和婴儿双歧杆菌复配组成，经初步研究结果显示，该降血糖益生菌制剂对糖尿 病及糖尿病并发症中的心脑血管疾病具有预防和辅助治疗的作用，具有广阔的市场前景。 本发明的降血糖益生菌制剂的制备方法，操作简单，易于工业化生产。
[0020] 本发明的嗜酸乳杆菌（Lactobacillusacidophilus)BLCC2-0024 已于2015年3月 18日保藏于中国武汉，武汉大学，中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCN0:M2015129 ; 干酷乳杆菌（Lactobacilluscasei)BLCC2_0003，已于2015年3月18日保藏于中国武 汉，武汉大学，中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCN0:M2015125 ;婴儿双歧杆菌 (Bifidobacteriuminfantis)BLCC3_0002,已于2015年3月18日保藏于中国武汉，武汉大 学，中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCN0:M2015124。
【附图说明】
[0021] 图1本发明的降血糖益生菌制剂预防糖尿病发病动物实验造模后各组血糖情况 图；
[0022] 图2本发明的降血糖益生菌制剂预防糖尿病发病动物实验造模后各组肝糖原情 况图；
[0023] 图3本发明的降血糖益生菌制剂预防糖尿病并发症的动物实验样品保护下血糖 升尚情况；
[0024] 图4本发明的降血糖益生菌制剂预防糖尿病并发症的动物实验样品对高血糖小 鼠体重的影响；
[0025] 图5本发明的降血糖益生菌制剂预防糖尿病并发症的动物实验灌胃样品30d对高 血糖小鼠血液指标的影响。
【具体实施方式】
[0026] 下文将结合具体附图详细描述本发明具体实施例。应当注意的是，下述实施例中 描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合从而达 到更好的技术效果。
[0027] 实施例1 3株益生菌耐受人工胃液和人工肠液能力测定
[0028] 1. 1菌株耐受人工胃液能力的测定
[0029] 人工胃液的配制：准确量取20ml的lmol/L盐酸加蒸馏水调节pH值为2. 5,加入 胃蛋白酶（lg/l〇〇ml)，充分溶解后，用孔径为0. 22微米滤膜过滤除菌即可。
[0030] 耐受能力测定：菌液按2% (v/v)接种于模拟胃液中，在37°C条件下培养2h，取样 进行平板菌落计数，以〇h活菌数为对照，计算菌株存活率。
[0031] 1. 2菌株耐受人工肠液能力的测定
[0032] 人