一种联合型支原体检测试剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域领域，特别涉及一种联合型支原体检测试剂及其制备方 法。
【背景技术】
[0002] 支原体是性传播性泌尿生殖道疾病的常见病原体。检出率占性病人群的40~ 70%，支原体感染可导致泌尿生殖道炎、前列腺炎、盆腔炎、男性不育、女性不孕、绒毛腺炎 和低出生体重儿等疾病。与泌尿生殖道感染有关的主要是分解尿素支原体和人型支原体两 种，约有20-30%的非淋菌性尿道炎的病人，是由解脲支原体（UU)和人型支原体（MH)引起 的，是非淋菌性尿道炎及宫颈炎的第二大致病菌。因此，解脲支原体和人型支原体的检测在 临床上具有重要的意义。
[0003] 目前，检测解脲支原体和人型支原体的方法有特异性抗体检测法、PCR法、 SouthernBlot法和分离培养法等。这些方法都各有其优缺点，其中，免疫学检测方法容易 出现交叉反应，PCR法容易出现假阴性和假阳性，而SouthernBlot法对实验技术要求较 高，不适合在医院内使用。
[0004] 临床上常用的检测方法是分离培养法。国内有关泌尿生殖道支原体培养的实际应 用和研究显示，支原体的鉴定主要采用液体培养法。虽然液体培养法使用方便、快捷、容易 判断，但是这种方法只能从液体颜色的改变来推断支原体是否存在，假阳性率高，准确性不 高。而固体培养法则可以通过显微镜观察到人型支原体和解脲脲原体的菌落，从而确证支 原体的存在，较好地解决临床标本假阳性率高的问题。但是固体培养法判读结果的时间较 长，因而需要时间较长才能对UU和MH引起的泌尿道生殖道感染进行确诊，不利于疾病的诊 断和治疗。因此，需要研究出一种能够同时快速检测出解脲性支原体和人型支原体的检测 试剂。
【发明内容】
[0005] 本发明解决的技术问题是提供一种联合型支原体检测试剂及其制备方法，能够同 时快速检测出解脲性支原体和人型支原体，方法简单、时间短、准确性强，稳定性好。
[0006] 本发明的技术方案是，一种联合型支原体检测试剂，由下述成分组成：
[0007] 酵母蛋白胨 6. 5~10g 氨苄青霉素钠盐 0.015~0.025g L-精氨酸 0.5~l.〇g 乙酸亚铊 0.001~0.003g 琼脂粉 4~12g 尿素 0. 02~0.lg 水解乳蛋白 2.25~2.75g 丝胶蛋白 0. 01~0. 05g 二氯酚磺酞溶液 0.017~0.023g 京尼平酸 0. 003~0? 006g 蟾蜍总甙 0.001~O.Olg 抑菌剂 10~15ml。
[0008] 进一步地，所述抑菌剂为18%薄荷水煎剂，薄荷水煎剂可以有效的抑制金黄色葡 萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、白假丝酵母的真菌、以及其他杂菌的成长。
[0009] 进一步地，所述二氯酚磺酞溶液的浓度为0. 04%，二氯酚磺酞溶液为指示剂，当培 养基中二氯酚磺酞从黄色变成红色即可证明有解脲型支原体和人型支原体存在。
[0010] 其中，所述的酵母蛋白胨提供支原体生长所需的碳氮源、能量、维生素B族；水解 乳蛋白和丝胶蛋白含有各种多肽、生长因子、激素等，这些物质对促进支原体的繁殖和生长 都是很重要的因素，丝胶蛋白避免了血清带来的污染，极大地降低了成本，提高了细胞培养 体系的稳定性；氨苄青霉素钠盐抑制有害病毒，有利于抑制其他细菌生长，维持均衡的渗透 压：琼脂粉是培养基的凝固剂；L-精氨酸是作为人型支原体分解利用的能源，尿素是作为 解脲型支原体分解利用的能源；二氯酚磺酞溶液为指示剂，当培养基中二氯酚磺酞从黄色 变成红色即可证明有解脲型支原体和人型支原体存在；京尼平酸能广泛抑制革兰氏阴、阳 性菌的生长；蟾蜍总甙对变形杆菌、绿脓杆菌、四联球菌、白色葡萄球菌、卡他球菌有抑制作 用，薄荷水煎剂可以有效的抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、白假丝 酵母的真菌、以及其他杂菌的成长。
[0011] 所述的一种联合型支原体检测试剂的制备方法，包括以下步骤：
[0012] 1)将琼脂粉溶解于200ml蒸馏水中，高压灭菌，得到溶液I，保持溶液I温度在 45~50°C，备用；
[0013] 2)将丝胶蛋白、酵母蛋白胨、氨苄青霉素钠盐、L-精氨酸、乙酸亚铭、尿素、水解乳 蛋白加入到500ml蒸馏水中，混匀，加温至45~50°C，待溶解后，过滤杂质，得到溶液II，备 用；
[0014] 3)调节溶液IIpH至6.0~6. 3,用压力蒸汽灭菌器在112°C压力蒸汽灭菌，灭菌时 长35~45min，保持温度45~50°C，备用；
[0015] 4)将溶液I与溶液II合并，加入二氯酚磺酞溶液、京尼平酸、蟾蜍总甙、抑菌剂，加 入蒸馏水至1500ml，混匀，无菌条件下通过孔径为0. 25ym的超微滤膜过滤，倾注于无菌平 皿中，待其凝固，4°C密封保存备用。
[0016]与现有技术相比，本发明具有以下优点：（1)本发明检测试剂的培养基营养丰富、 配制简单；（2)与单一支原体检测试剂比较，能够同时快速检测出解脲性支原体和人型支 原体，选择性强、变色灵敏、检出率高、污染小，临床应用效果满意；（3)检测方法简单、时间 短、准确性强，灵敏度高、特异性强、稳定性好。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合【具体实施方式】来进一步详细说明本发明。
[0018] 实施例1 :
[0019] -种联合型支原体检测试剂，由下述成分组成：
[0020] 酵母蛋白脑 6. 5g 氨苄青霉素钠盐 〇. 015g L-精氨酸 0. 5g 乙酸亚铊 0. 001g 琼脂粉 4g 尿素 〇. 〇2g 水解乳蛋白 2.25g 丝胶蛋白 O.Olg 二氯酚磺酞溶液 〇. 〇17g 京尼平酸 0. 003g 蟾蜍总甙 0. 001g 抑菌剂 10ml。
[0021] 其中，所述抑菌剂为18%薄荷水煎剂，薄荷水煎剂可以有效的抑制金黄色葡萄球 菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、白假丝酵母的真菌、以及其他杂菌的成长；所述二氯 酚磺酞溶液的浓度为〇. 04%，二氯酚磺酞溶液为指示剂，当培养基中二氯酚磺酞从黄色变 成红色即可证明有解脲型支原体和人型支原体存在。
[0022] -种联合型支原体检测试剂的制备方法，包括以下步骤：
[0023] 1)将琼脂粉溶解于200ml蒸馏水中，高压灭菌，得到溶液I，保持溶液I温度在 45°C，备用；
[0024] 2)将丝胶蛋白、酵母蛋白胨、氨苄青霉素钠盐、L-精氨酸、乙酸亚铊、尿素、水解乳 蛋白加入到500ml蒸馏水中，混匀，加温至45°C，待溶解后，过滤杂质，得到溶液II，备用；
[0025] 3)调节