一种新型细菌菌株及其培养方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及菌株领域，具体涉及一种新型细菌菌株及其培养方法和应用。
【背景技术】
[0002] 根结线虫（Meloidogynespp.)是一种高度专化型的杂食性植物病原线虫，其寄主 十分广泛，常为害瓜类、茄果类、豆类及萝卜、莴苣、白菜等30多种蔬菜，同时又加重了土传 真菌性病害和部分细菌性病害。在我国南方根结线虫分布最广，危害最大。近年来，随着农 业种植结构的调整和全球性气候变暖，保护地作物栽培面积迅速发展，同时也为南方根结 线虫的发生、发展提供了适宜的环境，使得土壤中的根结线虫得以积聚增殖，发病田的寄主 常年减产15%-20%，严重时达到70%以上。从世界范围来看，根结线虫病的危害和蔓延有 日趋加重的趋势，因此有关根结线虫病的研究越来越受到各国的重视。目前，在线虫的防治 中化学防治仍占主导地位，但化学杀线剂对线虫的非特异性、对非靶标生物的高毒性以及 污染环境等问题，是很多杀线剂被禁用。同时抗性品种的应用目前还不广泛。因此人们除 急需探索一些高效、低毒、低残留、高选择性的杀线剂外，重点移向从生态角度寻求新方法， 生物防治就是其中之一。
[0003] 在根结线虫的生防上可供利用的微生物种类和其他生物因素很多，包括真菌、细 菌、放线菌、病毒甚至高等植物等等。其中生防细菌资源极为丰富，因其具有对环境友好 的优点使之成为根结线虫病害防控技术研究的热点。目前对南方根结线虫具有防效的 根际细菌主要有：焚光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens)、球形芽孢杆菌（Bacillus sphaericus)、枯草芽抱杆菌（Bacillussubtilis)、放射性土壤杆菌（Agrobacterium radiobacter)以及致金色假单胞菌（Pseudomonasaureofaciens)等，防治效果大部分 超过40%。其中，假单胞菌属（Pseudomonasspp.)是微生物的重要类群，也是分布最广 的微生物之一。一些假单胞菌属细菌在对植物寄生线虫防治方面表现出很大的潜力。对 线虫有抑制或毒杀作用的假单胞菌还有：P.aeruginosa，P.chlororaphis，P.cepacia， P.gladioli，P.picketti，P.mendocina。通常一些植物寄生线虫需要寄主植物产生的某种 促进卵孵化的因子，而特定根围的根际细菌，可消耗根分泌物或改变分泌形式，从而影响这 类线虫的发育。Westcotiii等认为，施入铜绿假单胞菌P.aeruginosa后，小环线虫的卵很 快就会停止发育，推测是细菌影响植物根系的分泌物导致的。而利用恶臭假单胞菌或恶臭 假单胞菌的代谢产物对番茄种子进行处理，来防治南方根结线虫的方法尚未有报道。
【发明内容】
[0004] 针对上述问题，本发明通过系统筛选获得通过系统筛选获得一株细菌，利用该菌 或该菌的代谢产物处理番茄种子，可诱导番茄在种子萌发和生长期间产生对南方根结线虫 的抗性，从而解决了根结线虫病的问题。
[0005] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
[0006] -种新型细菌菌株，所述菌株为恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida)Sneb821，保 藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路 1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2015年4月21日；保藏登记入册编号： CGMCCNo. 10729。恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida)Sneb821是从中国辽宁省沈阳市康 平县试验田中筛选出的一株对番茄具有强诱导活性的细菌菌株。
[0007] 上述新型细菌菌株的培养方法，包括如下步骤：
[0008] S1、按质量百分比称取：酵母浸膏0. 1% -0.2%、蛋白胨0.5% -0.6%、牛肉浸膏 0. 3 % -0. 4%、蔗糖1 % -2 %，余下为蒸馏水混合后，得液体培养基；
[0009] S2、将步骤S1所得的液体培养基按每瓶150mL的比例分装于250mL的三角瓶 内，分装完成后将上述菌株接种于液体培养基上PH6. 8-7. 0,温度25-28 °C，摇床转速 150r?min\发酵2-3d，得发酵原液。
[0010] 优选的，发酵时间为3d。
[0011] 上述的一种新型细菌菌株可用于诱导番茄产生对南方根结线虫的抗性。
[0012] 上述的一种新型细菌菌株可用于制作番茄种子处理剂，所述番茄种子处理剂包含 有效量的步骤S2所得的发酵液原液。
[0013] 其中，本发明通过研究发现，从土壤中筛选出多株具有诱导番茄抗南方根结线虫 的细菌菌株，其中恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida)Sneb821效果较好，且相对稳定。
[0014] 本发明具有以下有益效果：
[0015] 本发明的恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida)Sneb821或其代谢物具有对番前的 诱导活性，可用于番茄的种子处理，不仅可促进番茄植株和根部的生长，同时对南方根结线 虫根结的形成具有很大的抑制作用，解决了根结线虫防治的难题。
【具体实施方式】
[0016] 为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步 详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发 明。
[0017] 实施例1
[0018] 恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida)Sneb821 的培养
[0019] 将恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida)Sneb821的菌株接种到试管培养基上，培 养基配方为牛肉膏蛋白胨培养基，即成分：牛肉浸膏3g，酵母浸膏lg，蛋白胨10g，鹿糖10g， 琼脂17-20g，加蒸馏水至1000mL。28°C培养3d，获得试管种。
[0020] 再将试管种接种到250mL三角瓶（每瓶装150mL)液体培养基中，培养基配方为： 以重量百分比计，酵母浸膏〇. 1% _〇. 2%、蛋白胨0. 5% -0.6%、牛肉浸膏0. 3% -0.4%、蔗 糖1% -2%，余下为蒸馏水，pH为6. 8-7. 0,发酵温度为25-28°C，摇床转速150r?min\发 酵时间2-3d。形成的发酵液或发酵液的制成品可以直接或间接处理番茄种子。被处理的番 茄种子可以减轻由根结线虫病害所造成的危害。
[0021] 实施例2
[0022] 恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida)Sneb821的发酵基本同实施例1，不同之处 是将液体培养的菌种接种到1000L的发酵罐进行发酵，在28°C下培养，pH为7. 0,发酵3d。
[0023]实施例3
[0024] 恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida)Sneb821发酵产品防治南方根结线虫田间效 果试验
[0025] 本试验分别在辽宁省铁岭市李千户镇和辽宁省盘锦市高升镇温室大棚进行田间