后，一次性加入7. 2mmol K2CO3Ig,搅拌至室温后继续搅拌lh。加入3mmol N-氯乙酰基苯 胺0. 98g和6mmol碘化钾0. 5g，升温至80°C反应12h，TLC监测反应直至反应完全。冷却至 室温，加入约6倍反应液体积的蒸馏水，滴加稀盐酸调节溶液pH值3-4,搅拌lOmin，抽滤， 冷水水洗数次，红外干燥，粗产品用乙醇重结晶得2- (5-氟-2, 3-二氧代吲哚啉-H -N-苯 基乙酰胺。熔点：220. 1 ~220. 6°C，收率80%。11?(1?1)〇11_1:3348，1731，1648，1251.1!1-NMR(CDC1 3, 300MHz) : δ 9. 98 (1H，s，-NH)，7. 23-7. 48 (5H，m，-C6H5)，6. 94-7. 70 (3H，m，-C6H3)， 4. 51 (2H, s, -CH2). 13C-NMR (CDCl3, 75MHz) : 182. 17, 164. 60, 158. 79, 152. 34, 142. 54, 138. 89, 138. 11, 132. 06, 128. 80, 127. 57, 124. 52, 120. 28, 118. 24, 102. 26, 43. 55. Anal. Calcd. for C16H11FN2O3IC, 64. 43 ；H, 3. 72 ；0, 16. 09. Found:C, 64. 35 ；H, 3. 60 ；0, 15. 83. MS m/z:299(M+l) o
[0033] (f) 2-(5-氯-2, 3-二氧代吲哚啉-H-N-苯基乙酰胺
[0034] 于50mL圆底烧瓶中加入30mL DMF，冰浴下加入3mmol 5-氯吲噪满酮lg，搅拌溶 解后，一次性加入7. 2mmol K2CO3Ig,搅拌至室温后继续搅拌lh。加入3mmol N-氯乙酰基苯 胺I. 07g和6mmol碘化钾0. 5g，升温至80°C反应10h，TLC监测反应直至反应完全。冷却至 室温，加入约6倍反应液体积的蒸馏水，滴加稀盐酸调节溶液pH值3-4,搅拌10min，抽滤， 冷水水洗数次，红外干燥，粗产品用乙醇重结晶得2- (5-氯-2, 3-二氧代吲哚啉-H -N-苯 基乙酰胺。熔点：236-239 °C，收率 85%。IR(KBr)CnT ^3358, 1731，1650, 1253.4-^^( CDCl3, 300MHz) : δ 9. 97 (1H，s，-NH)，7. 23-7. 52 (5H，m，-C6H5)，6. 93-7. 67 (3H，m，-C6H3)，4. 51 (2H，s，-CH2) · 13C-NMR (CDCl3, 75MHz) : 182. 12, 164. 49, 158. 20, 149. 08, 140. 37, 138. 07， 137. 64, 129. 21, 128. 80, 127. 21, 124. 64, 124. 35, 120. 20, 112. 40, 43. 55. Anal. Calcd. for C16H11ClN2O3 = C, 61. 06 ；H, 3. 52 ；0, 15. 25. Found: C, 60. 80 ；H, 3. 41 ；0, 15. 09. MS m/ z:315(M+l) 〇
[0035] (g) 2-(5-溴-2, 3-二氧代吲哚啉-H-N-苯基乙酰胺
[0036] 于50mL圆底烧瓶中加入30mL DMF，冰浴下加入3mmol 5-溴吲噪满酮lg，搅拌溶 解后，一次性加入7. 2mmol K2CO3Ig,搅拌至室温后继续搅拌lh。加入3mmol N-氯乙酰基苯 胺I. 33g和6mmol碘化钾0. 5g，升温至80°C反应10h，TLC监测反应直至反应完全。冷却至 室温，加入约6倍反应液体积的蒸馏水，滴加稀盐酸调节溶液pH值3-4,搅拌lOmin，抽滤， 冷水水洗数次，红外干燥，粗产品用乙醇重结晶得2- (5-溴-2, 3-二氧代吲哚啉-H -N-苯 基乙酰胺。熔点：248 ~249°C，收率 81 %。