一种体外创面模型及其使用方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种体外创面模型及其使用方法，适用于评价含抗菌成分的创面敷料 的抗菌活性。
【背景技术】
[0002] 创面是微生物生长繁殖的理想环境，为微生物提供了生长表面以及充足的营养供 给。在临床上，创面感染控制一直是医院感染控制的主要内容。抗菌创面敷料中的抗菌成 分具有接触杀菌或抑制微生物繁殖的功能，可明显减少临床创面感染的机会，从而达到安 全有效的治疗目的。目前，抗菌创面敷料已经在临床上得到了广泛应用，其在创面感染控制 方面，尤其是慢性创面感染控制方面的表现也得到了广泛认可。
[0003]抗菌活性是指含抗菌成分的接触性创面敷料对微生物的抑制或杀灭能力，抗菌创 面敷料中的抗菌成分，如Ag离子，其本身的抗菌功能已经得到了一致认同。但是，含抗菌成 分创面敷料的抗菌活性尚没有公认的评价方法。虽然目前国内外已经有一些抗菌创面敷料 抗菌活性的相关研究报导，但是这些研究基本都没有考虑创面微生物的动态生长状态。
[0004] 在临床上，不同的创面类型以及创面愈合的不同时期，其创面渗出液的成分及渗 出量的多少、创面温度、创面感染的微生物类型及感染程度等都是不同的。相应地，用于创 面治疗的抗菌敷料的抗菌成分类型及其释放动力学等也会存在较大差异。显然，如果用相 同评价方法（包括试验方法和试验参数）对不同敷料的抗菌活性进行评价存在一定不合理 性。
【发明内容】
[0005] 针对上述问题，本发明的目的之一在于提供一种体外创面模型，该模型可以对微 生物持续供给新鲜的营养物，从而模拟临床创面微生物的实际生长状态，为抗菌敷料的抗 菌活性评价提供了试验平台；本发明的目的之二在于提供一种体外创面模型的使用方法， 该使用方法为适合于上述模型的抗菌活性评价试验方法，充分模拟创面微生物的实际存在 状态，以得出科学的评价结果。
[0006] 本发明的目的之一是通过以下技术方案实现的：一种体外创面模型，包括渗出液 存放瓶、栗、反应器和废液瓶，所述栗用于将模拟创面渗出液输送至反应器，所述反应器用 于承载检查片、吸收垫、载菌滤膜和样片以进行抗菌活性评价试验。
[0007] 所述的反应器上并列设置有多个隔室，每一个隔室上均设有流出孔，栗的出口的 数量与所述隔室的数量相等，栗的进口与栗的出口--对应；栗的进口与渗出液存放瓶之 间通过渗出液输送管路相连通，栗的出口分别通过栗管与反应器的隔室一一对应的相连 通，反应器上的流出孔通过废液流出管路与废液瓶相连通。
[0008] 进一步的技术方案为：所述的渗出液输送管路上设置有一个玻璃滴斗，玻璃滴斗 的顶端和底端均与渗出液输送管路相连通。玻璃滴斗连接模拟创面渗出液输送管路，用于 观察模拟创面渗出液的流动情况，玻璃滴斗能耐受压力蒸汽灭菌过程。为保证玻璃滴斗的 稳妥，玻璃滴斗的下方应设置一个支撑架对其进行支撑。
[0009] 进一步的技术方案为：所述的反应器包括基座，所述的隔室设置在基座上，隔室呈 凹槽状，隔室内设置有用于放置检查片的支架，所述流出孔设置在隔室的一端；每一个隔室 的上方设置有一个顶盖，顶盖与基座之间通过螺纹连接件相连接，顶盖上设置有第一通孔 并在第一通孔处安装有Mininert阀，每一根所述栗管与反应器的连接端均设置有一个无 菌针，无菌针插入所述Mininert阀中。所述的支架是隔室底面上的突起物，用来挡住检查 片，使检查片处于隔室的特定位置，由于进行抗菌活性评价试验时隔室是倾斜的，支架可防 止检查片滑落到隔室底部。
[0010] 基座的材质为聚砜（一种热塑性树脂），基座上隔室的数量为六个，每个隔室长 10. 16cm、宽3. 05cm;顶盖的材质为聚碳酸酯，每个顶盖两端对称的设有两个螺纹孔，顶盖 通过尼龙螺丝钉扣紧到反应器基座上。
[0011] 进一步的技术方案为：所述顶盖上还设置有第二通孔并在第二通孔处安装有细菌 过滤器。
[0012] 进一步的技术方案为：所述顶盖与基座的配合面上装有密封圈。所述的密封圈采 用0型密封圈。
