一种制备白僵菌素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域中一种制备白僵菌素的方法。
【背景技术】
[0002] 白僵菌素是一种六元环状缩酯肽化合物，由3个甲基苯丙氨酸和（D)-Ci-羟基异 戊酸残基交替相连而成，分子式为C45H57N3O9，分子量为786。白僵菌素是真菌的次级代谢产 物，Hamil于1969年首次从球孢白僵菌的菌丝体中提取得到。至今为止，已经从Beauveria bassiana和几种其他的真菌中分离得到了白僵菌素。白僵菌素对蚊子幼虫、卤虫、绿头苍蝇 和鞘翅目害虫等有杀伤作用。目前，白僵菌素主要被用作杀虫剂和除菌剂等。
[0003] 近年来，越来越多的研究表明白僵菌素除了杀虫之外还具有很多生物活性。2000 年，Nilanonta报道了其同系物的抗结核和痕原虫的活性。2004年，Fukuda从Beauveria sp.FKI-1366中分离得到了白僵菌素及其3个同系物，并与咪康唑配合进行了抗Candida albicans活性的测定，结果表明通过配合白僵菌素使用咪康唑，不仅能够抑制普通白假丝 酵母，而且能够有效抑制对咪康唑有抗药性的白假丝酵母。2004年，Jow等发现白僵菌素能 够诱导人白血病细胞的凋亡。2005年，Lin等对白僵菌素诱导人肺癌细胞凋亡的机制进行 了研究。然而，白僵菌素对哺乳动物的毒性较大，可影响动物或人类的健康，可引起鼠和人 类肿瘤细胞系显著的细胞死亡，并且强效和特异的抑制鼠肝脏微体中胆固醇酰基转移酶活 性。2003年，Dombrink-Kurtzman还发现白僵菌素能够诱导火鸡外周血液中淋巴细胞的凋 亡，从而影响其免疫系统，白僵菌素的毒性极大地限制了它的应用。
[0004] 白僵菌素与低剂量的酮康唑产生互动效果，不仅大大提高了抗菌效率（尤其 对耐药菌），同时也加大了抗耐药菌的抗菌谱并降低了毒副作用，并且为杀真菌病原菌 (fungicidal)而非抑制（fungistasis) 〇
[0005] 基于以上优点，白僵菌素具有成为药物的潜在能力。为了能够制备白僵菌素用于 以后的研究，需要提高白僵菌素的产量水平。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是提供一种制备白僵菌素的方法，该方法的白僵菌素 产量高。
[0007] 本发明所提供的制备白僵菌素的方法，包括在装有玉米渣培养基的发酵容器中固 体发酵层出镰孢（Fusariumproliferatum)CGMCC3. 1777,收集固体发酵产物得到白僵菌素 的步骤；所述玉米渣培养基是用水和玉米渣制成的含水量为50% (质量百分含量）的固体 培养基；将所述发酵容器置于24°C-28°C、相对湿度为50% -100%的环境中进行所述固体 发酵。
[0008] 上述方法中，所述玉米渔是将玉米籽粒粉碎至Imm3颗粒得到的玉米籽粒粉碎物。
[0009] 上述方法中，所述固体发酵可进行20天。
[0010] 上述方法中，所述固体发酵包括在所述玉米渣培养基中接入所述层出镰孢 (Fusariumproliferatum)CGMCC3. 1777的第1天震动所述发酵容器使所述发酵容器内 的培养物混匀，在所述玉米渔培养基中接入所述层出镰孢（Fusariumproliferatum) CGMCC3. 1777的第4天、第8天和第16天均进行如下步骤：震动所述发酵容器使所述发酵 容器内的培养物破碎（破碎至8mm3-25mm3块状物，其中8mm3-15mm3的块状物的体积占所述 8mm3-25mm3块状物总体积的70%，大于15mm3至25mm3的块状物的体积占所述8mm3-25mm3块 状物总体积的30%)并使所述培养物混匀，所述固体发酵的其它时间均静置培养。其中，在 所述玉米渔培养基中接入所述层出镰孢（Fusariumproliferatum)CGMCC3. 1777的当天记 为第〇天。
[0011] 上述方法中，将所述发酵容器置于28°C、相对湿度为50% -100%的环境中进行所 述固体发酵。
[0012] 上述方法中，将所述发酵容器置于28°C、相对湿度为50%的环境中进行所述固体 发酵。
[0013] 上述方法还可包括从所述固体发酵产物中提取得到白僵菌素的步骤。
[0014] 上述方法中，所述装有玉米渣培养基的发酵容器中，玉米渣培养基的体积可为所 述发酵容器容积的2/5。
[0015] 实验证明，在装有用水和玉米渣制成的含水量为50% (质量百分含量）的固 体培养基（玉米渔培养基）的发酵容器中固体发酵层出镰孢（Fusariumproliferatum) CGMCC3. 1777,固体发酵产物中的白僵菌素含量为3405mg/g固体发酵产物。其中，该固 体发酵在将发酵容器置于28 °C、相对湿度为50%的环境中进行，在所述玉米渣培养基中 接入所述层出镰孢（Fusariumproliferatum)CGMCC3. 1777的第1天震动所述发酵容器 使所述发酵容器内的培养物混匀，在所述玉米渔培养基中接入所述层出镰孢（Fusarium proliferatum)CGMCC3. 1777的第4天、第8天和第16天均进行如下步骤：震动所述发酵 容器使所述发酵容器内的培养物破碎（破碎至8mm3-25mm3块状物）并使所述培养物混匀， 所述固体发酵的其它时间均静置培养。其中，在所述玉米渣培养基中接入所述层出镰孢 (Fusariumproliferatum)CGMCC3. 1777 的当天记为第 0 天。
【附图说明】
[0016] 图1为标准品高效液相图谱。
[0017] 图2为实验编号为3中的待检测样品商效液相图谱。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为 常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0019]下述实施例中的层出鎌抱（Fusariumproliferatum)CGMCC3. 1777(CGMCC菌种目 录第四版（2012)，科学技术文献出版社）在2012年之前公众可从中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号）获得， 其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC3. 1777。
[0020] 下述实施例中所用的培养基如下：
[0021] Yro液体培养基：10g酵母膏，20g蛋白胨，20g葡萄糖，用蒸馏水定容至1000ml，调 pH7. 0 ~7. 2,115°C灭菌 30min。
[0022] YPD固体培养基：IOg酵母膏，20g蛋白胨，20g葡萄糖，20g琼脂，用蒸馏水定容至 1000ml，调pH7. 0 ~7. 2,115°C灭菌 30min。
[0023] 玉米渣培养基：用水和玉米渣（该玉米渣是将玉米籽粒粉碎至Imm3颗粒得到的玉 米籽粒粉碎物）制成含水量为50% (质量百分含量）的固体培