IR(KBr)CnT ^3329, 1731，1649, 1251. 1H-NMR (CDCl3, 300MHz) : δ 10. 06 (1H，s，-NH)，7. 26-7. 51 (5H，m，-C6H5)，6. 93-7. 92 (3H，m，-C6H3)，4 ? 52 (2H，s，-CH2). 13C-NMR(O)Cl3, 75MHz) :180. 60, 164. 51，157. 80, 151. 83, 138. 71，138. 27， 128. 85, 126. 02, 124. 31, 124. 28, 120. 56, 120. 31, 114. 56, 109. 09, 43. 52. . Anal. Calcd. for C16H11BrN2O3 = C, 53. 50 ；H, 3. 09 ；0, 13. 36. Found: C, 53. 44 ；H, 3. 19 ；0, 13. 22. MS m/ z:360(M+l) 〇
[0037] 实施例2抗惊厥药理实验和神经毒性实验
[0038] 对本发明提供的所有化合物进行筛选，评价它们在癫痫中防治化学和电学诱发的 癫痫的能力。最大电休克MES试验，用来显示抗癫痫药物对抗全身癫痫发作的效力。通过 对小鼠用药对鼠口服（P.0)本发明化合物来抑制或防止惊厥，用小鼠作旋转棒运动失调试 验以评价各药剂的神经毒性，测出TD50以及保护指数PI.，最后还用小鼠试验了受试化合 物在最大电休克（MES)试验癫痫发作阈值试验中的生物活性及神经毒性。
[0039] (1)最大电惊厥实验（MES)药理实验
[0040] 药理实验动物采用昆明种小鼠（18_22g)，雌雄兼用，实验前一周饲养，实验室保持 温度于25 ± 2°C，相对湿度45-65 %，通风良好，除实验时间外均可以自由进食和饮水。所有 的被试化合物、阳性对照药（苯巴比妥，卡马西平）均溶解在DMS0/0. 9% NaCl = 1:19 (vol/ vol)混合溶液中，小鼠腹腔注射给药，其中，空白组腹腔注射（10mg/kg)，合成的化合物 (100mg/kg)和对照药氟西汀（10mg/kg)，给药剂量均为0. 05mL/20g，具体剂量按小鼠的体 重为计。
[0041] 方法：采用美国国立卫生院的抗癫痫药开发方案实验鼠（18-22g)随机选取，5只 一组，雌雄兼用。最大电惊厥仪器设置 ：50mA，60Hz的交流电作用，耳电极单次刺激时间 0. 2s。在小鼠耳部边缘涂上生理盐水后用鳄鱼夹夹住耳朵边缘进行电刺激，出现后肢强直 的可以用于下步实验。在各组小鼠腹腔注射药物30min后，对其进行相同的条件电刺激。后 肢不出现强直的表明该化合物具有抗最大电惊厥活性。
[0042] (2)神经毒性实验
[0043] 给药30min后，将小鼠置于刻花的直径为30mm的转棒仪上，转速6转/min，记录 2min内掉落的次数，以此表示其运动协调能力。每只小鼠测定3次，每次间隔时间为30min， 取3次测量的平均值。
[0044] 结果
[0045] (1)化合物a-f通过最大电惊厥实验（MES)模型，以电刺激来模拟癫痫发作时的状 态，评估其抗惊厥抗癫痫活性，其初筛结果见表1。从表格数据可以看出：6个化合物在给药 剂量l〇〇mg/kg下表现出抗惊厥活性，说明它们具有抗癫痫作用。在旋转法实验中，所有化 合物在相对应的给药剂量下并未表现出神经毒性，化合物具有低神经毒性。
[0046] 表1化合物a_f抗惊厥I期药理实验结果
[0049] 其中：a为最大电惊厥实验（动物保护数/被试动物数）；
[0050] bS转棒毒性测试（呈现毒性动物数/被试动物数）；
[0051 ] ^为被试化合物4小时内代谢完全或排除体外。