[0013] 进一步的技术方案为：在所述基座的底面上设置有高度可调的支撑脚。通过调节 一侧支撑脚的高度，可以调整反应器的基座与水平面的倾角，使流出孔所处的一端低于另 一端，从而使废液能够顺利从流出孔流出。
[0014] 进一步的技术方案为：所述的渗出液存放瓶和废液瓶均为细口试剂瓶，渗出液存 放瓶和废液瓶的瓶盖上均设有安装细菌过滤器的接口；渗出液存放瓶上设有进气口，进气 口处设有空气过滤器，废液瓶上设有出气口，出气口处设有空气过滤器。因为渗出液存放瓶 是要流出模拟创面渗出液的，所以必须有进气口以保持瓶内压力的平衡，进气口处的空气 过滤器是保证渗出液存放瓶进气无菌的；因为废液瓶是要流进废液的，所以需要有出气口 以保持瓶内压力的平衡，出气口处的空气过滤器是保证废液瓶出气无菌的。试剂瓶能耐受 压力蒸汽灭菌过程，细菌过滤器也能耐受压力蒸汽灭菌过程。
[0015] 进一步的技术方案为：所述的渗出液输送管路和废液流出管路均为硅橡胶管路。
[0016] 进一步的技术方案为：所述的栗为蠕动栗。蠕动栗能使反应器上的多个隔室构成 的通道以拟定流量同时运行，栗管能够耐受压力蒸汽灭菌过程。
[0017] 本发明的目的之二是通过以下技术方案实现的：一种体外创面模型的使用方法， 包括以下步骤：
[0018] 步骤（1):将吸收垫粘附到检查片上，向反应器的每一个隔室中分别插入一个检 查片，然后将反应器的各部件组装完成，具体操作为将隔室的顶盖安装到基座上，向每一个 顶盖上安装一个细菌过滤器和一个Mininert阀。
[0019] 步骤（2):将渗出液输送管路、栗管、废液流出管路和反应器组装到一起；将玻璃 滴斗连接到渗出液输送管路，将栗管连接到渗出液输送管路，将废液流出管路连接到反应 器的流出孔上。
[0020] 步骤（3):用铝箱包裹所有暴露的管路末端和开口，将步骤（2)组装好的反应器放 置于一个灭菌托盘，用铝箱覆盖整个灭菌托盘，对步骤（2)组装好的反应器进行灭菌处理。 灭菌处理的方法可以采用121°C灭菌20min。
[0021] 步骤⑷：将接种悬液接种到滤膜上，并静置接种物使其干燥，每一种试验菌株制 作的载菌滤膜的数量，等于试验样片和对照样片数量的总和；若是反应器上设置六个隔室， 反应器上放置三个无菌试验样片和三个对照样片，则共制作六个载菌滤膜。
[0022] 步骤（5):将冷却后的反应器放置于水平位置，以无菌操作的方式打开各隔室的 顶盖，先用模拟创面渗出液使吸收垫湿化，然后将载菌滤膜接种面朝上放置到吸收垫上，然 后，将无菌试验样片和对照样片分别放置在载菌滤膜的上面，将顶盖安装到基座上。
[0023] 步骤（6):调整反应器的基座与水平面的倾角，使流出孔所处的一端低于另一端， 一般将反应器基座的倾斜角度调整至10°即可。
[0024] 步骤（7):以无菌操作的方式将模拟创面渗出液倒入渗出液存放瓶中，将渗出液 输送管路连接到渗出液存放瓶上；将栗管通过栗头，栗管末端分别连接隔室，具体操作为将 栗管通过蠕动栗的栗头，栗管末端分别连接一个无菌针，以无菌操作的方式将无菌针插入 隔室顶盖上的Mininert阀中，将废液流出管路的末端连接到废液瓶。
[0025] 步骤（8):打开栗（蠕动栗）并设定拟定流速，让模拟创面渗出液缓慢滴到检查片 上，模拟创面渗出液被吸收垫吸收，从而对载菌滤膜上面的接种微生物供应营养，在拟定温 度条件下，让试验样片或者对照样片对接种微生物作用至拟定时间。
[0026] 步骤（9):打开顶盖，以无菌操作的方式用无菌镊子取下载菌滤膜和与其组合在 一起的试验样片或者对照样片，放入无菌磷酸盐缓冲液中，对微生物进行洗脱、培养和计 数，计算每个试验样片或者对照样片与载菌滤膜组合中的微生物数量。
[0027] 步骤（10):结果表征：用Log降低值（LRV)表示试验样品的抗菌活性，用下式计算 LRV：
[0028] LRV=Iogi0N1-Iog10N2
[0029] 式中：
[0030] N1-对照样片上的平均微生物数量，单位为CFU;
[0031] N2-试验样片上的平均微生物数量，单位为C