[0052] 对其中的抗最大电惊厥活性较好7个化合物a_g进行二期药理活性筛选，计算 其ED5。，TD 5。和PI值，测试结果见表2。从表格数据分析得出：B引噪啉的苯环上给电子基 团抗最大电惊厥活性顺序为：p-CH 3>-H>〇-CH3>m-CH3，其中化合物d(p-CH 3)具有最好的抗 惊厥活性（ED5。= 91.3mg/kg，TD5Q>1000mg/kg)，且其保护指数（PI = TD5Q/ED5Q，>11)比上 市药苯巴比妥和卡马西平安全性都高。吲哚啉苯环上卤素基团抗最大的电惊厥活性为： p-F>p-Cl>p-Br，表2中由于p-Br的结果不明显，略去，其中化合物e(p-f)具有最好的抗惊 厥活性（ED 5。= 88. Omg/kg，TD 5Q>800mg/kg)，其保护指数（PI = TD5Q/ED5。，>9. 1)，安全性高 于上市药苯巴比妥。
[0053] 表2化合物a-f抗惊厥II期药理实验结果
[0055] 其中：a ED5。：半数有效剂量mg/kg ; b TD5。：半数中毒剂量mg/kg ;
[0056] c PI:保护指数（TD5i]/ED5。）； d括号内数95%在置信区间。
【主权项】
1. 一种由式（I)表示的2,3_二氧代吲哚啉-I-N-苯基乙酰胺衍生物：式中，R选自为H或处于苯环任意取代位置及任意取代数的卤素、烷基。2. 根据权利要求1所述的2, 3-二氧代吲哚啉-I-N-苯基乙酰胺衍生物，其特征在于所 述的 R 为 〇_CH3、m-CH3、p-CH3、p-F、p-Cl、p-Br 〇3. -种如权利要求1或2所述的2, 3-二氧代吲哚啉-I-N-苯基乙酰胺衍生物可药用 酸的加成盐，其特征在于：其可药用酸包括：盐酸、硫酸、磷酸、马来酸、柠檬酸。4. 药物组合物，其包含作为活性成份的依据权利要求1或2中的2,3_二氧代吲哚 啉-I-N-苯基乙酰胺衍生物以及一种或多种惰性的、无毒性的可药用载体。5. -种制备如权利要求1或2所述的2, 3-二氧代吲哚啉-I-N-苯基乙酰胺衍生物，其 特征在于以通式II为起始物质：与吲哚满酮或者取代的吲哚满酮反应，用乙醇重结晶得到由通式I表示的化合物。6. 根据权利要求5所述的2, 3-二氧代吲哚啉-I-N-苯基乙酰胺衍生物的制备方法，其 特征在于：所述与吲哚满酮或者取代的吲哚满酮反应的具体步骤如下： 于50mL圆底烧瓶中加入30mLDMF，冰浴下加入3mmol吲哚满酮或者取代的吲哚满酮 lg，搅拌溶解后，一次性加入7. 2mmol K2CO3Ig,搅拌至室温后继续搅拌lh，加入3mmol N-氯 乙酰基苯胺Ig和6mmol碘化钾0. 5g，升温至80°C反应8h，TLC监测反应直至反应完全；冷 却至室温，加入约6倍反应液体积的蒸馏水，滴加稀盐酸调节溶液pH值3-4,搅拌lOmin，抽 滤，冷水水洗数次，红外干燥，粗产品用乙醇重结晶得化合物I。7. -种根据权利要求1或2所述的2, 3-二氧代吲哚啉-I-N-苯基乙酰胺衍生物在制 备抗癫痫药中的应用。8. -种根据权利要求3所述的2, 3-二氧代吲哚啉-I-N-苯基乙酰胺衍生物可药用酸 的加成盐在制备抗癫痫药中的应用。9. 一种根据权利要求4所述的2, 3-二氧代吲哚啉-I-N-苯基乙酰胺衍生物药物组合 物在制备抗癫痫药中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种抗惊厥的新型化合物及其可药物盐，它是由式(I)表示的2，3-二氧代吲哚啉-1-N-苯基乙酰胺衍生物：其合成方法为以通式II为起始物质：(II)与吲哚满酮或者取代的吲哚满酮反应，最后用乙醇重结晶得到由通式I表示的化合物，具有合成步骤简单，收率高的特点，本发明所合成的新化合物的药理实验结果表明在100mg/kg剂量下显示抗惊厥作用，具有抗惊厥、抗癫痫作用活性，而且神经毒性很低；本发明的化合物的最大的优点是神经毒性很低，从小鼠急性毒性的实验结果表明本发明化合物的全身毒性也很低，是一种有效地作为抗惊厥的药物。
【IPC分类】C07D209/38, A61P25/08, A61K31/403
【公开号】CN105061292
【申请号】CN201510422168
【发明人】关丽萍, 徐楠楠, 甄兴华, 曲有乐, 韩焱
【申请人】浙江海洋学院
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年7月17日